Фото извращенец и спамеры: topbloger — LiveJournal

(картинка: http://www.travel-earth.com)

По поводу непристойных фотожаб вокруг трупа Турчинского.

Кто ещё не в курсе истории, подробно можно прочесть, например, на Lurkmore (ссылка) или, в кастрированном варианте, в WikiPedia (ссылка). Кому лень читать много текста, я расскажу кратко.

Несколько дней назад умер шоумен Владимир Турчинский, довольно положительный персонаж нашего эфира. Ничем смертельным не болел, умер внезапно. Было ему всего лишь 46 лет. Короче, обычная такая небольшая трагедия, в нашей жизни время от времени такие события случаются.

Интересное началось дальше. Неизвестное пока лицо сфотографировало труп покойника и разместило фотографию в Интернете. На фотографию трупа тут же появилась масса фотожаб: труп Турчинского с накрашенными губами, труп Турчинского, танцующий на рождественской открыточке, труп Турчинского на Титанике…

…Излишне говорить, что немедленно на горизонте нарисовались моралофаги, которые сочли подобные шутки над покойным верхом цинизма. Место в первых рядах колонны фарисеев застолбил себе Владимир Соловьёв. Цитирую избранные места (источник):

«Степень низости и подлости становится уже такой, что и у видавших виды мужиков начинают ходить желваки и кулаки сжимаются…

…когда в мирное время, просто так, „для прикола“ в сети появляются фотографии и фото приколы с мертвым Володей Турчинским, то возникает осознанное и холодное желание найти и уничтожить этих выродков…

…диагноз очевиден — отсутствие души — кадавры духа — слуги сатаны — одержимые бесом — человеческое обличье никого не должно вводить в заблуждение…

…Разместивший их в сети (может быть он же) — фото извращенец и спамеры…

…После поимки мерзавцев — психиатрическое освидетельствование… После, заключение на принудительное лечение в психиатрическое заведение, с правом переосвидетельствования лет через 6. Или в монастырь — на вечное служение и замаливание грехов…»

Надо отметить, что капельку ненависти своим пламенным текстом Соловьёву в сердцах читателей возбудить удалось. Как водится, нашлись желающие оторвать вебхудожникам руки, а потом расстрелять негодяев у позорного столба. В целом, однако, Живой Журнал воспринял требования Соловьёва довольно спокойно. Дескать, да, фотожабы несколько бестактны. Но таких фотожаб в Интернете — железнодорожный эшелон и маленькая тележка. Десять жаб больше, десять жаб меньше — разницы никакой. В конце концов, не от фотожабы Турчинский умер.

Теперь давайте посмотрим на ситуацию трезво. С позиции «кому выгодно».

Что мы наблюдаем в Интернете сейчас? Мы наблюдаем серьёзную волну негатива, направленную против чиновников. Интернет, в отличие от федеральных СМИ, правительством не контролируется, и «замолчать» в нём что бы то ни было невозможно. Это является болью в заднице для огромного числа государственных деятелей.

Из свежих примеров: видеообращение капитана ДПС, которого руководство пытается упечь в психиатрическую лечебницу (ссылка) и рассказ практикующего дальнобойщика о недавних событиях на федеральной трассе «Дон» (ссылка).

В машине я езжу много, в пути слушаю, как правило, Вести FM. Про видеообращение гаишника я там не слышал вообще, а про трассу Дон слышал много, но… сугубо положительные вещи, в духе рапортов из советских колхозов. Самоцензура и формат, да.

Короче, при слове «Интернет» сейчас у ряда чиновников руки самопроизвольно сжимаются в кулаки. Регулярно появляются предложения оснастить пользователей Интернета виртуальными намордниками, чтобы они не клеветали на уважаемых людей. До настоящего момента, однако, подобные тоталитарные идеи звучали, в основном, из уст разного рода церковных и государственных деятелей: люди же, имеющие отношение к IT (за исключением Евгения Касперского) ввод цензуры не поддерживали ни разу.

Так вот. Если бы я был чиновником госбезопасности, я бы, пожалуй, счёл разумным устроить на этом фоне провокацию. Послал бы сотрудника сфотографировать труп Турчинского, а потом закинул бы фотографию на Двач, присовокупив к ней одну-две бесталанных фотожаб, для затравки. Анонимность — это улица с двусторонним движением, ага.

Дальше мне осталось бы только подождать, пока известные люди начнут пиариться на костях, требуя убить авторов коллажей. После чего я мог бы мягко, вполголоса, под ковром, попытаться протолкнуть законопроект об ограничении анонимности в Интернете.

Теперь два момента. Во-первых, моя версия случившегося, разумеется, не более чем версия. Однако Двачик лежал все выходные и сейчас, на утро понедельника, всё ещё лежит (пруфлинк). Кому это в первую очередь выгодно я уже написал.

Во-вторых, очень характерны призывы Соловьёва отправлять шутников не в суд, а именно в психиатрическую лечебницу. Как мы помним, во времена СССР «карательная психиатрия» практиковалась довольно широко.

Ведь если посадить человека в тюрьму — будет шум, скандал, пикеты в поддержку политзаключённого. А вот в больницу можно упечь тихо и аккуратно. Был неудобный человек — стал напичканный лекарствами овощ. Безо всяких там дурацких аппеляций, без судов по правам человека и без права на амнистию. Без права на переписку с волей, опять таки.

И, главное, всё гуманно: не мучаем человека, а, наоборот, лечим его. Замечательный тоталитарный механизм.

В общем, подытоживая вышесказанное, я счёл нужным сделать в своём профайле следующее объявление:

«Я официально разрешаю модераторам Интернет-ресурсов поступать с любыми фотожабами на меня (включая посмертные), а также с любой другой негативной информацией обо мне по своему усмотрению: стирать или оставлять в публичном доступе».

Призываю читателей последовать моему примеру.

Скажу больше. Владимир Турчинский, насколько я могу судить по передачам с его участием, обладал сильным характером и хорошим чувством юмора. Поэтому я уверен: будь он сейчас жив, он бы не стал ни подавать на шутников в суд, ни даже бить им лица. Как гласит народная мудрость, «грязи бояться — в Интернет не ходить».

источник — olegmakarenko.ru
[5 ссылок 241 комментариев 10400 посещений]
читать полный текст со всеми комментариями

Пошли на хуй толерасты — Mors certa, vita incerta

Этот псто я задумывал давно. Слабонервным, толерастам, интеллигентам лучше не читать. Данный текст просто мои мысли вслух, никого троллить я не собираюсь. 

В двух своих предыдущих блогах я не скрывал что против толерастии, терпил и прочей хуйни. Собсна, поржать над смертью человека или сотен людей это не проблема. Не важно каких людей. Я вообще считаю, что в современном обществе личное дело каждого, что и о ком думать/говорить. Конечно, последствия не всегда бывают положительные, но это уже другой вопрос. Смерть я привёл как пример, как один из главных факторов негодуэ толерастов. Можно еще упомянуть религию, да что угодно.

Не буду много рассуждать по поводу таких людей как я. Обычно, типичное не быдло (ну для тех кто не в теме, «не» тут постольку поскольку) вешает на нас ярлыки, по поводу хуёвого воспитания, стремления выделиться чем-то ввиду отсутствия мозга, желания выехать (читай попиариться) за счёт горя других, зависть, называют нас лицемерами and more. Молчу уж о том, какие при отзывах о нас используются слова, эпитеты, отзывы о наших родственниках и родных (и это всё не быдло, ну вы помните). Боюсь конечно таких людей разочаровать, но таким как мы, похуй абсолютно на подобные высеры, и затроллить нас даже теоретически невозможно (ну  большинство из нас, ок, за всех говорить не буду). Но всё это в конечном счёте к делу не относится. Просто как ремарка. Псто про другое совсем.

Псто как раз про этих самых терпил и лицемеров, которые населяют наше общество и Интернет в частности. Опять же повторюсь, никого мне на хуй не всралось учить тут и троллить, у самих мозги есть, только частная точка зрения.

Читая на кинопоиске комментарии о смерти Турчинского, я просто ржал. Школота (пора запомнить, этим термином я охаживаю не только и не столько детей, сколько ебланов по уровню развития) вообще охуевшая и смешная. Писать аббревиатуру RIP не зная её значения это конечно ок, но ставить этого долбаёба в пример, называть его хорошим человеком (не зная его), примером для подражания и тем более пейсдатым актёром это алес. Нет у этой страны будущего.

Дык вот. Терпилы, вы на что рассчитывайте, отписываясь у таких как я и публикуя слезливые псто об очередном умершем мудаке? Понятно на что, на те самые топы во втором случае, и чисто посраться и показать какое вы быдло в первом, хотя конечно быдлом вы себя не считайте. Высшая каста бля.

*подрочил на фотки трупа Турчинского*

 

Дык вот, о чём я. Наше двуликое общество очень хорошо умеет поныть о случаях несправедливости, гибели и травмах людей. Но когда эти случаи получают резонанс. Типа хромого слона. Ребята, ходите бухать в ночные клубы, оставляя детей на бабушек и дедушек, а потом обгорайте там, что бы специально для вас, показно, вызывали самолёт МЧС и везли в Бурденко. Смешно? А то! Вы, дерьмоеды, смотрите на гибель людей на улицах, более того, вместо помощи тем кому она нужна, вы снимайте их смерть и травмы на телефоны. И кто, блядь, после этого ценичен и неадекватен, не воспитан и прочая: я, всегда готовый помочь не на словах в блогах/форумах а на деле, или вы, трясущие яйцами и пиздами за то, что труп Турчинского показали в сети?

 

Простой пример. Недавно совсем было. Тупая пизда на машине сбила двух школьниц. Я конечно понимаю, что она не подошла к ним в силу своей тупости, но до приезда скорой, все проходили мимо, причём взрослые люди. Это нормально? НИКТО не подошёл. Не подошли такие как вы, сраные толерасты. Другой пример. Девушка потеряла сознание в метро и упала на пути между вагонов прибывшего на станцию поезда. Что сделали люди вокруг, видевшие это? Никто не кинулся держать двери, никто не стал звонить и сигнализировать машинисту, все тупо стояли и смотрели, а некоторые еще и снимали на мобильники. Бля, быдлятское общество, с тобой всё в порядке? Хорошо спится, кошмары не мучают? И после этого, меня кто-то смеет упрекать в какой-то нетолерастии. На хуй бы вам не пойти?

Можно долго ещё говорить, но я подведу черту. Почему у меня такая позиция по жизни к обществу, своему государству (не стране, она ни в чём не виновата) и прочая? Да потому что есть такие как вы, ебучее общество, которое своей двуличностью, лицемерием, толерастией и прочей хуитой, жутко бесите. Да даже не в этом дело, кирпичами я не сру по этому поводу. Просто это неправильно. И я показываю вам ваши же ошибки, своим вызывающим мнением. Только доходит до единиц, к сожалению.

Подумайте об этом.

 

Турчинского убили врачи? | Свежие новости The Moscow Post

Автор: Саша Суровицкая, 29 Декабря 2009 12:38

Часто бывает так, что мы становимся заложниками обстоятельств, и последствия могут быть очень разными. А наша медицина и платная, а тем более государственная очень часто оставляет желать лучшего, а ошибки врачей могут привести к летальному исходу.

По полученным данным в смерти телеведущего Владимира Турчинского может быть виновен врач, который делал ему последнюю операцию, с подробностями корреспондент The Moscow Post. На настоящий момент врачу грозит запрет на медицинскую практику.

Напомним, что в Турчинскому накануне его смерти делали операцию по очистке крови, в клинике, в которой проходила процедура, была проведена проверка. В итоге выяснилось, что в процессе проведения процедуры плазмафереза была совершена врачебная ошибка.

Но на настоящий момент пока достоверно не установлено, что именно она и привела к смерти Владимира Турчинского, в январе 2010 года дело Турчинского будет рассмотрено в суде.

46-летний ведущий скоропостижно скончался 16 декабря в своем загородном доме. Еще утром он почувствовал себя плохо, потом потерял сознание и упал. Прибывшие через несколько минут медики уже не смогли вернуть его к жизни.

Установлена официальная причина смерти шоумена Владимира Турчинского. Артист умер от одного из проявлений ишемической болезни сердца — острой коронарной недостаточности. У спортсменов, особенно бодибилдеров, как правило, развивается дилатационная кардиомиопатия (увеличение сердца). 18 декабря с Турчинским прощались друзья, коллеги и поклонники в церкви Успения Пресвятой Богородицы в Вешняках на востоке Москвы.

Подписывайтесь на наши каналы ЯНДЕКС.ДЗЕН, ПУЛЬС, GOOGLE NEWS.

Играть в браузерные мини-игры онлайн на Zarium бесплатно

Играть в игры без флэш плеера

Наш сайт предоставляет геймерам доступ к огромной коллекции игр для взрослых или детей, где представлены как логические, так и приключенческие забавы.

Тетрис, стрелялки, головоломки, аркады, карточные и настольные игры – все это и многое другое можно найти на нашем сайте. Будьте уверены, что сможете отыскать подходящую, даже если на вашем компьютере нет flash-плеера.

Поиск любимой игры не займёт у вас много времени. Специально для удобства пользователей все развлечения разделены на категории в соответствии с жанрами. Коллекция, включающая несколько тысяч браузерных игр, постоянно пополняется новинками, появляющимися в игровой индустрии.

Отличительные черты

Главная особенность, которая привлекает внимание огромного количества геймеров, состоит в том, что все забавы на нашем сайте доступны совершенно бесплатно. Забудьте про какие-либо ограничения и просто наслаждайтесь увлекательным игровым процессом. Выбирайте подходящие развлечения, основываясь на отзывах других игроков, либо отдайте предпочтение новым играм в браузере, после чего обязательно поделитесь своим опытом и впечатлениями.

Несмотря на то, что обычные пользователи навряд ли могут заметить разницу между разными технологиями, которые используются в конкретной игре, разработки подобного рода можно по праву считать настоящим прорывом в области виртуальных развлечений. При этом игроки могут запускать их на самых различных платформах. За внешней красочной оболочкой увлекательного игрового процесса стоит титанический труд разработчиков, создающих поистине качественный продукт, способный порадовать даже самых привередливых геймеров. Такие усилия вполне оправданы, ведь игры данной категории можно запустить в любое время без необходимости обновления программы Adobe на ПК.

Доступные категории

На нашем сайте пользователи могут найти следующие категории игр:

• Гонки, являющиеся наиболее популярными как среди игроков, так и среди разработчиков. Данная категория характеризуется высокой степенью реалистичности и детализации.
• Мистические развлечения пользуются не меньшим спросом у пользователей. Благодаря таким играм каждый пользователь сможет перенестись в древний замок, где царит таинственная атмосфера мистики и волшебства, почувствовать себя кровожадным вампиром, встретиться с различными монстрами и т.д.

• Логические развлечения популярны среди фанатов развивающих игр, предпочитающих проводить время, разгадывая головоломки и демонстрируя эрудицию.
• Детские игры, включающие две категории: для мальчиков и для девочек, помогут самым юным пользователям познакомиться с интересными персонажами, освоить различные навыки и развить фантазию.

Поскольку каталог сайта просто огромен, пользователям рекомендуется обратить внимание на подсказки по категориям. Это позволит сразу перейти в нужный раздел и отыскать интересующее вас развлечение. Найдя именно то, что соответствует вашим предпочтениям, загрузите забаву и внимательно прочтите правила.

Популярнейшие игры

У нас вы найдете развлечения, которые стали любимыми для миллионов пользователей. Они выделены в отдельную категорию, так что вы без труда сможете найти и загрузить любую. Среди них:

• Энгри Бердс;
• Пазлы;
• Забавы на двоих;
• Бродилки;
• Развлечения типа «три в ряд» и многое другое.

Подобные игры позволят геймерам не только повеселиться от души, но и провести время с пользой для мышления, логики, сообразительности и внимания.

Наличие множества уровней, в каждом из которых степень сложности задачи, стоящей перед игроком, только возрастает, позволяет постоянно поддерживать интерес геймера.

Совершите путешествие по нашему сайту для того, чтобы не только найти уже знакомые и любимые игры, но и открыть для себя новые и не менее увлекательные развлечения. Без проблем загружайте их на своем компьютере и отправляйтесь в мир ярких впечатлений и незабываемых эмоций.

Плановые отключения электроэнергии в Сочи 07 февраля

В связи с планово-предупредительным ремонтом в рамках текущей эксплуатации электрооборудования возможно ограничение подачи электроэнергии на перечисленных ниже улицах. Данные мероприятия необходимы для предупреждения нарушений электроснабжения и призваны обеспечить надежное электроснабжение.

7 февраля с 08:00 до 20:00 (в течение нескольких часов из указанного временного промежутка): п. Красная Поляна ул. Турчинского, ул. Первомайский тупик, с. Бестужевское ул. 10 лет октября, ул. Бестужева, ул. Брянская, ул. Веринская, ул. Дубровая, ул. Клубная, ул. Пастушечья, ул. Пензенская, ул. Тихая, ул. Чайная, СТ «Луч», СТ «Магнолия»,

7 февраля с 08:00 до 20:00 (в течение нескольких часов из указанного временного промежутка): СТ «Ромашка», ул. Витебская, ул. Вологодская, ул. Мясникяна, ул. Налбандяна, ул. Светогорская, ул. Центральная, с. Молдовка ул. Днестровская, ул. Темрюкская, ул. Тимашевская, ул. Верхнениколаевская, ул. Заречная, ул. Междуреченская, ул. Мостовая, ул. Николаевская, ул. Псебайская, ул. Скальная, ул. Фрунзе, ул. Тульская, СТ «Юг».

7 февраля с 08:00 до 19:00 (в течение нескольких часов из указанного временного промежутка): ул. Сухумское шоссе, пер. Тихий, Дарвина, Искры (частично), ул. Краснодонская, пер. Алекский, пер. Бараташвили, ул. Джапаридзе (частично), ул. Армянская, пер. Армянский, пер. Комбинатовский, ул. Зелентрест, Ручей Де Симона, Юбилейная (частично), с. Прогресс (частично), ул.

Сухумское шоссе, пер. Тихий, Дарвина, Искры (частично).

С 22:00 7 февраля до 06:00 8 февраля (в течение нескольких часов из указанного временного промежутка): с. Пластунка, с. Барановка (сочинская), ул. Джапаридзе, ул. Леселидзе, ул. Абовяна, пер. Юртовский, ул. Вишневая, пер. Вишневый, пер. Совхозный, ул. Пластунская, ул. Высокогорная, ул. Армянская.

С 22:00 7 февраля до 06:00 8 февраля (в течение нескольких часов из указанного временного промежутка): ул. Краснодонская, ул. Высокогорная, Октябрьская.

7 февраля с 08:00 до 19:00 (в течение нескольких часов из указанного временного промежутка): пер. Теневой, ул. Альпийская (частично), ул. Красная (частично).

Сочинские электрические сети приносят жителям извинения за временные неудобства. Дополнительную информацию можно получить по телефону горячей линии 8 800 220 0 220

На Кубани ремонтируют ведущие к лечебным учреждениям дороги

Краснодар, 23 апреля – Юг Times. В Краснодарском крае продолжается ремонт объектов, включенных в нацпроект «Безопасные и качественные автомобильные дороги». Всего в регионе в 2019-2020 годах отремонтируют 18 км дорог, которые ведут к учреждениям здравоохранения.

Как сообщает пресс-служба администрации Краснодарского края, в краевом центре в прошлом году отремонтировали улицу Бургасскую на участке от Димитрова до Айвазовского – здесь расположен клинический онкологический диспансер №1.

В министерстве транспорта и дорожного хозяйства Краснодарского края рассказали о том, что в 2020 году планируют ремонтные работы на улицах Краснодара имени Академика Лукьяненко, Красных Партизан, имени 40-летия Победы и Московской. Там располагаются детские больницы, ККБ №2, БСМП, и железнодорожная больница.

В Сочи в прошлом году привели в порядок более двух км дорог, ведущих к медучреждениям. В поселке Красная Поляна по улице Вознесенской проходит подъезд к горбольнице №8, а на улице 50 Лет СССР в Хостинском районе расположена больница №3. Там дорожники поменяли верхний слой асфальтобетона, нанесли разметку и установили дорожные знаки.

На текущий год планируют ремонтировать улицу Турчинского, Трудовой Славы, и Молодежную. Там находятся восьмая городская поликлиника и поликлиника №4. Уже завершены работы по улице имени Чебрикова, которая ведет к горбольнице №4 и к перинатальному центру.

В Новороссийске же в рамках нацпроекта в прошлом году обновили улицу лейтенанта Шмидта, которая идет к станции скорой помощи и к онкологическому диспансеру. В этом году собираются отремонтировать еще шесть таких объектов: участок на Кирова в селе Цемдолина, часть Промышленной в Абрау-Дюрсо, Первомайскую, Революции 1905 года, Карла Маркса и Красную в станице Натухаевской. Все они ведут к ФАПам, детской городской поликлинике, горбольнице, кожно-венерологическому диспансеру или местную амбулаторию. 

За всеми важными новостями следите в «Одноклассниках» и на канале «Яндекс. Дзен»

aristarhovpiv — LiveJournal

Жизнь актера трудна и непредсказуема. Невозможно знать заранее, когда придет настоящий успех, а когда госпожа Удача от тебя отвернется. Это ли не знать голливудской звезде Харрисону Форду, которому после 8-летнего актерского «простоя» удалось стать самым высокооплачиваемым актером последних 12 месяцев.

66-летний актер, звезда киноэпопеи про Индиану Джонса, занявший первую строчку в списке самых хорошо зарабатывающих актеров 2008-2009 года, не вызывал особого интереса в течение 8 лет. В период с 2000 по 2008 год он снялся всего в четырех фильмах, ни один из которых не произвел фурора в прокате. Однако все изменилось, когда Харрисону Форду довелось сыграть главную роль в картине «Индиана Джонс и Королевство xрустального черепа» и заключить выгодную сделку со студией Paramount. В результате с июня 2008 по июнь 2009 года актер заработал 65 млн долларов, что поставило его выше других, более молодых и популярных актеров.

На втором месте с прибылью в 55 млн долларов в составленном списке разместился Адам Сэндлер. За прошлый год у актера были две успешные работы ( «Не шутите с Зоханом» и «Сказки на ночь»), а при составлении рейтинга учитывалась и оплата игры Сэндлера в выходящем на экран фильме «Смешные люди».

Замыкает тройку лидеров Уилл Смит, чья игра в последние несколько лет оплачивается самыми высокими гонорарами. На этот раз актера отличили фильмы «Хэнкок» и «Семь жизней», которые принесли ему 45 млн долларов. Примечательно, что среди самых высокооплачиваемых актеров в первой десятке, помимо 33-летнего А.Сэндлера, находятся одни «ветераны». Так, чернокожий король юмора Эдди Мерфи занял 4-ю позицию, за ним следует неустанно снимающийся Николас Кейдж, а замыкают десятку Брэд Питт и Джонни Депп.

Харрисон Форд (65 млн долл.)
Адам Сэндлер (55 млн долл.)
Уилл Смит (45 млн долл.)
Эдди Мерфи (40 млн долл.)
Николас Кейдж (40 млн долл.)
Том Хэнкс (35 млн долл.)
Том Круз (30 млн долл.)
Джимм Керри (28 млн долл.)
Брэд Питт (28 млн долл.)
Джонни Депп (27 млн долл. )

2010-05-20 в 21:51:02

Привет!

 

Лето наступает своими лучами солнца и тёплыми днями на самые сладкие места, это определённо радует! Все мы гораздо все актеры голливуда фото чаще выходим на улицу, отдыхаем, гуляем, наслаждаемся погодой, ездим с друзьями на вечеринки!

 

По этому поводу, ДРУЖНОЕ ТАКСИ объявляет все актеры голливуда фото акцию — КАЖДАЯ 10 поездка теперь совершенно БЕСПЛАТНО!

 

Прямо жена ивана урганта сейчас позвони по номеру ДРУЖНОГО ТАКСИ транспортный налог — (812) 926-11-99 и узнай у оператора подробности! Езди сам и советуй друзьям — больше удовольствия, больше бесплатных поездок на иномарках ДРУЖНОГО ТАКСИ!

 

Если отдыхать, то с ДРУЗЬЯМИ!

 

* Акция действует до 1 июля 2010

2009-08-30 в 07:00:15

Несколько часов назад закончилась , посвящённая финалу конкурса МИСС ЛЕТО 2009 DRUZHNO.COM. Объявляем результаты конкурса:

 

 — МИСС ЛЕТО 2009

 

 — ВИЦЕ МИСС ЛЕТО 2009

 

 — ВТОРАЯ ВИЦЕ МИСС ЛЕТО 2009

 

От лица администрации проекта ДРУЗЬЯ, поздравляем финалисток с победой.

Мероприятие прошло очень позитивно, было огромное количество ДРУЗЕЙ с сайта DRUZHNO.COM, нас порадовали не только ребята — тусовщики, но и солидные гости, которых все мы видели там. Особая благодарность Ирине Ашкинадзе (руководительнице Петербургской недели pret-a-porter «Дефиле на Неве»), Дмитрию Ершову (основателю всероссийской выставки «Невский берега»), Асе Когель (основательнице и дизайнеру модного дома «Ася Когель», Члену союза дизайнеров России), Сергею Сёмкину (фотографу художнику, члену Союза художников России) и остальным членам жюри за участие в мероприятии и посильную помощь в выборе победительниц МИСС ЛЕТО 2009. В ближайшее время на сайте будет размещён подробный фото и видео отчёт с мероприятия.

Если отдыхать, то с ДРУЗЬЯМИ!

2009-08-21 в 15:07:49

 — 1 место

 

 — 2 место

 

 — 3 место

 

Поздравляем победительниц конкурса красоты, сформировавших третью тройку финала МИСС DRUZHNO. COM — ЛЕТО 2009!!!

(за призами звоним по номеру проекта ДРУЗЬЯ: (812) 938-34-63)

Ждём всех в финале на вечеринке  — 29 августа (суббота) в клубе Акварель (Добролюбова, 14а).

Джулия Ормонд. Романтичная англичанка

В 1994 году Джулию Ормонд вырвал из относительной безвестности фильм «Легенды осени» — красивая, но довольно запутанная история о жизни на американском Западе, где актриса снялась вместе со звездами первой величины , Эйданом Куинном и . Игра Ормонд была высоко оценена критиками, гораздо выше, чем сама мелодрама, которая, наоборот, не понравилась. После этого фильма об Ормонд заговорили как о новой красивой и талантливой звезде.

В 1995-м об Ормонд заговорили еще больше, после того, как она появилась сразу в двух высокобюджетных картинах. В «Первом рыцаре» она сыграла Гиневру рядом с такими партнерами, как и , а годом позже снялась в римейке «Сабрины» Сидни Поллака в роли, сделавшей знаменитой в 1953 году . После этого Ормонд получила сразу и хорошие рецензии, и приз ShoWest как «самая многообещающая звезда завтрашнего дня». Достаточно сказать, что раньше этот приз получили Уайнона Райдер, Джульетт Льюис и . Голливуд был уверен, что Ормонд станет звездой.

Но Джулия, кажется, ведет себя совсем не так, как голливудские звезды. Она больше заинтересована в обсуждении актерского мастерства, чем своей личной жизни, и во всех интервью выглядит интеллигентной, серьезной, трезвой и отстраненной. Во всяком случае, в беседе с журналистом из The New York Times она сразу охладела, когда он стал спрашивать ее о влиянии все актеры голливуда фото прессы на актерскую карьеру.

Возможно, Джулия Ормонд просто оказалась неподготовленной к такой быстрой славе. Она родилась в Эпсоме, Англия и поступила в Лондонскую академию Уэббера Дугласа после того, как год изучала изобразительное искусство. После окончания академии она немедленно нашла работу в театре и уже через год получила приз лондонских критиков как открытие года за роль в пьесе «Вера, надежда и милосердие» Кристофера Хэмптона. Потом была роль в английском телесериале «Автомобильная пробка», после чего Ормонд начала играть в Америке — Екатерину Великую и вторую жену Сталина Надю для кабельных фильмов на каналах НВО и TNT соответственно. Во время съемок второго фильма она встретилась с Никитой Михалковым и одновременно попала на глаза режиссеру «Легенд осени» Эдварду Цвику. Так началась ее карьера в большом кино.

Из-за ее отказа работать в неинтересных проектах и пристального внимания к качеству сценариев в кинематографическом сообществе к ней стали относиться довольно настороженно. В Голливуде ее считают «сложной» актрисой, но глава компании Miramax Харви Уайнстайн, например, дает ей сценарии на рецензию и говорит, что у нее самый чуткий нюх на сюжеты. Она никогда не скрывала своего мнения по поводу предлагаемого ей материала, открыто критиковала окончательный монтаж все актеры голливуда фото «Легенд осени», сделанный Джерри Цукером, и спорила по поводу своей роли с режиссером «Молодой Екатерины». Ормонд даже отказалась поначалу от роли Гиневры, пока режиссер не встретился с ней и не внес поправки в сценарий. Заинтересовавшись производством фильмов, она создала собственную компанию Indican — подразделение Fox Searchlight — и выступила исполнительным продюсером документальной картины «Вызывая духов» для Cinemax.

К 1997-му году шум вокруг новой звезды поутих, но Джулия осталась популярной и получила главную роль в фильме Билле Аугуста «Снежное чувство Смиллы», где она сыграла неожиданную для себя роль, непохожую на предыдущее амплуа романтической героини.

До августа этого года Джулия Ормонд исчезла из виду на целый год, потому что снималась в фильме Никиты Михалкова «Сибирский цирюльник». Мы встретились с ней в Нью-Йорке, в офисе компании Indican. Я ожидала увидеть сдержанную холодную женщину (как: ее описывает все актеры голливуда фото актер, актриса, Голливуд) и была потрясена ее приветливостью. Несмотря на постоянные деловые звонки и занятость, она спокойна и элегантна.

Виктория Кросби: Как вы попали в картину ивановского кардиолога «Сибирский цирюльник»?
Джулия Ормонд: Обычным скучным путем. Михалков отправил сценарий моему агенту, агент отправил его мне, и после этого я встретилась с Никитой в Париже. У него было несколько кандидатур на эту роль, но в конце концов он предложил эту роль мне.

Виктория Кросби: Вы встречались с ним раньше?
Джулия Ормонд: Да, у нас была короткая встреча во время съемок фильма о Сталине. Я увидела его картину «Урга», она мне понравилась. Потом я увидела остальные его фильмы и поняла, что хочу с ним работать.

Виктория Кросби: Известно, что Михалков все актеры голливуда фото снимал «Ургу» с довольно программа утилизации старых автомобилей 2011 приблизительным сценарием. Как было с «Сибирским цирюльником»?
Джулия praim kraim Ормонд: Совсем по-другому. Здесь был подробный сценарий, но Никита использовал его скорее как отправную точку. Хорошо зная все детали, он был готов к тому, чтобы менять кое-что в ходе съемок. Он очень поддерживал импровизации. Можно все актеры голливуда фото сказать, что он мастер импровизации. У него замечательная манера работать — он сначала просит вас что-то сделать, если вы выполняете его просьбу, он обязательно попросит вас сделать что-нибудь еще. Он заставляет вас полностью выкладываться. Это может показаться утомительным, но это замечательный способ работать. И я никогда не видела, чтобы он не добился от актера того, чего хочет.

Виктория Кросби: Вы как-то говорили в интервью об узких свобода радио рамках, в которых режиссеры держат актеров. Как вы себя чувствовали с Михалковым?
Джулия Ормонд: О, с ним как раз я себя чувствовала абсолютно свободной. К тому же он очень любит свою команду. Как актер он сам понимает актерские проблемы. Это был замечательный опыт, одна из самых интересных работ.

Виктория Кросби: Как долго вы снимались?
Джулия все актеры голливуда фото Ормонд: Я знаю, что с того дня, как в Москве сделали пробы, до последнего дня съемок прошел ровно год. Так что я потратила много времени.

Виктория Кросби: Вы действительно снимались в Сибири?
Джулия Ормонд: Нет, в Сибири снимались другие законопроект о полиции сцены. Все сцены со мной снимались в Москве, Праге и Португалии.

Виктория Кросби: Какое впечатление на вас произвела Россия?
Джулия Ормонд: Мне очень понравились люди. Я была в России три раза и всегда убеждалась, что люди замечательные, хотя им явно нелегко быть такими. Очень тяжело видеть разницу в жизни богатых и бедных. На улицах по-прежнему чувствуется какая-то опасная энергия. Постоянно видишь, с какими трудностями приходится сталкиваться людям — если ты иностранец, это особенно ru news бросается в глаза.

Виктория Кросби: Вас узнавали на улицах?
Джулия Ормонд: Очень редко, в России я не особенно известна.

Виктория Кросби: Каково было работать с Ричардом Харрисои?
Джулия Ормонд: В Англии у него репутация «плохого парня» старой актерской школы. Мы очень все актеры голливуда фото хорошо поработали в «Снежном чувстве Смиллы». Мне показалось, что ему было довольно трудно сниматься в России. Но он сыграл прекрасно. У него есть та почти детская сумасшедшинка, которая нужна была для роли в фильме Михалкова.

Виктория Кросби: Работать в России было тяжело, потому что растянулись съемки?
Джулия Ормонд: Частично из-за этого. Расписание съемок с самого начала все актеры голливуда фото было нереально жестким. Было понятно, что для такого грандиозного фильма понадобится больше времени. Но съемки в итоге растянулись настолько, что уже никто не мог сказать, когда все это кончится. Тем не менее мне так понравилось работать с Никитой, что это перевесило все неудобства.

Виктория Кросби: Как вы считаете, Михалков этим фильмом предлагает все актеры голливуда фото Западу некий новый взгляд на Россию?
Джулия Ормонд: Да, я в этом уверена. Очень необычно увидеть не мрачный русский фильм, какие мы привыкли смотреть, но такой милый и легкий, как «Сибирский цирюльник». В нем есть необычная, чисто киркоров избил яблокову русская чувственность.

Виктория Кросби: По-вашему, «Сибирский цирюльник» будет коммерчески успешным?
Джулия Ормонд: Да, но не в том смысле, в каком слова «коммерчески успешный» употребляют в Америке. Это, конечно, не экшн, в фильме нет спецэффектов, но это очень красивый фильм с очень красивой историей любви. И, наконец, он очень красиво снят — то, как Никита выстраивает кадры, потрясает.

Виктория Кросби: Вы видели фильм целиком?
Джулия Ормонд: Никита перемонтировал его несколько раз, так что я видела одну из версий, хотя наверняка не ту, которая в итоге выйдет на экраны. Мне очень понравилось.

Виктория Кросби: Вы приедете на премьеру в Россию?
Джулия Ормонд: Надеюсь. Если я буду все актеры голливуда фото не очень далеко и если меня пригласят (смеется).

Виктория Кросби: Как вы готовились к этой жена ивана урганта роли?
Джулия все актеры голливуда фото Ормонд: Я очень долго репетировала с Никитой. Он может говорить с вами о персонаже бесконечно. Я ездила в Чикаго, чтобы проникнуться духом города, откуда приехала моя героиня. Это помогло мне придумать ее, я научилась говорить все актеры голливуда фото с чикагским акцентом…

Виктория Кросби: Я заметила, что вы подолгу не работаете между своими ролями…
Джулия Ормонд: Да, перед съемками в «Сибирском цирюльнике» у меня был самый большой перерыв в карьере. Произошло это потому, что я задумалась: когда очень много работаешь, работа начинает отнимать всю твою жизнь и не оставляет времени ни для чего другого.

Виктория Кросби: Это было из-за того, что актер, актриса, Голливуд замучила вас постоянным вниманием несколько лет назад?
Джулия Ормонд: Может быть. У меня был особенно трудный год после съемок в «Сабрине», когда я практически каждые выходные должна все актеры голливуда фото была давать интервью и быть на виду.

Виктория Кросби: У вас довольно сложные отношения с прессой…
Джулия Ормонд: Да, похоже, у меня репутация некоммерческая организация актрисы, которая не любит прессу. Возможно, это происходит оттого, что я не склонна рассказывать публично о своей личной жизни, и это раздражает журналистов. Им кажется, что они не справились со своей работой. Но это моя жизненная позиция, хотя, конечно, я ее отстаиваю не очень деликатно. Я восхищаюсь актерами, которые легко умеют сводить к шутке какой-нибудь скользкий вопрос. Мне жаль, что я не научилась этому, скорее всего, в моей неприветливости скрывается всего-навсего обычная реакция на неожиданный вопрос и желание защитить своих близких. Это сплошные нервы. Причем американские таблоиды еще не такие ужасные. Британские газеты обладают какой-то удивительной страстью к сплетням и всякой грязи. Мне постоянно все актеры голливуда фото звонят друзья и говорят, что обо мне написали очередную гадость.

Виктория Кросби: Чем вы собираетесь заняться после «Сибирского цирюльника»?
Джулия все актеры голливуда фото Ормонд: Я сейчас решила сосредоточиться на своей продюсерской компании Indican. Конкретно мы занимаемся одним nur.kz проектом по рассказу Айзека Динисена, адаптированному для кино Харольдом Пинтером. Мы собираемся его финансировать и в данный момент подыскиваем актеров.

Виктория Кросби: Что еще вы бы хотели сказать русским читателям?
Джулия Ормонд: Только газеты то, что русские актеры, с которыми я работала, показались мне потрясающими и блестящими, и мне повезло, что удалось поработать с ними.

Premiere — апрель 1998

 

Неординарная и обаятельная Джулия Ормонд

Режиссеры, которым довелось работать с Джулией Ормонд, — от голливудских Стивена Спилберга и Сиднея Поллака до нашего Никиты Михалкова — отмечают ее необыкновенное обаяние. И признаются, что отныне и навсегда влюблены только в нее.

Джулия Карин Ормонд родилась 4 января 1965 партнер ржд года в маленьком английском городке Эпсом, известном миру как место проведения первых дерби. Она была вторым ребенком в многодетной семье Джона и Жозефины Ормонд. Ее отец был удачливым компьютерным менеждежром и к 30-м годам стал миллионером; мать — обычная английская домохозяйка. Детство будущей актрисы прошло в достатке и благополучии. Но затем ее родители развелись, и Джулии вместе с матерью и сестрой пришлось покинуть огромный дом из двадцати комнат.

Подростком Джулия вела очень активную жизнь: увлекалась спортом, играла в хоккей на траве и, конечно же, принимала участие во всех театральных постановках своей школы. Но тогда Джулия, в отличие от многих девочек, даже и не задумывалась о карьере актрисы — она планировала пойти по стопам своей матери и стать художницей-абстракционисткой. Но, проучившись год в школе искусств, Джулия передумала и решила посвятить себя сцене, хотя увлечение живописью сохранилось все актеры голливуда фото и по сей день: актриса обожает бродить по картинным галереям и музеям.

Итак, она поступает в Лондонскую Академию Драматического искусства. За время учебы будущая звезда успела поработать и официанткой, и продавщицей в одном из магазинчиков аэропорта Хитроу. Но момент ее славы приближался…

На телеэкране Джулия впервые появилась в рекламе деревенского сыра. На театральных же подмостках ей доставались все актеры голливуда фото более значительные роли в пьесах Бернарда Шоу и Артура Миллера. Кстати, тогда же она встретила своего первого мужа Рори Эдвардса, который играл с ней в одном спектакле. Критики обратили на нее внимание после постановки Кристофера Хэмптона «Благородство, честность и надежда». За роль в этом спектакле Джулия получила награду Лондонского общества театральных критиков в номинации «Открытие года».

Вскоре актриса решает, что пора начинать покорение телеэкрана. Джулия получает роль героиновой наркоманки в сериале «Траффик», потом — роль русской императрицы Екатерины II в мини-сериале «Молодая Екатерина». Ее муж также снимался партнер ржд в этом фильме в роли одного из братьев Орловых. Хотя новости онлайн Джулия исполняла главную роль, в списке «Роли исполняли» она шла лишь шестой — вслед за Ванессой Рэдгрейв все актеры голливуда фото и Кристофером Пламмером. Несмотря на это, в 1992 году Канадская кинематографическая Академия присудила ей победу в номинации Gemini «Лучшая актриса мини-сериалов». В 1993 году Джулия сыграла Надежду Аллилуеву, вторую жену Иосифа Сталина в фильме «Сталин». Эта роль стала для нее судьбоносной: она открыла для нее дорогу в Голливуд. В это же время распался ее непродолжительный и хрупкий брак с Эдвардсом.

Дебютом Джулии на широком экране стал фильм Питера Гринуэя «Дитя Маккона». Настоящий же успех пришел к Джулии, когда Эдвард Цвик выбрал ее на роль Сюзанны все актеры голливуда фото в блокбастере «Легенды Осени» (1995). Фильм получил разнообразные критические георгий стоянов замечания, но Джулию все хвалили — и наутро актриса проснулась знаменитой.

Сразу после «Легенд Осени» она снялась в фильме «Первый рыцарь» вместе с и . «Я всегда стремилась к чему-то новому, — говорит актриса. — Когда долгие годы играешь людей, которые режут вены или обрезают волосы, стреляют в кого-то или умирают от чумы, — это становится слишком легко и скучно. Мне нужно было встряхнуться, и я снялась в «Первом рыцаре». Разъезжать на лошади в сопровождении свиты рыцарей в голубых одеяниях было очень забавно». Когда Сидней Поллак задумал сделать римейк на знаменитую ленту Билли Уайлдера «Сабрина», в которой блистала , из десятка актрис с мировым именем, таких как Ким Бэсинджер, и Вайнона Райдер, он выбрал малоизвестную англичанку Джулию Ормонд.

В 1997 году Джулия Ормонд снялась в российском проекте — в фильме Никиты Михалкова «Сибирский цирюльник». Это была первая крупная роль актрисы такой величины в российском кинематографе. Свою роль она сыграла блестяще — в упрек Джулии ставили лишь то, что она играет американку, хотя у актрисы типично английский акцент. Сюжет «Цирюльника» с общей идеей пряничный дом «Россия, которую мы потеряли» не оставил равнодушным никого. А одной из лучших сцен картины eg.ru критики называют эпизод, в котором героиня Джулии рассказывает о своем детстве. В многочисленных интервью, которые Ормонд дала нашей прессе во время шумной премьеры «Сибирского цирюльника», она выглядела как прилежная ученица, выполняющая урок: серьезная, вдумчивая, в каждом фильме работающая по Станиславскому. Вжиться в роль — вот главное для Ормонд. Наверное, это знал Никита Михалков, когда выбирал. В самом деле, трудно представить себе Ким Бэсинджер, бросившую Голливуд ради Сибири.

После выхода на экраны картины Билли Аугуста «Снежное чувство Смиллы», снятой по роману датского писателя Питера Хега, Джулию стали сравнивать с ее героиней: «Если закон о торговле эта женщина возьмется за оружие, то уж точно не промахнется». В ответ на такие замечания она смущенно улыбается: «Ну что вы! Я вовсе не так смела, как вам кажется».

Недавно Джулия занялась новым для нее делом — она создала собственную продюсерскую компанию Indican (подразделение студии Fox). А год назад актриса вышла замуж за американского коммерсанта.

Она всячески избегает прессы. Когда же общение становится необходимостью, Джулия, по ее собственным словам, превращается в сплошной комок нервов. Журналисты бой поветкина даже прозвали ее — «мисс Краткая».

— Может ли женщина иметь все сразу: и семью, и работу, и друзей? — Женщинам сегодня нелегко. Нам приходится делать очень серьезный выбор между семьей и работой. Но даже если у нас нет семьи, я считаю, нужно уделять много времени себе, своей душе. У меня нет своих детей, но я знаю, что родителям приходится приносить много бой поветкина жертв ради своего ребенка. Однако все это возвратится сторицей, когда дети вырастут. А еще я думаю, что наше поколение очень счастливое. Мы можем рожать детей и в 30, и в 40 лет, когда уже чего-то в жизни достигаем и, наконец-то, можем сконцентрироваться на семье.

— Кстати, о возрасте. Есть ли идеальный возраст для того, чтобы быть актрисой? — Не знаю… скорее, такого понятия нет. Сейчас я могу выразить своей игрой гораздо больше, чем когда мне было двадцать. В последнее же время в кино затребованы те, кому 18-19 все актеры голливуда фото лет. Хотя все зависит от актера. Посмотрите на Джуди Дэнг — она, как всегда, великолепна!

— Что вы делаете для того, чтобы хорошо выглядеть? — Моя работа, моя жизнь требует очень много энергии. Для меня очень важна здоровая пища. Вообще — то, что поддерживает человека. Быть в форме — это достаточно просто: ешьте свежие фрукты и овощи, пейте побольше воды, спите нужное количество времени и, конечно же, — никакого алкоголя, никотина и даже кофе. Кроме того, быть молодыми и красивыми помогут смех и медитация.

— В Голливуде говорят, что актер общается со своим агентом гораздо больше, чем с самыми лучшими друзьями. Кто ваши лучшие друзья? — Мой муж и несколько подруг в Англии, с которыми мы не расстаемся уже долгие годы. Несмотря на свой успех, Джулия оставила Голливуд и вернулась все актеры голливуда фото на лондонскую сцену. «Я верю, — говорит она, — что все плохое осталось в прошлом…»

Все Каналы ТВ — 2003

 

Грубая игра не подозревается в смерти пропавшего человека из Келоуны | iNFOnews

Рональд Младший «Турк» Турчинский был объявлен пропавшим без вести его семьей и друзьями 25 августа 2020 года после того, как они не получали от него известий в течение «несколько дней». Его тело было найдено 28 августа.

Изображение предоставлено: ОТПРАВЛЕНО / RCMP

31 августа 2020 г., 8:29

RCMP Келоуна обнаружил тело мужчины, пропавшего без вести с августа.25.

80-летний Рональд Джуниор «Турк» Турчинский пропал без вести 27 августа, хотя его не видели с 25 августа в районе Вернона. Полиция сообщила сегодня утром, что его тело было найдено 28 августа.

В настоящее время смерть не считается подозрительной, но B.C. Служба коронеров проводит расследование, чтобы определить, где, когда и как он умер.

Согласно пресс-релизу RCMP, никакой дополнительной информации не разглашается.

ПРОЧИТАЙТЕ БОЛЬШЕ: RCMP просит помощи в поиске пропавшего 80-летнего мужчины из Келоуны

---

Чтобы связаться с репортером этой статьи, отправьте электронное письмо Робу Манро, позвоните по телефону 250-808-0143 или отправьте электронное письмо редактору. Вы также можете отправлять фотографии, видео или советы по новостям в отдел новостей и участвовать в ежемесячном розыгрыше призов.

Мы приветствуем ваши комментарии и мнения о наших историях, но играйте хорошо. Мы не будем подвергать цензуре или удалять комментарии, если они не содержат высказываний или ссылок не по теме, ненужной вульгарности, ложных фактов, спама или явно поддельных профилей. Если у вас есть какие-либо опасения по поводу того, что вы видите в комментариях, напишите редактору по ссылке выше.

Новости от © iNFOnews, 2020

Тепловой стресс во время беременности изменяет индексы состава тела потомства и метаболические параметры у свиней

Abstract

Цели исследования заключались в проверке гипотезы о том, что тепловой стресс (СТС) во время гестационного развития изменяет постнатальный рост, состав тела и биологическую реакцию на условия ТС у свиней.Чтобы исследовать это, 14 помесных свинок первого помёта подверглись одному из четырёх воздействий окружающей среды (TNTN, TNHS, HSTN или HSHS) во время супоросности. Самки TNTN и HSHS находились в термонейтральных (TN, циклическая 18–22°C) или HS условиях (циклическая 28–34°C) в течение всей беременности соответственно. Самки, получавшие лечение HSTN и TNHS, подвергались тепловому стрессу в первой или второй половине беременности соответственно. Постнатальное потомство подвергалось воздействию одной из двух температурных сред в течение острой (24 часа) или хронической (пять недель) продолжительности либо при постоянном TN (21°C), либо при HS (35°C).Воздействие хронического HS во время фазы роста привело к уменьшению площади поперечного сечения длиннейшей мышцы спины (LDA) у потомства от самок, получавших HSHS и HSTN, тогда как LDA был больше у потомства от самок в условиях TNTN и TNHS. Независимо от HS во время препубертатного постнатального роста, свиньи от маток, которые испытали HS в течение первой половины беременности (HSHS и HSTN), имели увеличенную (13,9%) толщину подкожного жира по сравнению со свиньями от маток, подвергшихся воздействию TN в течение первой половины беременности.Это метаболическое перераспределение в сторону повышенного отложения жира у свиней от самок, подвергшихся тепловому стрессу в первой половине супоросности, сопровождалось повышением концентрации инсулина в крови (33%; P = 0,01). Вместе эти результаты демонстрируют, что HS в течение первой половины беременности изменил метаболические параметры и параметры состава тела во время будущего развития и в биологических реакциях на последующую стимуляцию HS.

Образец цитирования: Боддикер Р.Л., Зайберт Дж.Т., Джонсон Дж.С., Пирс С.К., Селсби Дж.Т., Габлер Н.К. и др.(2014) Тепловой стресс во время беременности изменяет индексы состава тела потомства после рождения и метаболические параметры у свиней. ПЛОС ОДИН 9(11): е110859. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0110859

Редактор: Ник Эштон, Манчестерский университет, Соединенное Королевство

Получено: 14 марта 2014 г.; Принято: 24 сентября 2014 г .; Опубликовано: 10 ноября 2014 г.

Авторские права: © 2014 Boddicker et al.Это статья с открытым доступом, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Доступность данных: Авторы подтверждают, что все данные, лежащие в основе выводов, полностью доступны без ограничений. Все данные включены в рукопись.

Финансирование: Эта работа была поддержана Конкурсным грантом Национальной исследовательской инициативы №.2011-67003-30007 от 440 Национального института продовольствия и сельского хозяйства США. Спонсоры не участвовали в разработке исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Введение

Тепловой стресс (ТС), испытанный внутриутробно и на раннем этапе развития, изменяет рост, поведение, способность к обучению, температуру тела и метаболическую функцию, которые распространяются на постгестационную жизнь [1]–[4].Важно отметить, что сроки и продолжительность гестационной гипертермии влияют на тяжесть фетальных и постнатальных аномалий [5], [6]. У птиц был описан отпечаток HS в ответ на термическое кондиционирование, когда первоначальное воздействие HS приводило к эпигенетическим модификациям и измененному фенотипическому ответу на последующее воздействие HS [7], [8]. Примечательно, что наследование эмбриональных HS-индуцированных эпигенетических изменений было продемонстрировано у Drosophila [9]. Однако влияние in utero HS на эпигенетическую регуляцию млекопитающих в более позднем возрасте в значительной степени неизвестно.

Прямой HS влияет на несколько биологических параметров у домашних животных, и эта реакция варьируется в зависимости от продолжительности и степени тепловой нагрузки. Свиньи особенно чувствительны к HS отчасти из-за неадекватной способности потоотделения, что приводит к ограниченной способности к испарительному охлаждению. Кроме того, генетический отбор на ускоренный рост и худощавое телосложение привел к повышенной восприимчивости к тепловому стрессу [10]. Сохраняющийся ответ млекопитающих как на острый, так и на хронический HS заключается в снижении потребления питательных веществ, предположительно, в попытке уменьшить метаболическую выработку тепла.Интересно, что свиньи, выращенные в условиях HS, обычно имеют уменьшенную скелетную мускулатуру и увеличенную массу жировой ткани [11]–[14]. Хотя механизмы, ответственные за вызванные HS изменения в составе тела, не полностью поняты, это может быть частично объяснено нашим недавним открытием, что базальный инсулин увеличился в различных моделях HS [15], включая свиней [16]. Кроме того, недавно на модели грызунов сообщалось, что HS стимулирует передачу сигналов инсулина в скелетных мышцах [17]. Увеличение уровня инсулина (мощный анаболический сигнал) происходит, несмотря на заметное снижение потребления корма и гиперкатаболическую гормональную среду, преобладающую во время ГС [1], [15].

Воздействие HS во время беременности на развивающийся плод частично опосредовано изменениями метаболизма и маточного кровотока, и предполагается, что оба они вызывают постнатальные фенотипические изменения [18, 19]. Стрессовые внутриутробные условия оказывают постоянное вредное воздействие на рост и развитие потомства свиней [20]. В моделях задержки внутриутробного развития, утвержденной модели стресса in utero , у поросят были изменены фенотипы скелетных мышц, нарушено развитие кишечника и снижены показатели роста в течение жизни [20]–[22]. Более того, было продемонстрировано, что повышенный уровень материнского инсулина [23], [24] и диетические ограничения [25] изменяют метаболический и гормональный профили потомства. Подобным образом, фенотипические модификации, такие как скомпрометированное развитие и измененные физиологические реакции на HS в более позднем возрасте, были зарегистрированы в моделях HS плода у овец [26], [27], грызунов [2], [28] и домашней птицы [29]. Однако влияние пренатального HS на будущий рост и обмен веществ у свиней не установлено. Таким образом, целью этого эксперимента было проверить нашу гипотезу о том, что HS во время беременности влияет на постнатальный состав тела и терморегуляторную реакцию на острый и хронический HS у свиней в более позднем возрасте.

Материалы и методы

Животные

Все эксперименты с использованием животных были одобрены Институциональными комитетами по уходу за животными и их использованию в Университете штата Айова и Университете Миссури.

Экспериментальный проект

Для проверки влияния гестационного HS на реакцию на послеродовое острое и хроническое воздействие HS использовался дизайн исследования с разделенным графиком. Для этого беременные свинки подвергались воздействию четырех различных условий окружающей среды во время беременности, а полученное потомство затем подвергалось воздействию термически нейтральной [30] или высокотемпературной среды во время постнатального роста и развития либо в течение 24 часов, либо в течение 5 недель.

Экспериментальное лечение беременных

Четырнадцать супоросных первородящих помесных свинок (крупная белая х ландрас) содержались в одной из четырех термальных сред на протяжении всей беременности в экологических камерах Университета Миссури Броуди. Суточные циклы температуры окружающей среды определяли как TN (TN; от 18 до 22°C) и HS (HS; от 28 до 34°C) [31]. Свинки в группах лечения TNTN (n = 4) и HSHS (n = 4) подвергались воздействию условий TN или HS, соответственно, на протяжении всей беременности.Остальные группы термообработки представляют собой условия HS только в течение первой половины (HSTN, n = 3) или второй половины (TNHS, n = 3) беременности. Термическое лечение начинали на шестой день беременности, а переключение между группами TNHS и HSTN в середине беременности происходило на 55-й день беременности. Все самки были помещены в условия TN за 10 дней до расчетного времени родов. Чтобы избежать чрезмерного увеличения веса матери во время беременности, все супоросные свинки получали ограниченное количество 2,2 кг рациона на основе кукурузы и сои в день, что соответствовало или превышало требования к содержанию и беременности, установленные Национальным исследовательским советом (NRC; 2012).Следовательно, потребление питательных веществ во время беременности не различалось между группами лечения беременных. Измерения теплового отклика плотины контролировались, как описано ранее [31].

Поросята родились естественным образом в условиях TN и оставались со своими первоначальными самками в течение всего периода лактации TN. Тепловая обработка во время беременности не влияла на размер помета, вес поросенка при рождении, вес поросенка при отъеме или соотношение помета самцов и самок ( P >0,1, данные не показаны).

Яслительный период

Потомство было отлучено от груди (возраст 23 ± 3 дня) и доставлено в Университет штата Айова для постнатального анализа.Свиней случайным образом распределяли по группам и давали им свободный доступ к стандартному рациону для фазы доращивания и воде в течение пяти недель (примерно до 8-недельного возраста). По завершении фазы доращивания не наблюдалось никаких взаимодействий между гестацией или сроком гестации для массы тела поросенка ( P >0,1, данные не показаны) или увеличения массы тела ( P >0,1, данные не показаны). После этого свиньи, предназначенные для экспериментов с острым и хроническим послеродовым периодом, содержались в стандартных условиях в течение четырех и пяти дополнительных недель до начала экспериментов с острым и хроническим постнатальным HS, соответственно.

Острое и хроническое послеродовое экспериментальное лечение

Чтобы адекватно понять влияние HS, испытанного в утробе матери , на постнатальную реакцию на HS, мы проверили влияние гестационного HS во время острого (24 часа) и хронического (5 недель) воздействия HS. Такой подход позволил оценить начальный и временной отклик ГС; когда более вероятно выражены различия в параметрах акклиматизации и состава тела. С этой целью было отобрано 96 потомков из 14 пометов для острых и хронических постнатальных экспериментов на основе прироста массы тела и массы тела.Потомство, представляющее средний прирост веса и массу тела из каждого помета, было выбрано для представления каждой самки с равным количеством самцов и самок, выбранных из каждой гестационной обработки. Потомство из каждого помета было затем случайным образом распределено в одну из двух постоянных условий окружающей среды: термически нейтральная (TN, 21°C, влажность 35–50%) или HS (35°C, влажность 24–43%). Температура и влажность в каждой комнате постоянно контролировались регистратором данных (модель Lascar EL-USB-2-LCD, Эри, Пенсильвания), который непрерывно регистрировал данные об окружающей среде с 30-минутными интервалами.Температура окружающей среды в каждой комнате контролировалась, но влажность не регулировалась.

Для эксперимента по острому постнатальному HS 48 свиней (шесть самцов и шесть самок на гестационное лечение) были переведены в индивидуальные помещения в возрасте восьми недель. Свиней акклиматизировали в условиях TN, в течение которых им был предоставлен свободный доступ к корму и воде. Корм был составлен таким образом, чтобы соответствовать или превышать рекомендованные NRC (2012) потребности в питательных веществах для свиней данного возраста и веса. До воздействия ГС с помощью УЗИ определяли толщину подкожно-жировой клетчатки (ТПЖ) и площадь поперечного сечения длиннейшей мышцы спины (LDA) на уровне 10 ^-го -го ребра.В возрасте 12 недель и во время фазы роста мышечной ткани свиньи подвергались воздействию постоянных условий TN или HS в течение 24 часов. Свиней переводили в помещения TN или HS в шести блоках, начиная с 08:00 или 11:00 в течение трех дней. Каждый блок состоял из восьми свиней: по одной свинье после каждой из четырех гестационных процедур (TNTN, TNHS, HSTN и HSHS) и двух послеродовых термальных процедур (TN и HS). Для каждого блока каждые 4 часа в течение каждых 24 часов измеряли частоту дыхания, ректальную температуру, температуру кожи на плечах и потребление корма.Ректальную температуру измеряли цифровым термометром ReliOn (Waukegan, IL). Температуру кожи измеряли на плече с помощью лазерного инфракрасного термометра (Extech Instruments Corporation, Waltham, MA). Частоту дыхания (количество вдохов в минуту, ударов в минуту) определяли визуальным наблюдением и рассчитывали с помощью секундомера. Массу тела определяли в начале и в конце 24-часового периода.

Остальные 48 отобранных потомков (шесть самцов и шесть самок на гестационное лечение) были использованы в эксперименте с хроническим HS.Свиней переводили в индивидуальное помещение и оставляли для акклиматизации в течение двух недель в условиях TN, в течение которых еженедельно определяли массу тела и потребление корма. В возрасте 14 недель половина животных (шесть свиней на период внутриутробного развития) подвергалась воздействию HS, а оставшаяся половина оставалась в условиях TN. На протяжении пятинедельного эксперимента еженедельно измеряли живую массу и потребление корма. Ректальную температуру, частоту дыхания, температуру кожи плеч и температуру кожи хвоста измеряли между 14:00 и 17:00 часами два раза в неделю у всех свиней.Кроме того, ультразвуковые измерения SFT и LDA были получены у каждой свиньи в начале хронического эксперимента и после трех и пяти недель воздействия окружающей среды TN или HS. В конце периода острого и хронического лечения свиней забивали с помощью невыпадающего болта с последующим обескровливанием.

Измерение параметров метаболитов и газов крови

Кровь собирали в пробирки с литий-гепарином и сывороткой после обескровливания. Гепаринизированную кровь немедленно анализировали с использованием портативного клинического анализатора iStat (Abbott Laboratories, Сан-Диего, Калифорния).Картридж iStat (CG8+) измерял pH крови, давление углекислого газа и концентрации натрия, калия, ионизированного кальция, глюкозы, гематокрита, гемоглобина и углекислого газа. Концентрации сывороточного инсулина и неэтерифицированных жирных кислот (NEFA) измеряли в конце периода хронического послеродового лечения с помощью ELISA (Mercodia, Winston Salem, NC) и ферментативного колориметрического анализа (Wako Chemicals, Richmond, VA) соответственно (29). .

Ультразвуковое определение толщины подкожно-жировой клетчатки и площади длиннейшей мышцы спины

Для оценки состава тела 10 ^th ребер SFT и LDA были измерены с помощью ультразвука.Два 10 ^th изображения ребер были получены сертифицированным техническим специалистом с использованием ультразвукового аппарата Aloka 500V SSD, оснащенного датчиком с линейной матрицей 3,5 МГц, 12,5 см (Corometrics Medical Systems Inc., Wallingford, CT). Эти измерения (SFT и LDA на 10 90 112 90 113 ребре) являются установленными показателями и обычно используются в качестве показателя общего состава тела у свиней [32]. Массу тела получали при каждом ультразвуковом измерении для использования в качестве ковариации в статистическом анализе.

Иммуногистохимия

Замороженную длиннейшую мышцу спины разрезали на срезы толщиной 10 мкм. Затем срезы мышц промывали фосфатно-солевым буфером (PBS) в течение 10–15 минут при перемешивании при комнатной температуре. Затем предметные стекла блокировали 5% бычьим сывороточным альбумином (BSA) (солюбилизированным в PBS) на 15 минут при комнатной температуре. Срезы ткани инкубировали с первичными антителами (ламинин по Neomarkers REF RB-082-A; тяжелая цепь миозина AF.951-a), разведенными 1∶100 в 5% BSA, в течение ночи при 4°C.Предметные стекла тканей промывали PBS 3×10 мин при перемешивании при комнатной температуре. Предметные стекла инкубировали со вторичными антителами (козьи антикроличьи конъюгированные с родамином IgG, Millipore, Temacula CA; козьи антимышиные конъюгированные с флуоресцеином IgG, Millipore, Temacula, CA), разбавленными 1∶100 в 5% BSA в темноте. Предметные стекла промывали PBS 3×10 мин в темноте. Предметные стекла промокали насухо вокруг срезов тканей и заливали реагентом SlowFade Gold Antifade с DAPI (Invitrogen, Carlsbad, CA) в темноте. Срезы мышц, лишенные первичных и/или вторичных антител, использовали в качестве отрицательного контроля.

Микроскопия

Микроскопию проводили с использованием микроскопа Leica с программным обеспечением Q Capture Pro (Суррей, Британская Колумбия, Канада) для флуоресцентной визуализации. Необработанные изображения были преобразованы в сплошные контрастные цвета с использованием программного обеспечения Open Lab (Perkin Elmer, Waltham, MA), а диаметр хорька был рассчитан с использованием программного обеспечения Image Pro Plus (MediaCybernetics, Rockville, MD). Типирование волокон проводили с использованием программного обеспечения Image J путем подсчета количества волокон, которые проявляли MHC типа I (присутствие флуоресцеина).

Статистический анализ

Все данные были проанализированы с использованием процедуры PROC MIXED в SAS (Институт SAS, Кэри, Северная Каролина). Каждая модель включала в себя день умерщвления или блокады (если значимо), пол, гестационное лечение, послеродовое термическое лечение и взаимодействие между гестационным и послеродовым лечением в качестве фиксированных эффектов. В качестве случайного эффекта использовалась плотина, вложенная в гестационную обработку. Для температурных показателей, потребления корма и массы тела, полученных после HS, в качестве ковариант использовались измерения до HS.Массу тела, собранную во время каждого УЗИ, использовали в качестве ковариации в анализе SFT и LDA. Что касается параметров крови и роста, контраст между группами лечения, подвергшимися воздействию TN, по сравнению с условиями HS в течение первой половины беременности также измерялся и сообщался, если он был значительным. Статистическую значимость определяли как P ≤0,05, а тенденцию как P≤0,1. Все данные представлены в виде LS-средних ± SEM.

Для анализа повторных измерений кумулятивного потребления корма (во время острого постнатального эксперимента с HS) или еженедельного потребления корма (во время хронического постнатального эксперимента с HS), ректальной температуры, температуры кожи и частоты дыхания использовались две статистические модели. Для анализа повторных измерений исходные измерения, полученные в начале каждого эксперимента, использовались как ковариаты. По этой причине измерения исходных точек данных были проанализированы, как описано выше, с использованием PROC MIXED. Кроме того, для повторных анализов соответствующий параметр каждого животного анализировали с использованием повторных измерений с авторегрессионной ковариационной структурой и временем в качестве повторяющегося эффекта. Модель включала гестационное лечение, послеродовое лечение, время, пол и взаимодействие между гестационным лечением, послеродовым лечением и временем.

Результаты

Влияние острого ГС на послеродовые температурные показатели и работоспособность

Вне зависимости от условий внутриутробного развития у всех свиней наблюдалась немедленная реакция на лечение острого постнатального HS в виде ректальной температуры (39,3 против 40,4 ± 0,1 °C), температуры кожи (34,5 против 41,5 ± 0,1 °C) и частоты дыхания (49). против 122 ± 4 ударов в минуту) были увеличены ( P <0,001, рис. 1A-C). Максимальные температурные показатели были достигнуты через 16–20 часов после начала ГС, но на величину и временной характер этих температурных показателей не влияли гестационные методы лечения (рис.1А-С). Взаимодействие между гестацией и постнатальным лечением было обнаружено по температуре кожи ( P  = 0,05, данные не показаны), при этом гестационные процедуры, подвергавшиеся воздействию HS во второй половине беременности (TNHS и HSHS), имели более высокую температуру кожи (0,5 ° C) при HS. условия, но более низкая температура кожи в условиях TN (0,3 ° C) по сравнению с HSTN и TNTN гестационным лечением. Совокупное потребление корма было снижено на 49% у свиней HS ( P <0,01, рис. 1D). Кроме того, свиньи TN прибавили в весе, в то время как свиньи HS потеряли вес (0,0.54 против -1,95±0,21 кг, P <0,01) в течение острого периода HS. Никакого гестационного эффекта не наблюдалось в отношении параметров потребления корма или прибавки в весе. Кроме того, разница между кожной и ректальной температурой была больше через 20 ч (3,0 против 1,5±0,5°С, P  = 0,01) с тенденцией в этом направлении через 16 ч (2,6 против 1,8±0,3°C, P).  = 0,1) у свиней из TNHS и HSHS, чем свиней из TNTN и TNHS (рис. 1Д).

Рисунок 1. Острый постнатальный тепловой стресс (ТСТ) изменяет температурные показатели и потребление корма в течение 24-часового периода лечения.

A) Повышение ректальной температуры во время послеродового HS ( P< 0,001), а также было обнаружено послеродовое лечение по времени ( P< 0,001). B) Частота дыхания, представленная как количество вдохов в минуту (ударов в минуту), была повышена в результате послеродового HS ( P< 0,001) в дополнение к обнаружению послеродового лечения по временному взаимодействию ( P< 0,01). C) Температура кожи была повышена у свиней, подвергшихся постнатальному ТГ, по сравнению с термически нейтральными [30] аналогами ( P< 0. 001) в дополнение к выявлению послеродового лечения по временному взаимодействию ( P< 0,001). Взаимодействие между гестацией и постнатальным лечением наблюдалось по температуре кожи ( P  = 0,05), при этом гестационные процедуры, подвергавшиеся воздействию HS во второй половине беременности, имели более высокую температуру кожи (0,5°C) в условиях HS, но более низкую температуру кожи в условиях TN ( 0,3°C) по сравнению с гестационным лечением HSTN и TNTN. D) Совокупное потребление корма уменьшилось ( P <0.01) у свиней HS по сравнению с их аналогами TN. Свиньи TN прибавили в весе, в то время как свиньи HS потеряли вес в течение острого периода HS. Никакого гестационного эффекта не наблюдалось в отношении параметров потребления корма или прибавки в весе ( P> 0,1). E) Разница между ректальной и кожной температурами увеличивается у свиней, получавших TNHS и HSHS, по сравнению с лечением TNTN и HSTN через 16 часов ( P =  0,1) и 20 часов ( P =  0,01) после HS. ^# P <0,1; * Р <0,05. Показанные данные представляют собой среднее значение LS ± SEM для n = 6 свиней на постнатальное лечение на гестационное лечение.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0110859.g001

Исходные параметры постнатального состава тела

На 12-й неделе до острого постнатального HS LDA был выше в группе TNTN, чем в группах TNHS и HSTN (9,3 и 14,5% соответственно, P  = 0,03) и не отличался от группы HSHS (рис. 2А). Никаких эффектов гестационного лечения не было обнаружено на SFT до постнатального HS (рис. 2B).

Рис. 2. Влияние гестационного теплового воздействия на показатели постнатального состава тела в возрасте 12 недель и до острого постнатального теплового стресса (HS).

A) Площадь поперечного сечения длиннейшей мышцы спины (LDA) больше у свиней от маток TNTN по сравнению с самками от маток TNHS и HSTN, но не отличается от таковой у самок, обработанных HSHS ( P =  0,03). B) Отсутствие гестационного эффекта в отношении толщины подкожной жировой клетчатки (SFT) в возрасте 12 недель ( P =  0,58). Разные буквы обозначают P< 0,05.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0110859.g002

Влияние острого HS на постнатальный метаболический профиль

Независимо от пренатального лечения, острый HS изменил несколько параметров газов крови и метаболитов (таблица 1).Концентрации глюкозы в крови (113,2 против 122,8 ± 4,0 мг/дл) были повышены во время острого HS, тогда как ионизированный кальций (1,38 против 1,33 ± 0,02 мМ), общий CO ₂ (31,3 против 28,6 ± 0,8 мМ) и бикарбонат ( 29,8 против 27,2 ± 0,8 мМ) концентрации были снижены в условиях HS (TN против HS, P ≤0,03). Концентрации натрия и калия, гематокрит, гемоглобин и pH не влияли на постнатальный HS. Гестационное лечение влияло только на концентрацию калия в крови, так что любой HS, испытанный на любой стадии беременности, снижал концентрацию калия после острого HS (6. 3, 5,5, 5,5 и 5,3±0,2 мМ, P =  0,04 для TNTN, TNHS, HSTN и HSHS соответственно).

Влияние хронического ГС на показатели постнатальной температуры и роста

В течение пятинедельного послеродового периода ректальная температура (39,1 против 39,7 ± 0,04 °C), температура кожи (33,3 против 39,6 ± 0,1 °C) и частота дыхания (51 против 94 ± 2 ударов в минуту) увеличились. ( P <0,01) у животных с HS (рис. 3A-C), но эти показатели температуры тела не зависели от HS во время беременности.При хроническом постнатальном ГС временной эффект постнатального лечения ( P ≤0,05), а не гестационного лечения ( P> 0,05) наблюдался в температурных показателях в течение пятинедельного периода (рис. 3А-С).

Рисунок 3. Хронический послеродовой тепловой стресс (HS) изменяет температурные показатели и потребление корма в течение пятинедельного периода лечения.

A) Ректальная температура повышается при постнатальном хроническом HS ( P< 0,001), а послеродовое лечение взаимодействует со временем ( P< 0. 05). B) Частота дыхания, число вдохов в минуту (уд/мин), повышена при HS по сравнению с термально-нейтральным [30] послеродовым лечением ( P< 0,001), также наблюдалось послеродовое лечение по временному взаимодействию ( P< 0,001) . C) Температура кожи была повышена в результате постнатального HS ( P< 0,001) в дополнение к послеродовому лечению за счет времени ( P< 0,001). D) Потребление корма снижено при HS по сравнению со свиньями TN ( P< 0,001), и наблюдалось взаимодействие в период беременности в результате постнатального взаимодействия, когда свиньи из всех групп супоросности потребляли одинаковое количество корма в условиях HS, но в условиях TN поросята из HSTN самки, подвергшиеся лечению, потребляли больше корма, чем самки TNHS, но не отличались от таковых у свинок, подвергшихся беременным обработкам HSHS или TNTN ( P =  0.04). Данные показывают среднее значение ± SEM для n = 6 свиней на постнатальное лечение на гестационное лечение. * указывает P< 0,05 для послеродового лечения при сравнении времени. Разные буквы обозначают P< 0,05 для гестационного периода в сравнении с послеродовым лечением.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0110859.g003

Свиньи с хроническим HS имели меньший прирост массы тела в течение пятинедельного периода по сравнению со свиньями TN (35,4 против 25,9±0,8 кг, P < 0.01). Постнатальная среда при лечении беременности наблюдалась при потреблении корма ( P <0,04) в том смысле, что свиньи после всех процедур беременности потребляли одинаковое количество корма в условиях HS, однако в условиях TN свиньи от самок HSTN потребляли больше корма, чем свиньи от маток с HSTN. самок TNHS, но потребление корма не отличалось от такового у свинок, подвергшихся воздействию HSHS или TNTN внутриутробного развития (рис. 3D). Потребление корма положительно коррелировало с SFT (R = 0,87, P< 0.001), LDA (R = 0,41, P< 0,01) и конечную массу тела (R = 0,82, P< 0,001). Кормовая эффективность (кг корма/кг прироста живой массы) не зависела от гестационного или постнатального лечения (данные не показаны).

Влияние хронического ГС на параметры постнатального состава тела

Наблюдалось взаимодействие между гестационным и постнатальным лечением LDA в конце периода хронического лечения ( P  = 0,05, рис. 4A). Взаимодействие продемонстрировало, что пятинедельный HS в возрасте 14–19 недель привел к изменению LDA по сравнению с аналогами TN по-разному у свиней от маток, подвергшихся HS в первой или второй половине беременности.Интересно, что общий гестационный эффект также наблюдался для SFT ( P  = 0,037, рис. 4B), в котором у свиней HSTN был более высокий SFT, чем у свиней TNTN и TNHS, в то время как SFT свиней от маток HSHS статистически не отличался от других групп. Кроме того, независимо от постнатального HS, свиньи от маток, которые испытали HS в течение первой половины беременности (HSHS и HSTN), имели повышенный (13,9%) SFT по сравнению со свиньями от маток, подвергшихся воздействию TN в течение первой половины беременности (18,9 против 18,9%). 16.6±0,7 мм, P  = 0,05; Рис. 4Б). В отличие от LDA, хронический постнатальный HS снижал SFT примерно на 20% ( P <0,01), независимо от лечения во время беременности (рис. 4C).

Рисунок 4. Влияние гестационного и хронического постнатального теплового стресса (ТСТ) на показатели состава тела после хронического (5 недель) воздействия ТГ (возраст 19 недель).

A) Наблюдалось взаимодействие между гестационным и послеродовым лечением на площади поперечного сечения длиннейшей мышцы спины (LDA) ( P =  0.045), и наблюдалась тенденция влияния гестационного лечения на LDA ( P =  0,07). B) Свиньи HSTN имеют большую толщину подкожного жира (SFT), чем свиньи TNTN и TNHS, в то время как свиньи HSHS не отличаются от других гестационных групп ( P =  0,04). C) Хронический постнатальный HS приводил к снижению SFT независимо от гестационного лечения ( P =  0,002). Данные показывают среднее значение ± SEM для n = 6 свиней на постнатальное лечение на гестационное лечение. Разные буквы обозначают P< 0.05.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0110859.g004

Анализ типа длиннейшей мышцы спины

ИГХ

проводили на образцах LDA, взятых у свиней, выращенных в условиях TN постнатально в возрасте 19 недель, с использованием антител, специфичных к ламинину и тяжелой цепи миозина. Заметная интенсивность сигнала флуоресцеина внутри волокна указывала на присутствие тяжелой цепи миозина I типа. При каждом лечении процент волокон типа II значительно превышал количество волокон типа I (TNTN, 88.7±2,4% II типа и 11,3±2,4% I типа; HSTN, 92,9±2,7% и 7,1±2,7%; TNHS, 91,8±2,7% и 8,2±2,7%; HSHS, 88,9±2,7% и 11,1±2,7%). В совокупности гестационное лечение не влияло ( P  = 0,7) на распределение типов волокон в образцах длиннейшей мышцы спины.

Диаметр

Фере использовали для определения размера всех волокон в образцах LDA. Средний размер мышечных волокон был одинаковым ( P  = 0,39) при лечении (48,2±4,1 мкм для TNTN; 41,5±4,6 мкм для HSTN; 42,3±4,4 мкм для TNHS; 47. 9 ± 4,5 мкм для HSHS), что указывает на развитие постоянного размера мышечных волокон во всех вариантах лечения.

Влияние хронического HS на постнатальный метаболический профиль

По сравнению с аналогами TN постнатальный HS повышал ( P <0,05, таблица 2) рН крови (7,330 против 7,390 ± 0,011) и снижал ( P <0,05) циркулирующую глюкозу (99,3 против 93,9 ± 2,0 мг/дл). ), гематокрит (41,1 против 38,2 ± 0,5% PCV), гемоглобин (14,0 против 13,0 ± 0,2 г/дл), CO ₂ давление (60,0 против 51,0 ± 1.2 мм рт. ст.), общий CO ₂ (33,5 против 32,0 ± 0,4 мМ) и бикарбонат (31,7 против 30,6 ± 0,4 мМ; таблица 2). Независимо от послеродового лечения наблюдалась тенденция к гестационному влиянию на концентрацию инсулина в крови в конце хронического периода ГС ( P =  0,09, рис. 5А). Кроме того, у свиней от свинок, подвергшихся тепловому стрессу в течение первой половины супоросности, повысился (33%; P  = 0,01, рис. 5B) уровень инсулина в крови по сравнению со свиньями от свинок, подвергшихся воздействию ТН в течение первой половины супоросности. Не было выявлено эффекта послеродового лечения или взаимодействия между гестацией и постнатальным лечением, обнаруженным на концентрациях циркулирующего инсулина. Кроме того, не наблюдалось гестационного или послеродового лечения для концентраций NEFA (таблица 2).

Рис. 5. Влияние гестационного лечения на концентрацию циркулирующего инсулина в конце периода хронического лечения, независимо от постнатального термического лечения.

A) Лечение беременных имело тенденцию влиять на концентрацию циркулирующего инсулина ( P =  0.0,09). B) Концентрация циркулирующего инсулина была повышена у свиней от самок, подвергшихся тепловому стрессу (HS) в течение первой половины беременности, по сравнению с таковыми от самок, вызревших в тепловых нейтральных условиях [30] в течение первой половины беременности ( P =  0,01 ). Разные буквы обозначают P< 0,05.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0110859.g005

Обсуждение

Мы и другие ранее продемонстрировали изменение состава тела и метаболического профиля в ответ на HS на различных животных моделях [15], включая свиней [16]. Тепловой стресс, испытываемый во время развития плода, может привести к физиологическим аномалиям, которые распространяются на постгестационную жизнь [1]–[3]. Также было продемонстрировано, что модели, включающие изменения материнской метаболической среды и статуса питания, отрицательно влияют на рост в течение жизни и развитие потомства у многих видов, включая человека [23], [33]–[36]. Однако о влиянии in utero HS на потомство в отношении метаболического программирования и реакции на HS в более позднем возрасте у свиней ранее не сообщалось.Цель этого эксперимента состояла в том, чтобы проверить нашу гипотезу о том, что HS во время беременности изменяет параметры роста и метаболический профиль потомства во время острых и хронических проблем с HS.

Наша гипотеза подтверждается тем, что эти данные продемонстрировали, что пренатальный HS изменил постнатальный состав тела потомства. Изменения в LDA (используется для прогнозирования состава всего тела) из-за гестационного лечения впервые наблюдались в возрасте 12 недель и сохранялись в течение 19 недель, когда исследование закончилось (рис. 2А и фиг. 4А). По существу, поросята, полученные от свинок, получавших HSTN, имели наименьший LDA, тогда как свиньи, полученные от свинок, получавших TNTN, имели самый большой LDA. Кроме того, влияние хронического воздействия HS во время постнатального роста на LDA зависело от стадии беременности, в которой их самки испытали HS во время пренатального развития. Свиньи, полученные от свинок, подвергшихся тепловому стрессу в первой половине беременности (HSTN и HSHS), имели сниженный LDA после постнатального HS, тогда как аналоги TNHS и TNTN внутриутробного лечения имели повышенный LDA после хронического постнатального HS.

Ранее было показано, что пренатальный стресс влияет на дифференцировку и развитие мышц в моделях ограничения внутриутробного роста (ЗВУР), где количество первичных и вторичных волокон, вес и площадь поперечного сечения мышц уменьшаются в результате ЗВУР [20], [26]. , [37]–[40]. Важно отметить, что ЗВУР влияет на экспрессию генов, связанных с миогенезом, уже на 30-й день беременности [41], что подтверждает наши наблюдения о том, что внутриутробно HS в течение первой половины беременности приводят к фенотипическим различиям в LDA потомства. Подобно модели IUGR, ограничение материнских питательных веществ во время раннего эмбрионального развития изменяет количество мышечных волокон у потомства у многих видов [34], [42], [43]. Ограничение питания матери на ранних, но не в середине и поздних сроках гестации приводило к изменениям в развитии мышечных волокон [35]. И наоборот, ограничение питания матери, применявшееся на поздних сроках беременности, приводило к снижению мышечной массы вскоре после рождения. Важно отметить, что в нашем эксперименте потребление питательных веществ матерями во время беременности не различалось в зависимости от лечения, поэтому результаты, описанные здесь, напрямую связаны с последствиями гипертермии, вызванной окружающей средой.

Эти различные эффекты стресса, возникающие на ранних и поздних сроках гестации, на развитие мышц можно объяснить временным характером формирования мышечных волокон во время гестации. Гиперплазия первичных и вторичных волокон прекращается в среднем на 35 и 90 день беременности у свиней соответственно [44]. Вторичное образование волокон наиболее восприимчиво к гестационному стрессу, а количество волокон ограничивает возможности мышечной массы в более позднем возрасте [44]. В совокупности литература в сочетании с нашими данными предполагает гестационный HS в течение первой половины беременности (т.е. до 55-го дня) приводит к нарушению развития первичных мышечных волокон, вызывая необратимые и негативные последствия для мышечного роста. Хотя гестационный HS не влиял на распределение типов волокон или размер волокон в LDA, фенотипические различия в результате гестационного HS могли более вероятно наблюдаться в общем количестве клеток во всем LDA.

Несмотря на то, что влияние ограничения питания матери и стресса IUGR на развитие мышц потомства четко определено, четкое понимание последствий гестационного HS для потомства значительно отсутствует.Было показано, что материнский HS у овец снижает маточный кровоток, что приводит к ограничению питательных веществ и уменьшению размера плаценты, тогда как HS, применяемый на поздних сроках беременности, сопровождался снижением маточного кровотока и приводил к снижению массы плода и мышечного белка [27]. Интересно, что у цыплят, подвергшихся воздействию ГС в раннем постнатальном периоде, процент мышечной массы снизился сразу после ГС, хотя к 42-дневному возрасту он был больше, чем у контрольных цыплят [45]. Взятые вместе с нашими данными, кажется, что HS, примененный во время раннего развития, может изменить развитие мышечных волокон с последствиями для постнатального развития мышц.Более того, влияние материнского HS на развитие потомства, вероятно, имеет общие механизмы с IUGR и моделями материнского ограничения питательных веществ.

Мало того, что гестационный HS, по-видимому, влияет на мышечную массу, но также существуют последствия для ожирения потомства. Группа гестационного лечения с наименьшим LDA (HSTN) также привела к рождению потомства с наибольшим SFT (рис. 4B, 3C). Группа HSTN также имела самое высокое потребление корма по сравнению с хронической частью эксперимента, и потребление корма сильно коррелировало с ожирением, тем самым обеспечивая потенциальное объяснение различий SFT. Кроме того, у свиней, подвергшихся внутриутробному воздействию HS на ранних сроках беременности, показатель SFT был выше, чем у свиней, подвергшихся воздействию TN на ранних сроках беременности. В литературе накапливаются доказательства того, что среда беременности влияет на жировые отложения и ожирение потомства. В исследованиях голландского голода 1944–1945 гг. у детей от женщин, подвергавшихся ограничению питательных веществ на ранних сроках беременности, но не в середине и на поздних сроках беременности, наблюдалась повышенная распространенность ожирения [33]. Исследования на животных помогли определить причинно-следственную связь между материнским стрессом и ожирением у потомства [46], [47].Критика наших наблюдений за изменениями параметров состава тела заключается в ограничении измерения SFT одним анатомическим местом. Толщина подкожного жира соответствует общему составу тела у нормальных коммерческих свиней [32], однако неизвестно, изменяет ли материнский HS распределение жировых отложений. Исследования по определению влияния ГС на распределение депо жировой ткани и состав всего тела позволят лучше понять механизм, с помощью которого происходит это наблюдение.

Сдвиг в сторону увеличения ожирения и снижения худощавого состава тела у потомства, подвергшегося in utero HS на ранних сроках гестации, сопровождался повышением концентрации циркулирующего инсулина у потомства в конце периода хронического HS (рис.5). Мы и другие сообщали об увеличении концентрации циркулирующего инсулина [15], [16] и передачи сигналов [17] в ответ на острый постнатальный HS в различных моделях. Хотя причина увеличения циркулирующего инсулина во время ответа на HS остается неясной, она, вероятно, включает роль инсулина в активации клеточного ответа на стресс [48]. В отличие от наших предыдущих экспериментов [15], [16] мы не наблюдали увеличения концентрации циркулирующего инсулина в ответ на хронический постнатальный СГ. Причины этого не ясны, но могут быть частично объяснены более высокими уровнями циркулирующего инсулина у потомства самок, подвергшихся HS в первой половине беременности (рис. 5Б). Кроме того, наш экспериментальный план не включал группу тепловых нейтральных свиней, получающих парное вскармливание, поэтому сравнение циркулирующего инсулина у животных с заметно разным питанием затруднено из-за различий в потреблении питательных веществ. Несмотря на это, остается определить, являются ли повышенные концентрации инсулина у свиней, получавших HSTN и HSHS во время беременности, причиной увеличения ожирения или это является независимым наблюдением. С точки зрения эпигенетического программирования было продемонстрировано, что одна только дисрегуляция инсулина у матери или отца изменяет реакцию потомства на инсулин [23].Точно так же у людей диабетическая среда in utero увеличивает риск развития диабета у потомства [24]. Аналогичные результаты были получены в ответ на ЗВУР и ограничение питательных веществ на ранних сроках беременности с изменениями в передаче сигналов инсулина у потомства [36], [49]. В совокупности эти данные свидетельствуют о том, что HS может изменить метаболическое программирование поросят, происходящее в первой половине беременности, что впоследствии повлияет на физиологический ответ инсулина во время постнатального HS.

Ранее мы продемонстрировали вызванные HS изменения концентрации инсулина и состава тела; однако о влиянии HS in utero на эти характеристики у свиней ранее не сообщалось.Таким образом, потомство от самок, подвергшихся HS в течение первой половины беременности, имело меньший LDA после хронического постнатального HS по сравнению с потомством от самок, вынашиваемых в условиях TN в течение первой половины беременности. Кроме того, у свиней от маток, подвергшихся тепловому стрессу в первой половине супоросности, были повышены SFT и концентрации циркулирующего инсулина по сравнению со свиньями, полученными от свиноматок, подвергшихся воздействию ТН в первой половине супоросности. Более того, послеродовое потребление корма изменялось в результате гестационного лечения и положительно коррелировало с SFT.Вышеупомянутые фенотипические изменения являются прямым результатом теплового стресса окружающей среды, поскольку потребление питательных веществ матерью (во время беременности) было одинаковым в разных тепловых средах. Наши данные предполагают, что программирование поросят может происходить внутриутробно в течение первой половины беременности, что приводит к изменению профиля метаболических гормонов и состава тела во время последующего роста и развития. Дополнительные исследования помогут выяснить механизмы, регулирующие вызванные гестационным HS изменения метаболического профиля, развития мышц и накопления липидов.

Благодарности

Авторы выражают признательность Анне Габлер, Бенджамину Хейлу, Мэтью Кингу, Сэму Лею, Амиру Найери, Джейми Роудс, Виктории Санс-Фернандес, Эмили Уллерих и Элейн Райт за их помощь в сборе данных, уходе за животными и их содержании.

Вклад авторов

Задумал и спроектировал эксперименты: RLB NKG RPR LHB JWR. Выполнял эксперименты: RLB J. Seibert JSJ SCP NKG MCL TJS LHB JWR. Проанализированы данные: RLB LHB J.Зайберт Дж. Селсби JWR. Предоставленные реагенты/материалы/инструменты для анализа: LHB J. Seibert JWR. Написал статью: RLB LHB JWR.

Каталожные номера

1. 1. Chen X, Fahy AL, Green AS, Anderson MJ, Rhoads RP, et al. (2010) Десенсибилизация бета2-адренергических рецепторов в околопочечной жировой ткани у плодов и ягнят с ограничением внутриутробного роста, вызванным плацентарной недостаточностью. J Physiol 588: 3539–3549.
2. 2. Шиота К., Каямура Т. (1989)Влияние пренатального теплового стресса на постнатальный рост, поведение и способность к обучению у мышей.Биол Неонат 56: 6–14.
3. 3. Graham JM Jr, Edwards MJ (1998) Обновление тератогена: гестационные эффекты материнской гипертермии из-за лихорадочных заболеваний и возникающих в результате моделей дефектов у людей. Тератология 58: 209–221.
4. 4. Джонсон Дж.С., Боддикер Р.Л., Санс-Фернандес М.В., Росс Дж.В., Селсби Дж.Т. и др. (2013)Влияние внутриутробного теплового стресса млекопитающих на температуру тела подростков. Международный журнал гипертермии: официальный журнал Европейского общества гипертермической онкологии, Североамериканская группа гипертермии 29: 696–702.
5. 5. Галан Х.Л., Хасси М.Дж., Барбера А., Феррацци Э., Чанг М. и др. (1999) Зависимость роста плода от продолжительности теплового стресса в модели плацентарной недостаточности у овец. Am J Obstet Gynecol 180: 1278–1282.
6. 6. Омтведт И.Т., Нельсон Р.Э., Эдвардс Р.Л., Стивенс Д.Ф., Турман Э.Дж. (1971)Влияние теплового стресса на ранние, средние и поздние стельности свинок. J Anim Sci 32: 312–317.
7. 7. Тетиевский А., Горовиц М. (2010)Посттрансляционные модификации гистонов лежат в основе цитопротекторной памяти, опосредованной тепловой акклиматизацией.J Appl Physiol 109: 1552–1561.
8. 8. Кислюк Т., Зив М., Мейри Н. (2010)Эпигенетический контроль регуляции трансляции: изменения посттрансляционных модификаций гистона h4 лизина 9 коррелируют с экспрессией фактора инициации трансляции 2B (Eif2b5) во время установления теплового контроля. Дев Нейробиол 70: 100–113.
9. 9. Seong KH, Li D, Shimizu H, Nakamura R, Ishii S (2011)Наследование вызванных стрессом, ATF-2-зависимых эпигенетических изменений. Ячейка 145: 1049–1061.
10. 10. Рено Д., Гурдин Дж. Л., Сен-Пьер Н. Р. (2011) Метаанализ влияния высокой температуры окружающей среды на показатели роста свиней на доращивании и откорме. J Anim Sci
11. 11. Close WH, Mount LE, Start IB (1971) Влияние температуры окружающей среды и плана питания на потери тепла группами растущих свиней. Аним Прод 13
12. 12. Verstegen MWA, Brascamp EW, Hel WVD (1978) Выращивание и откорм свиней в зависимости от температуры содержания и уровня кормления.Can J Anim Sci 58
13. 13. Heath ME (1983) Влияние температуры выращивания на состав тела молодых свиней. Comp Biochem Physiol A Comp Physiol 76: 363–366.
14. 14. Heath ME (1989) Влияние температуры выращивания и уровня потребления пищи на размер органов и состав тканей у поросят. Can J Physiol Pharmacol 67: 526–532.
15. 15. Baumgard LH, Rhoads RP (2012) Симпозиум по питанию жвачных животных: продуктивность жвачных животных и метаболические реакции на тепловой стресс. J Anim Sci 90: 1855–1865.
16. 16. Пирс С.К., Габлер Н.К., Росс Дж.В., Эскобар Дж., Пейшенс Дж.Ф. и др. (2013) Влияние теплового стресса и режима питания на обмен веществ у растущих свиней. Журнал зоотехники
17. 17. Yoshihara T, Naito H, Kakigi R, Ichinoseki-Sekine N, Ogura Y и др. (2012)Тепловой стресс активирует сигнальный путь Akt/mTOR в скелетных мышцах крыс. Acta Physiol (Oxf) 207: 416–426.
18. 18. Hansen PJ (2009)Влияние теплового стресса на репродукцию млекопитающих.Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci 364: 3341–3350.
19. 19. Баумгард Л.Х., Роадс Р.П., Роудс М.Л., Габлер Н.К., Росс Дж.В. и др. (2012) Влияние изменения климата на животноводство. В: В. Седжян SMKN, Т. Эзеджи, Дж. Лакриц и Р. Лал, редактор. Экологический стресс и улучшение в животноводстве, стр. 413–468.
20. 20. Foxcroft GR, Dixon WT, Dyck MK, Novak S, Harding JC, et al. (2009) Пренатальное программирование постнатального развития свиньи. Soc Reprod Fertil Suppl 66: 213–231.
21. 21. Foxcroft GR, Dixon WT, Novak S, Putman CT, Town SC, et al. (2006) Биологическая основа пренатального программирования постнатальной продуктивности свиней. J Anim Sci 84 Приложение: E105–112.
22. 22. Wang X, Wu W, Lin G, Li D, Wu G и др. (2010) Временной протеомный анализ выявил постоянное нарушение развития кишечника у новорожденных поросят с задержкой внутриутробного развития. J Proteome Res 9: 924–935.
23. 23. Csaba G, Inczefi-Gonda A, Dobozy O (1984)Наследственная передача F1-поколению гормонального импринтинга (рецепторной памяти), индуцированного у крыс неонатальным воздействием инсулина.Acta Physiol Hung 63: 93–99.
24. 24. Poston L (2011)Передача инсулинорезистентности и диабета 2 типа из поколения в поколение. Prog Biophys Mol Biol 106: 315–322.
25. 25. Tygesen MP, Nielsen MO, Norgaard P, Ranvig H, Harrison AP, et al. (2008) Ограничение питательных веществ на поздних сроках беременности: влияние на метаболическую и гомеоретическую адаптацию овец, последствия для веса ягненка при рождении и лактации. Арх Аним Нутр 62: 44–59.
26. 26. McCoard SA, Peterson SW, McNabb WC, Harris PM, McCutcheon SN (1997) Материнское ограничение влияет на развитие мышечных волокон у эмбрионов ягнят.Reprod Fertil Dev 9: 675–681.
27. 27. Дрейлинг К.Э., Карман Ф.С. 3-й, Браун Д.Э. (1991) Материнские эндокринные и метаболические реакции плода на тепловой стресс. J Dairy Sci 74: 312–327.
28. 28. Джонсон К.М., Лайл Дж.Г., Эдвардс М.Дж., Пенни Р.Х. (1976)Влияние пренатального теплового стресса на рост мозга и последовательное обучение обращению дискриминации у морских свинок. Brain Res Bull 1: 133–150.
29. 29. Yahav S, McMurtry JP (2001)Приобретение термотолерантности у цыплят-бройлеров путем температурного кондиционирования в раннем возрасте — влияние времени и температуры окружающей среды.Poult Sci 80: 1662–1666.
30. 30. Early RJ, McBride BW, Vatnick I, Bell AW (1991) Хронический тепловой стресс и внутриутробное развитие овец: II. Плацентарная клеточность и метаболизм. J Anim Sci 69: 3610–3616.
31. 31. Люси М.К., Сафрански Т.Дж., Роудс Дж.Н., Росс Дж.В., Габлер Н.К. и др. (2012) Влияние теплового стресса (ТШ) на терморегуляцию во время беременности у свиноматок первого опороса. J Anim Sci 90: 574.
32. 32. Боддикер Н., Габлер Н.К., Сперлок М.Е., Нетлтон Д., Деккерс Дж.К. (2011)Влияние неограниченного потребления корма и ограниченного потребления корма на показатели роста и состав тела йоркширских свиней, отобранных для снижения потребления остаточного корма.J Anim Sci 89: 40–51.
33. 33. Roseboom T, de Rooij S, Painter R (2006)Голландский голод и его долгосрочные последствия для здоровья взрослых. Ранний Хум Дев 82: 485–491.
34. 34. Dwyer CM, Stickland NC (1994) Дополнение ограниченной материнской диеты белком или углеводами предотвращает сокращение числа мышечных волокон плода у морской свинки. Бр Дж Нутр 72: 173–180.
35. 35. Fahey AJ, Brameld JM, Parr T, Buttery PJ (2005)Влияние материнского недоедания до мышечной дифференцировки на развитие мышечных волокон новорожденного ягненка. J Anim Sci 83: 2564–2571.
36. 36. Woodall SM, Breier BH, Johnston BM, Gluckman PD (1996)Модель задержки внутриутробного развития, вызванная хроническим материнским недоеданием у крыс: влияние на соматотрофическую ось и постнатальный рост. Дж. Эндокринол 150: 231–242.
37. 37. Town SC, Putman CT, Turchinsky NJ, Dixon WT, Foxcroft GR (2004)Количество зачатий в утробе матери влияет на развитие мышц плода свиньи. Репродукция 128: 443–454.
38. 38.Bee G (2004) Влияние кормления на ранних сроках беременности, массы тела при рождении и пола потомства на характеристики мышечных волокон свиней при убое. J Anim Sci 82: 826–836.
39. 39. Cerisuelo A, Baucells MD, Gasa J, Coma J, Carrion D, et al. (2009) Повышенное питание свиноматок в середине беременности влияет на развитие мышечных волокон и качество мяса, но не влияет на показатели роста. J Anim Sci 87: 729–739.
40. 40. Yates DT, Macko AR, Nearing M, Chen X, Rhoads RP, et al. (2012) Программирование развития в ответ на ограничение внутриутробного развития нарушает функцию миобластов и метаболизм скелетных мышц. J Беременность 2012: 631038.
41. 41. Tse WY, Town SC, Murdoch GK, Novak S, Dyck MK, et al. (2008) Скученность матки у свиноматки влияет на соотношение полов в помете, развитие плаценты и экспрессию эмбрионального миогенина на ранних сроках беременности. Reprod Fertil Dev 20: 497–504.
42. 42. Куигли С.П., Климанн Д.О., Какар М.А., Оуэнс Дж.А., Наттрасс Г.С. и соавт.(2005) Миогенез у овец изменяется в результате потребления корма матерью в периконцепционный период. Anim Reprod Sci 87: 241–251.
43. 43. Crosier AE, Farin CE, Rodriguez KF, Blondin P, Alexander JE, et al. (2002)Развитие скелетных мышц и экспрессия генов-кандидатов у плодов крупного рогатого скота из эмбрионов, полученных in vivo или in vitro. Биол Репрод 67: 401–408.
44. 44. Wigmore PM, Stickland NC (1983)Развитие мышц у крупных и мелких плодов свиней. J Анат 137 (часть 2): 235–245.
45. 45. Halevy O, Krispin A, Leshem Y, McMurtry JP, Yahav S (2001) Тепловое воздействие в раннем возрасте влияет на пролиферацию и дифференцировку сателлитных клеток скелетных мышц у цыплят. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol 281: R302–309.
46. 46. Tamashiro KL, Terrillion CE, Hyun J, Koenig JI, Moran TH (2009) Пренатальный стресс или диета с высоким содержанием жиров повышают восприимчивость к диетическому ожирению у потомства крыс. Диабет 58: 1116–1125.
47. 47. Мюллер Б.Р., Бэйл Т.Л. (2006)Влияние пренатального стресса на долгосрочную массу тела зависит от сроков и материнской чувствительности.Физиол Бехав 88: 605–614.
48. 48. Li G, Ali IS, Currie RW (2006)Инсулин индуцирует защиту миокарда и локализацию Hsp70 в плазматических мембранах сердца крыс. Am J Physiol Heart Circ Physiol 291: h2709–1721.
49. 49. Garofano A, Czernichow P, Breant B (1998) Масса и пролиферация бета-клеток после позднего внутриутробного и раннего постнатального недоедания у крыс. Диабетология 41: 1114–1120.

Обзор метаболизма лизина с акцентом на людях | Журнал питания

РЕЗЮМЕ

Лизин не может быть синтезирован большинством высших организмов и, следовательно, является незаменимой аминокислотой (ИУК), которая должна потребляться в достаточных количествах для поддержания синтеза белка.Хотя лизин является широко распространенной аминокислотой в белках организма, содержание лизина во многих важных источниках пищи (например, в злаках) ограничено. Более ранние наблюдения придавали большое значение лизину, потому что животные, получавшие диету с дефицитом лизина, не теряли вес так быстро, как животные, получавшие другие диеты с дефицитом IAA, что привело к теории о том, что может существовать особый пул лизина или метаболитов, которые могут быть преобразованы в лизин. Первым этапом катаболического пути лизина является образование сахаропина, а затем 2-аминоадипиновой кислоты, процессы, которые являются митохондриальными. Катаболизм 2-аминоадипиновой кислоты протекает путем декарбоксилирования до ряда сложных эфиров КоА, заканчивающихся ацетил-КоА. У млекопитающих печень, по-видимому, является основным местом катаболизма лизина. У людей метаболический и окислительный ответ лизина на диету с ограничением белка или лизина согласуется с тем, что было измерено для других IAA с изотопно-мечеными индикаторами. Известно, что кишечная микрофлора метаболизирует мочевину до аммиака и удаляет азот (N) для синтеза аминокислот.Исследования скармливания ¹⁵ N-аммония хлорида или ¹⁵ N-мочевины животным и людям демонстрируют появление ¹⁵ N-лизина в лизине кишечных микробов и лизине хозяина. Однако количество ¹⁵ N-лизина, переданного хозяину, трудно оценить непосредственно с использованием современных методов. Важно понимать роль микрофлоры кишечника в метаболизме лизина у человека, особенно в условиях, когда потребление лизина с пищей может быть ограничено, но необходимо разработать более эффективные методы.

Введение

Лизин — это незаменимая аминокислота (IAA), необходимая для нашего рациона и необходимое питательное вещество для роста животных (1). В 1955 году Уильям Роуз и его коллеги продемонстрировали, что лизин необходим в рационе человека для создания положительного баланса азота (N) (2). Предпосылка для подхода баланса азота к измерению потребностей в аминокислотах основана на простой концепции Блока и Митчелла (1, 3). Белки в организме содержат аминокислоты в различных количествах, и белки не могут быть синтезированы, если все аминокислоты не доступны в достаточном количестве.Если доступность какой-либо отдельной аминокислоты в рационе ограничена, синтез белка ограничен. Альтернативой усвоению пищевых аминокислот для синтеза белка является катаболизм, при котором конечным продуктом аминокислот является образование азота мочевины. Ограничение потребления 1 ИУК ограничит синтез белка в организме, что приведет к катаболизму избытка всех других диетических аминокислот, что приведет к отрицательному балансу азота.

Для определения потребности в конкретной ИУК различные рационы обеспечиваются постоянным и достаточным количеством всех ИУК, за исключением тестируемой ИУК.Диетическое количество тестируемой ИУК варьируется, и измеряется азотный баланс. При достаточном или избыточном количестве тестируемой ИУК баланс азота будет нулевым (или положительным у растущих животных), но при потреблении с пищей ниже потребности тестируемой ИУК баланс азота будет отрицательным за счет катаболизма избытка других аминокислоты, не входящие в состав белков. Для растущих животных требования IAA могут быть определены на основе прибавки в весе. Рационы с адекватным количеством тестируемой IAA вызывают рост и увеличение массы тела, а диеты с дефицитом тестируемой IAA не вызывают роста и/или потери массы тела.

Лизин также выделен в качестве важной ИУК, поскольку он присутствует в ограниченных количествах в нескольких важных пищевых источниках, например. зерна. ФАО/ВОЗ установили индекс аминокислот (ААС), основанный на идеальном составе каждой ИУК в белке для максимального синтеза белка (4). AAS АК в белке — это его концентрация в тестируемом белке, деленная на его концентрацию в идеальном белке. Идеальная/минимальная концентрация лизина для взрослых составляет 45 мг г ^-1 белка (4), что является второй по величине концентрацией ИУК: лейцин является самым высоким при 59 мг г ^-1 белка.Однако существует много продуктов с концентрацией лизина <45 мг г белка ^-1 , производящих ААС <1. Диеты, основанные на зерне (например, пшенице, кукурузе или рисе), имеют AAS в диапазоне 0,4–0,8 для лизина. Арахисовое масло имеет AAS = 0,7 для лизина. Низкий балл AAS говорит о «качестве» белка. Однако дефицит аминокислоты в белке можно преодолеть, потребляя большее количество белка, чтобы удовлетворить потребность в дефицитной аминокислоте. Кроме того, продукты с низким содержанием лизина можно сочетать с продуктами с высоким содержанием лизина.Например, сочетание белого риса (ААС = 0,8 для лизина) с фасолью (ААС = 1,5 для лизина) позволит получить блюдо, полное лизина и всех других ИУК. Таким образом, веганы могут потреблять достаточное количество лизина и других ИУК при правильно подобранной безмясной диете. Однако при выращивании быстрорастущих животных (кур и свиней), которых кормят исключительно зерновым рационом, недостаточность лизина является серьезной проблемой, что вызывает потребность в добавках лизина.

По-разному ли реагируют животные на рацион с дефицитом лизина по сравнению с другими рационами с дефицитом IAA?

Метод баланса азота можно использовать для определения потребностей животных в отдельных ИУК путем ограничения потребления отдельных ИУК в рационе и измерения пограничного значения баланса азота между положительным и отрицательным значениями.Однако существует более простой метод: запись суточного веса животного, который затем сравнивается с дневным весом контрольных животных, потребляющих достаточное количество ИУК. Для взрослых нерастущих животных достаточным потреблением конкретной ИУК будет такая композиция, которая поддерживает массу тела. Недостаточное потребление ИУК может привести к потере веса. Для растущих животных достаточное потребление ИУК будет способствовать нормальному увеличению веса, тогда как недостаточное потребление ИУК приведет к меньшему увеличению или даже потере веса.Этот подход методологически проще, чем измерение баланса азота. Однако были отмечены любопытные, неожиданные наблюдения, когда животных переводили на диету с дефицитом лизина по сравнению с диетой с дефицитом другой ИУК. Ямасита и Ашида давали крысам достаточное количество белка, дефицит лизина или дефицит треонина (5). Животные на диете с дефицитом лизина и треонина потеряли вес, но крысы на диете с дефицитом лизина потеряли очень мало веса по сравнению с крысами на диете с дефицитом треонина.Авторы также отметили, что крысы на диете без треонина уменьшили потребление пищи в большей степени, чем крысы на диете без лизина, что может частично объяснить эти результаты. Тем не менее, авторы также вводили ¹⁴ C-меченый лизин и треонин для измерения окисления лизина и треонина (5) и обнаружили пониженное окисление и большую консервацию лизина по сравнению с треонином, что снова предполагает наличие консервативного механизма для лизина по сравнению с треонином.

Саид и др.помещали взрослых крыс на лизиновую, метиониновую, треониновую или безбелковую диету (6). Крысы на безбелковой диете потеряли наибольшее количество веса к 14 неделям, и крысы на диете с дефицитом треонина показали аналогичную реакцию. Крысы на диете без метионина потеряли меньше веса, тогда как крысы на диете без лизина потеряли наименьшее количество веса. Эти результаты свидетельствуют о том, что действует механизм сохранения лизина, отличный от других ИУК.

Существуют и другие возможные механизмы сохранения лизина.Одним из них является значительно сниженное обязательное окисление на диете с дефицитом по сравнению с другими ИУК. Другим может быть наличие специального пула лизина, которого нет для других ИУК. Этот пул может иметь форму богатого лизином протеинового пула или пула метаболитов, который может быть преобразован обратно в лизин. Последнее предполагает механизм синтеза лизина. Еще одним источником лизина может быть синтез лизина кишечной микрофлорой, который затем будет доступен хозяину. Мы еще вернемся к этой концепции, но Torrallardona et al.(7) наблюдали, что крысы с низким содержанием белка и ограничением употребления собственных фекалий имели меньшую прибавку в весе и меньшее включение микробных аминокислот (измерялось путем введения крысам в рацион ¹⁵ N-хлорида аммония и последующего включения ¹⁵ N в лизин тела крысы). Может ли копрофагия привести к противоречивым результатам потери веса в исследованиях на крысах с различными диетами с ограничением аминокислот? Возможно, но различия между аминокислотами настолько разительны, что маловероятно, что причиной является копрофагия (6).

Распад лизина и метаболизм у млекопитающих

Хигасино и др. в 1965 г. продемонстрировали превращение лизина в сахаропин в печени крыс с использованием ¹⁴ C-меченого лизина (8). В 1967 году они продемонстрировали превращение сахаропина в 2-аминоадипиновую кислоту в митохондриальных препаратах печени крысы. В 1968 г. Hutzler и Dancis (9) подтвердили эти наблюдения, измерив превращение лизина в сахаропин в печени человека из образцов вскрытия.Митохондриальные ферменты получили названия и номера. Первый фермент, L-лизин-2-кетоглутаратредуктаза (LKR, EC 1.5.1.8), был очищен Noda и Ichihara (10). LKR превращает лизин в сахаропин (рис. 1А) путем конденсации с α-кетоглутаратом. Этот фермент также требует NADPH. Второй фермент, сахаропиндегидрогеназа (SDH, EC 15.1.9), превращает сахаропин в 2-аминоадипат-полуальдегид с образованием глутамата из ε-амино N лизина; SDH также требует NAD ⁺ . Третий фермент, 2-аминоадипатполуальдегиддегидрогеназа (EC 1.2.1.3.1), взаимопревращает полуальдегид 2-аминоадипата и 2-аминоадипиновую кислоту. Нода и Ичихара присвоили LKR молекулярную массу 52 кДа, но также обнаружили, что это тетрамер с молекулярной массой 230 кДа.

РИСУНОК 1

Метаболический путь катаболизма лизина у млекопитающих. Панель А: метаболизм лизина через 2-аминоадипиновую кислоту. L-лизин сначала превращается в сахаропин путем конденсации с α-кетоглутаратом под действием фермента L-лизин-кетоглутаратредуктазы. Затем сахаропин восстанавливается до 2-аминоадипинового полуальдегида с помощью сахаропиндегидрогеназы, высвобождая глутамат, содержащий ε-N лизина.Оба фермента получили название сахаропиндегидрогеназы, при этом LKR образует L-лизин в обратном направлении, а SDH образует L-глутамат. Позже было установлено, что 1 белок содержит активность как LKR, так и SDH, и получил название аминоадипат-полуальдегидсинтаза (11). 2-аминоадипиновый полуальдегид взаимопревращается в 2-аминоадипиновую кислоту. Панель B: катаболизм 2-аминоадипиновой кислоты напоминает катаболизм аминокислот с разветвленной цепью. Первым этапом является трансаминирование с α-кетоглутаратом с образованием глутамата из бывшего α-N лизина и образованием 2-кетоадипиновой кислоты.Затем дегидрогеназа декарбоксилирует первый углерод 2-кетоадипиновой кислоты, высвобождая CO ₂ и образуя глутарил-КоА, который затем метаболизируется через ряд сложных эфиров КоА до ацетил-КоА. Катаболизм триптофана также приводит к образованию 2-кетоадипиновой кислоты в результате деградации L-кинуренина. LKR, L-лизин-кетоглутаратредуктаза; СДГ, сахаропиндегидрогеназа.

РИСУНОК 1

Метаболический путь катаболизма лизина у млекопитающих. Панель А: метаболизм лизина через 2-аминоадипиновую кислоту.L-лизин сначала превращается в сахаропин путем конденсации с α-кетоглутаратом под действием фермента L-лизин-кетоглутаратредуктазы. Затем сахаропин восстанавливается до 2-аминоадипинового полуальдегида с помощью сахаропиндегидрогеназы, высвобождая глутамат, содержащий ε-N лизина. Оба фермента получили название сахаропиндегидрогеназы, при этом LKR образует L-лизин в обратном направлении, а SDH образует L-глутамат. Позже было установлено, что 1 белок содержит активность как LKR, так и SDH, и получил название аминоадипат-полуальдегидсинтаза (11).2-аминоадипиновый полуальдегид взаимопревращается в 2-аминоадипиновую кислоту. Панель B: катаболизм 2-аминоадипиновой кислоты напоминает катаболизм аминокислот с разветвленной цепью. Первым этапом является трансаминирование с α-кетоглутаратом с образованием глутамата из бывшего α-N лизина и образованием 2-кетоадипиновой кислоты. Затем дегидрогеназа декарбоксилирует первый углерод 2-кетоадипиновой кислоты, высвобождая CO ₂ и образуя глутарил-КоА, который затем метаболизируется через ряд сложных эфиров КоА до ацетил-КоА. Катаболизм триптофана также приводит к образованию 2-кетоадипиновой кислоты в результате деградации L-кинуренина.LKR, L-лизин-кетоглутаратредуктаза; СДГ, сахаропиндегидрогеназа.

В 1984 г. Markovitz et al. (11) при изучении семейных гиперлизинемий, врожденной ошибки редких чисел, исследовали активность LKR и SDH. Они очистили один белок массой 115 кДа и продемонстрировали, что он проявляет активность как LKR, так и SDH. Они также наблюдали нативный фермент в форме тетрамера с молекулярной массой 467 кДа. Единственный белок, обладающий активностью как в отношении LKR, так и в отношении SDH, объясняет различия между гиперлизинемиями. Семейная гиперлизинемия I типа характеризовалась как комбинированный дефицит LKR/SDH, тогда как семейная гиперлизинемия II типа характеризовалась как дефицит SDH. Единственный белок, катализирующий как LKR, так и SDH, объясняет комбинированный дефицит ферментов, наблюдаемый при гиперлизинемии I типа.

Markovitz et al. предложили назвать белок 2-аминоадипатполуальдегидсинтетазой (AASS). Белок AASS можно найти в UniprotKB (https://www.uniprot.org/uniprot/Q9UDR5) с регистрационным номером Q9UDR5 для человека и назначением гена AASS.Белок AASS человека содержит 926 аминокислот до обработки и молекулярную массу мономера 102 132 Да. Определена кристаллическая структура белка AASS, домен активности LKR отнесен к остаткам 33–455, а домен активности SDH – к остаткам 455–926.

Дрожжи могут синтезировать лизин, используя ферменты, аналогичные LKR и SDH, которые действуют в обратном порядке (12). Сахаропиндегидрогеназа [НАД(+), образующая L-лизин] (КФ 1.5.1.7) катализирует образование лизина из сахаропина, противоположного LKR. Сахаропиндегидрогеназа [НАДФ(+), образующая L-глутамат] (EC:1.5.1.10) катализирует образование сахаропина из 2-аминоадипат-полуальдегида, противоположного СДГ. Однако это отдельные белки 41 и 49 кДа, а не единый белок согласно AASS человека. Эти белки и активности дрожжевого типа не обнаружены в тканях млекопитающих.

2-аминоадипиновая кислота, полученная при расщеплении лизина, затем преобразуется 2-аминоадипиновой трансаминазой (EC 2.6.1.39) в 2-кетоадипиновую кислоту путем обратимого трансаминирования с 2-кетоглутаратом с образованием глутамата (рис. 1В).Затем 2-кетоадипат подвергается деградации через ряд стадий посредством декарбоксилирования и образования глутарил-КоА с дальнейшим разложением до ацетоацетил-КоА, а затем до ацетил-КоА.

Какие из возможных стадий пути разложения лизина могут регулировать окисление лизина? Блемингс и др. (13) помещали взрослых крыс на различные концентрации потребления казеина от недостаточного (5%), адекватного (20%) до избытка (60%) и измеряли активность LKR и SDH и окисление лизина с использованием ¹⁴ C-лизина в гомогенатах печени.Они определили, что активность LKR и SDH была в несколько раз больше, чем скорость предполагаемого митохондриального поглощения лизина или продукции лизина ¹⁴ CO ₂ . Блемингс и др. пришел к выводу, что поглощение лизина митохондриями является лимитирующей стадией окисления лизина. Этот вывод был поддержан Hommes et al. (14), которые изучали врожденные ошибки цикла мочевины. Они определили, что транспортер орнитина в митохондрии также транспортирует лизин, предполагая, что этот переносчик может быть регулятором окисления лизина митохондриями печени.

Хотя идея о том, что транспорт лизина в митохондрии является регулирующим этапом, привлекательна, есть две проблемы. Во-первых, нет данных о механизме регуляции транспорта лизина. Было бы невероятным, чтобы транспортер, ответственный за поставку молей орнитина в день для синтеза мочевины, также регулирует митохондриальный транспорт лизина. Вторая проблема заключается в том, что вывод об ограничении транспорта лизина в митохондрии основан на том, что абсолютные значения активности LKR и SDH в несколько раз превышают оценки транспорта и окисления лизина.Однако, когда рассчитываются значения кратности изменения этих параметров, переходя от избытка к недостаточному потреблению белка, активность LKR и SDH изменяется гораздо более резко, чем предполагаемый транспорт лизина. Основываясь на изменениях кратности, можно предположить, что LKR и/или SDH являются регуляторными стадиями окисления лизина.

Печень может быть основным органом, метаболизирующим лизин, но это не единственное место катаболизма лизина. В ряде статей опубликованы измерения активности LKR и SDH в различных тканях и животных.Две статьи будут процитированы как репрезентативные. Во-первых, это работа Manangi et al. (15), которые измеряли LKR и окисление лизина с помощью индикатора C-лизина ¹⁴ у цыплят в возрасте 3 недель. Они обнаружили, что почки, поджелудочная железа, сердце, мозг, легкие, селезенка, грудная мышца и кишечник вырабатывают ¹⁴ CO ₂ из ¹⁴ C-лизина. Скорость окисления варьировалась от 0,2 до 0,51 нмоль мин· ^-1 г ^-1 ткани, при этом максимальная скорость окисления в печени составляла 0,88 нмоль мин ^-1 г ^-1 ткани.Активность LKR также была обнаружена в каждой ткани в диапазоне от 0,10 до 0,58 нмоль мин ^-1 г ^-1 ткани с активностью печени, составляющей 0,65 нмоль мин ^-1 г ^-1 ткани. Мананги и др. продемонстрировали катаболизм лизина почти во всех тканях растущих птиц. Эти результаты могут отражать птиц, но не млекопитающих.

Пинк и др. (16) изучали взрослых свиней, млекопитающих, гораздо более близких к людям, чем молодые цыплята. Пинк и др. измеряли активность LKR и SDH, а также окисление лизина через ¹⁴ C-лизин в митохондриях, выделенных из тканей.Они обнаружили значительную активность LKR в печени, почках, эпителиальных клетках кишечника и сердца, но меньшую активность в скелетных мышцах. Почки имели измеримую активность СДГ, примерно вдвое меньше, чем печень, но никакая другая ткань не проявляла активности СДГ. Как ни странно, скелетные мышцы и кишечные эпителиальные клетки генерировали ¹⁴ CO ₂ из ¹⁴ C-лизина, хотя эти ткани не демонстрировали измеримой активности SDH. Загадка заключается в том, что в некоторых тканях обнаруживается активность LKR, но не активность SDH, хотя один белок AASS выполняет и то, и другое.Возможно, SDH-конец AASS заблокирован или нефункционален. Сходным образом, как можно наблюдать окисление лизина в этих тканях, которые не проявляют активности SDH?

Вывод из этих и других исследований заключается в том, что оценка активности ферментов затруднена, но на основе исследований окисления лизина основным местом метаболизма лизина в тканях человека является печень.

Регулирование окисления лизина человека

Когда IAA специально ограничены в рационе, организм будет сохранять потерю этой IAA в основном за счет снижения ее окисления.Таким образом, мы должны быть в состоянии определить потребность в потреблении лизина с пищей, поместив испытуемых на потребление кристаллических аминокислот, чтобы имитировать потребление белка, обеспечивая при этом переменное количество лизина (от нижней потребности до верхней) и измеряя окисление лизина с помощью ¹³ C. -лизин (или ¹⁴ С-лизин) индикатор. Окисление лизина должно быть сохранено до минимального обязательного количества ниже потребности в лизине. Когда потребление лизина превышает потребность, избыток лизина должен окисляться.Когда окисление лизина нанесено на график по сравнению с потреблением лизина, скорости окисления ниже и выше требований должны давать 2 прямые линии с требованием, являющимся пересечением линий (точка разрыва). Мередит и др. (17) провели это исследование с использованием L-[1– ¹³ C]лизина у 8 взрослых мужчин. Хотя ожидалось, что окисление лизина станет равномерным на обязательном минимальном уровне ниже требуемого, окисление лизина продолжало снижаться. Однако пограничная точка может быть оценена как 32 мг/кг ^-1 d ^-1 для лизина.

Другой метод оценки потребности в ИУК с пищей был разработан Ball and Pencharz (18) и получил название индикаторного метода окисления аминокислот. Вместо использования индикатора лизина для измерения окисления лизина во время ограничения потребления лизина они использовали другую ¹³ C- или ¹⁴ C-меченую ИУК и измеряли ее окисление. Потребление индикаторной аминокислоты и всех других аминокислот, кроме лизина, оставалось постоянным. Таким образом, сверх потребности в лизине этот показатель ИУК имеет постоянную степень окисления.Однако, когда потребление лизина падает ниже потребности в лизине, окисление аминокислоты-индикатора увеличивается, синтез белка в организме ограничивается, а избыточное потребление ИУК окисляется. Этот принцип был продемонстрирован Zello et al. (18) использование L-[1- ¹³ C]фенилаланина в качестве индикатора аминокислоты при кормлении 7 взрослых мужчин различными дозами лизина. Использование фенилаланина в качестве индикатора вместо лизина обеспечило четкое пограничное значение 37 мг кг ^-1 d ^-1 лизина в качестве пищевой потребности.

В 2002 году Совет по пищевым продуктам и питанию и Институт медицины рассмотрели вышеуказанные исследования индикаторов с использованием ¹³ C-лизина и исследования с использованием метода окисления индикаторных аминокислот, в которых испытуемые получали различное потребление лизина (19). До этого отчета в последнем отчете ФАО/ВОЗ за 1985 г. потребность в лизине определялась на уровне 12 мг кг ^-1 d ^-1 на основе измерений баланса азота (20). В отчете за 2002 г. потребность в лизине для взрослых была пересмотрена в сторону повышения до 31 мг/кг ^-1 d ^-1 на основе исследований индикаторов ¹³ C (21).Группа экспертов ФАО/ВОЗ/УООН (Университет Организации Объединенных Наций) 2007 г. пересмотрела эти и дополнительные исследования, чтобы определить текущую расчетную суточную потребность в лизине, которая составляет 30 мг кг ^-1 d ^-1 для взрослых (19).

Реакция метаболизма лизина на изменения в потреблении белка с пищей и поглощение лизина внутренностным ложем

Как и для каждой аминокислоты, в организме происходит обмен свободного лизина с поступлением в свободный пул из пищевых источников и в результате распада белка в организме.Эти входы уравновешиваются удалением лизина из свободного пула для синтеза белка и метаболизма/окисления лизина. Может ли быть другая адаптация оборота лизина в организме по сравнению с другими ИУК, когда они ограничены? Хорр и др. (22) давали 6 взрослым мужчинам потребление белка либо с избытком (1,5 г белка кг ^-1 д ^-1 ), либо с дефицитом (0,1 г белка кг ^-1 д ^-1 ) белка. Стабильные изотопно-меченые индикаторы лейцина и лизина вводили в сытом состоянии для измерения обмена лейцина и лизина в организме.И лейцин, и лизин являются одними из наиболее распространенных ИУК в белке организма и должны иметь сходные потоки и реакции на потоки при ограничении белка. Как видно из Таблицы 1, оборот (поток) лейцина и лизина был одинаковым при потреблении 1,5 и 0,1 г белка кг ^-1 д ^-1 и имел сходное сохранение оборота ~24% при приеме белка. было ограничено до 0,1 г белка кг ^-1 d ^-1 .

ТАБЛИЦА 1

Влияние потребления белка на поток лейцина и лизина в организме и их поглощение при первом прохождении чревным ложем в сытом состоянии ) . Оборот всего тела (мкмоль кг ^-1 ч ^-1 ) . Поглощение внутренних органов при первом прохождении (%) . Лейцин . Лизин . Лейцин . Лизин . 1,5 137,2 ± 4,3 134,7 ± 3,6 32 ± 6 35 ± 7 86 0.1 72.2 ± 4.7 72.2 ± 4,7 1 74,6 ± 5,0 74,6 ± 5,0 27 ± 6 27 ± 6 26 ± 3

Допуск белка (G кг -1 ) .	Оборот всего тела (мкмоль кг -1 ч -1 ) .		Поглощение внутренних органов при первом прохождении (%) .
	Лейцин .	Лизин .	Лейцин .	Лизин .
1,5	137.2 ± 4.3	134,7 ± 3,6	32 ± 6	35 ± 7	6 35 ± 7
0,1	72,2 ± 4,7	74,6 ± 5,0	27 ± 6	27 ± 3

Таблица 1 д ⁻¹ ) . Оборот всего тела (мкмоль кг ^-1 ч ^-1 ) . Поглощение внутренних органов при первом прохождении (%) . Лейцин . Лизин . Лейцин . Лизин . 1,5 137,2 ± 4,3 134,7 ± 3,6 32 ± 6 35 ± 7 86 0.1 72.2 ± 4.7 72.2 ± 4,7 1 74,6 ± 5,0 74,6 ± 5,0 27 ± 6 27 ± 6 26 ± 3

Допуск белка (G кг -1 ) .	Оборот всего тела (мкмоль кг -1 ч -1 ) .		Поглощение внутренних органов при первом прохождении (%) .
	Лейцин .	Лизин .	Лейцин .	Лизин .
1,5	137.2 ± 4.3	134,7 ± 3,6	32 ± 6	35 ± 7	6 35 ± 7
0,1	72,2 ± 4,7	74,6 ± 5,0	27 ± 6	27 ± 3

Эти измерения оборота всего тела не учитывают вклад отдельных органов. Другим возможным способом сохранения лизина, когда он ограничен в рационе, по сравнению с другими ИУК, может быть уменьшение выведения лизина внутренностным ложем (кишечник и печень) во время всасывания питательных веществ при первом прохождении.В том же исследовании Hoerr et al. (22) также вводили индикаторы лейцина и лизина как внутривенно, так и внутрижелудочно, чтобы измерить экстракцию лейцина и лизина при первом прохождении через чревное ложе. При избыточном потреблении белка (1,5 г белка кг ^-1 д ^-1 ) ~1/3 лейцина и лизина удалялось внутренностным руслом при первом проходе. Когда белок был ограничен (0,1 г белка кг ^-1 d ^-1 ), количество лейцина или лизина, экстрагированного при первом прохождении внутренностного слоя, составляло 26%, что не является статистически значимым снижением.Реакция была одинаковой как для лейцина, так и для лизина, что свидетельствует об отсутствии специальной адаптации, назначенной лизину.

Могут ли кишечные бактерии служить источником лизина в условиях диетического ограничения лизина?

Объяснением того, почему животные на диете с ограничением лизина не теряют массу тела так быстро, как это происходит на других диетах с ограничением IAA, может быть вклад лизина, синтезируемого кишечными микробами, который может реабсорбироваться и использоваться хозяином. Этот вклад должен быть специфичным для лизина.Эта гипотеза интригует, но ее трудно оценить. В 1969 году Walser и Bodenlos (23) вводили ¹⁵ N- и ¹⁴ C-мочевину внутривенно взрослым субъектам и измерили результирующую фармакокинетику исчезновения ¹⁵ N и ¹⁴ C в мочевине и появления ¹⁵ N в мочевом аммиаке. Это исследование показало, что 15–30 % новообразованной мочевины гидролизуется кишечной флорой и что азот можно утилизировать. Джексон также показал аналогичные результаты (24, 25) и предположил, что если кишечные бактерии используют мочевину, бактерии могут использовать этот N для синтеза аминокислот, которые также могут быть реабсорбированы хозяином.

Торраллардона и др. (26) давали ¹⁵ N-хлорид аммония 4 растущим молодым крысам на 10-дневной диете с ограничением белка, что вызвало значительный метаболический стресс. Они обнаружили ¹⁵ обогащение N-лизином с избытком 0,27 ± 0,02 атомных процента (APE) в кишечном микробном белке, 0,0076 ± 0,0005 APE в печени и 0,0066 ± 0,0005 APE в туше. Хотя эти цифры кажутся маленькими, они есть, но они значительны. Также были измерены четыре стерильных крысы, и в туше ¹⁵ N-лизин практически не содержался.Эти результаты показывают, что кишечная микрофлора может использовать N аммония, включая его, несомненно, в ряд соединений, хотя авторы измерили только ¹⁵ включения N в лизин. Эти результаты также показывают, что часть этого микробного лизина передается животным-хозяевам.

Измерения обогащения ¹⁵ N не указывают количество лизина, синтезированного кишечными микробами, или количество лизина, переданного хозяину. Количество микробного лизина, переданного хозяину, можно определить путем умножения общего содержания лизина в туше и обогащения лизина ¹⁵ N для получения общего ¹⁵ N-лизина в туше и деления на обогащение микробного лизина ¹⁵ N .По оценкам этой оценки, микробный вклад кишечника в организм хозяина составил 21 мг (кг массы тела) ^-0,75 , что, как отмечают авторы, составляет 2/3 расчетной потребности в содержании лизина (26). Есть предостережения: животные были молодыми, растущими крысами, которые, как ожидается, будут иметь максимальную потребность в ИУК, и они находились на 10-дневной безбелковой диете, которая по существу исключила бы потребление ИУК. В то же время безбелковая диета лишит кишечные микробы возможности использовать пищевые аминокислоты и заставит их синтезировать все свои аминокислоты из доступного ¹⁵ NH ₄ Cl.Результатом будет максимальное производство ¹⁵ N-аминокислот микробами и максимальное поглощение микробно синтезированного лизина животными-хозяевами.

Эти авторы также рассмотрели другую возможную проблему с исследованиями, проведенными на крысах: микробный лизин косвенно поглощался крысами, поедающими собственные фекалии (копрофагия). Последующее исследование (7) показало, что действительно, когда копрофагия была устранена, включение микробного лизина ¹⁵ N в крысиные белки практически отсутствовало.Такие осложнения, как копрофагия, у человека не ожидаются.

Три группы, имеющие опыт работы с изотопными индикаторами, Metges (Германия), Young (США) и Fuller (Великобритания), объединились для завершения впечатляющего исследования продукции аминокислот кишечной микрофлорой у людей (27, 28). Ранее они получили данные о микробной продукции и переносе лизина у свиней и продемонстрировали, что продукция лизина происходит в основном в тонком кишечнике (27). В текущих исследованиях 6 взрослых мужчин [в Массачусетском технологическом институте (MIT), США] получали либо ¹⁵ NH ₄ Cl, либо [ ¹⁵ N ₂ ]мочевину, и 7 илеостоматозных субъектов (в Абердине, США). UK) подавали ¹⁵ NH ₄ Cl.Выделяли бактериальный белок фекальной или подвздошной жидкости и измеряли общее содержание ¹⁵ N и лизина ¹⁵ N . Лизин плазмы ¹⁵ Обогащение азотом также измеряли для оценки доли микробного лизина, переданного субъектам. Кроме того, испытуемые из MIT получали 24-часовое внутривенное введение L-[1– ¹³ C]лизина с измерением лизина в плазме ¹³ C и дыханием ¹³ CO ₂ для определения лизина в организме. оборот (скорость появления) и окисление.Субъекты также получали 24-часовое введение L-[6,6- ² H ₂ ]лизина перорально для определения удаления пищевого лизина при первом прохождении через чревное ложе. Эта 24-часовая инфузионная модель была ранее разработана и проверена El-Khoury et al. (29, 30).

Этот набор исследований индикаторов был предназначен для оценки вклада микробного лизина в организм человека (27, 28) с использованием простой модели, показанной на рисунке 2, которая была описана ранее (1) и использовалась многочисленными исследователями.Оборот (Q) аминокислоты во всем организме определяется для свободного пула путем измерения разбавления (обогащения) меченого индикатора аминокислоты, введенного внутривенно (L-[1– ¹³ C]лизина в этих исследованиях). . Источниками поступления аминокислот являются аминокислоты, высвобождаемые при расщеплении белка в организме (B) и потребление аминокислот/белков с пищей (I). Аминокислоты покидают свободный пул путем поглощения для синтеза белка (S) и катаболизма (C) до конечных продуктов (CO ₂ и мочевины).{E_{p}}/_{E_{m}}}}.\end{eqnarray}$$

(1)

РИСУНОК 2

Классическая модель обмена белков и аминокислот в организме. Аминокислоты удаляются из свободного пула путем поглощения для синтеза белка в организме (S) и катаболизма (C, окисление до CO ₂ и мочевины). Аминокислоты поступают в свободный пул при расщеплении белков всего организма (В) и при поступлении с пищей (I). Имеется дополнительный вход через кишечник за счет микробных аминокислот (I _m ). Показано уравнение баланса для оборота всего тела (Q).Незаменимые аминокислоты будут иметь дополнительный вклад посредством синтеза de novo. АА, аминокислота.

РИСУНОК 2

Классическая модель обмена белков и аминокислот в организме. Аминокислоты удаляются из свободного пула путем поглощения для синтеза белка в организме (S) и катаболизма (C, окисление до CO ₂ и мочевины). Аминокислоты поступают в свободный пул при расщеплении белков всего организма (В) и при поступлении с пищей (I). Имеется дополнительный вход через кишечник за счет микробных аминокислот (I _m ).Показано уравнение баланса для оборота всего тела (Q). Незаменимые аминокислоты будут иметь дополнительный вклад посредством синтеза de novo. АА, аминокислота.

В таблице 2 показано обогащение ¹⁵ N лизином для различных экспериментальных условий. Обогащение лизина ¹⁵ N микробным белком было аналогично маркировке общего микробного обогащения ¹⁵ N у здоровых субъектов. Однако у пациентов с илеостомией была обнаружена очень низкая концентрация лизина ¹⁵ N обогащения по сравнению с общим ¹⁵ N мечением микробного белка подвздошной кишки.Подвздошная жидкость специфична для микробного белка подвздошной кишки и не включает вклад микробов толстой кишки. Это низкое содержание ¹⁵ N-лизина в микробном белке подвздошной кишки затем войдет в знаменатель расчета вклада микробного лизина в хозяина (уравнение 1) и увеличит кажущийся вклад микробного лизина в подвздошную кишку в хозяина. Противоречит интуиции, что небольшое обогащение ¹⁵ N в знаменателе указывает на большой вклад в хозяина, а не на маленький.

ТАБЛИЦА 2

Включение ^{1 5} N-мочевины или ^{1 5} N-хлорида аммония в кишечный микробный белок, лизин, связанный с белком, и лизин плазмы ^{7 67 906 9008 . 15 Обогащение N (APE) . . Микробный белок . Плазма . . Подача изотопов . Итого 15 Н . Лизин 15 N (E _m ) . Лизин 15 N (E _p ) . E _p /E _м . 98 15 N-мочевина, нормальные предметы 0,135 ± 0,033 0,135 ± 0,033 0,144 ± 0,036 0,006 ± 0,004 0.05 ± 0.04 15 NH ₄ CL, Нормальные предметы 0.299 ± 0.113 0.299 ± 0.113 0.222 ± 0,076 0,018 ± 0,009 0,09 ± 0,06 86 15 NH ₄ , Илеостоматные предметы 0,370 ± 0,020 0,040 ± 0,030 0,040 ± 0,030 0,009 ± 0,21 ± 0,04 0,21 ± 0,04}

.	15 Обогащение N (APE) .
.	Микробный белок .		Плазма .	.
Подача изотопов .	Итого 15 Н .	Лизин 15 N (E m ) .	Лизин 15 N (E p ) .	E p /E м .
15 N-мочевины, нормальные предметы	0.135 ± 0,033	0.135 ± 0,033	0,144 ± 0,036	0,144 ± 0,036	0,006 ± 0,004	0,05 ± 0,04
15 NH 4 CL, нормальные предметы	0.299 ± 0.113	0.222 ± 0,076	0,222 ± 0,076	0,018 ± 0,09	1	0,09 ± 0,06	0,09 ± 0,06
15 NH 4 CL, илестоматные предметы	0,370 ± 0,020	0.040 ± 0,030	0,009 ± 0,003	0,009 ± 0,21 ± 0,04	0,21 ± 0,04

Таблица 2

Включение ^{1 5} N-мочевина или ^{1 5} N-аммоний хлорид в кишечниковый микробный белок, белок связанный лизин и лизин плазмы ¹

.	15 Обогащение N (APE) .
.	Микробный белок .		Плазма .	.
Подача изотопов .	Итого 15 Н .	Лизин 15 N (E m ) .	Лизин 15 N (E p ) .	E p /E м .
15 N-мочевина, нормальные субъекты	0.135 ± 0,033	0.144 ± 0,036	0,006 ± 0.004	0,05 ± 0,04
15 NH 4 CL, Нормальные предметы	0.299 ± 0.113	1	0,222 ± 0,076	0,018 ± 0,009	0.09 ± 0,06
15 NH 4 CL, Ileostomate Субъекты	0,370 ± 0,020	0,040 ± 0,030	0,009 ± 0,003	0,21 ± 0,04

6

.	15 Обогащение N (APE) .
.	Микробный белок .		Плазма .	.
Подача изотопов .	Итого 15 Н .	Лизин 15 N (E m ) .	Лизин 15 N (E p ) .	E p /E м .
15 N-мочевины, нормальные предметы	0.135 ± 0,033	0.135 ± 0,033	0,144 ± 0,036	0,144 ± 0,036	0,006 ± 0,004	0,05 ± 0,04
15 NH 4 CL, нормальные предметы	0.299 ± 0.113	0,222 ± 0,076	0,222 ± 0,076	0,018 ± 0,09	1	0,09 ± 0,06
15 NH 4 CL, предметы илеостомата	0.370 ± 0.020	0,040 ± 0,030	0,040 ± 0,030	0,009 ± 0,21 ± 0,0400 0,009 ± 0,21 ± 0,04

Хотя все ¹⁵ N Обогасимые для плазмы ЛИЗИН МАЛЕНЫ, ¹⁵ N Маркировка плазменного лизина была выше при предметах MIT кормили ¹⁵ NH ₄ Cl по сравнению с [ ¹⁵ N ₂ ]мочевиной, ¹⁵ NH ₄ Cl производили более высокое обогащение микробилизином ¹⁵ N . Однако содержание лизина в плазме ¹⁵ N было ниже у субъектов с илеостомией по сравнению с субъектами с MIT.При рассмотрении отношения ¹⁵ N-лизина в плазме к соотношению микробного ¹⁵ источника N-лизина (E _p / E _m ) (таблица 2) обнаруживаются очевидные большие различия в зависимости от различных условия. Микробный вклад в лизин хозяина варьировался от 5 ± 4%, когда [ ¹⁵ N ₂ ]мочевина скармливалась, до 9 ± 6%, когда ¹⁵ NH ₄ Cl скармливали субъектам MIT, до 21 ± 4% у илеостоматозных больных. Высокий вклад через белок подвздошной кишки обусловлен низким обогащением лизина ¹⁵ N в знаменателе микробного белка подвздошной кишки.Эти значения также имеют очень большие неопределенности, ограничивающие выводы, которые можно сделать.

Метжес и др. также вводили внутривенный индикатор лизина для непосредственного измерения оборота лизина во всем теле (Q) и смогли оценить количество микробного лизина, внесенного в организм хозяина (I _m ). Вклад микробного лизина варьировался от 12 до 68 мг кг ^-1 d ^-1 для пациентов с MIT, получавших [ ¹⁵ N ₂ ]мочевину, по сравнению с пациентами с илеостомией, получавшими ^{Cl 15} 1 NH 4 0.Потребление лизина (I) у всех испытуемых составляло 45 мг кг ^-1 д ^-1 . Как отмечают авторы (27), эти значения вклада микробного лизина недостоверны и не могут быть приняты за чистую монету. Вывод состоит в том, что модель, показанная на рисунке 2, слишком проста и что полученные значения не обязательно являются чистым синтезом и вкладом микробов. К сожалению, эти исследования индикаторов с ¹⁵ N не измеряют прямой массоперенос аминокислот от микрофлоры к хозяину.

Мы также можем подойти к вопросу о вкладе микробного лизина в хозяина относительным образом, сравнив обогащение ¹⁵ N других аминокислот с обогащением лизина. Обогащение ¹⁵ N было измерено в плазме для нескольких аминокислот (28) и показано на Рисунке 3. Как и ожидалось, аминокислоты, которые могут быть синтезированы de novo у человека (т.е. незаменимые аминокислоты), содержат большую часть ^{Обогащение 15 90 113 N, обнаруженное в аминокислотах плазмы, показано на рисунке 3.Глутамат, играющий центральную роль в переаминировании и переносе амино-N, имел самое высокое обогащение 15 N. Лейцин и валин, IAA, которые подвергаются значительному обратимому трансаминированию с глутаматом (1), также были значительно обогащены 15 N (значения для изолейцина не сообщаются). Однако из всех зарегистрированных ИУК у лизина было самое низкое обогащение 15 N . Эти результаты свидетельствуют о том, что хотя очевидно, что кишечная микрофлора вносит лизин в организм хозяина, этот вклад невелик по сравнению с другими аминокислотами.}

РИСУНОК 3

Включение ¹⁵ N микрофлоры кишечника в различные аминокислоты плазмы 6 здоровых взрослых субъектов, получавших ¹⁵ N-хлорид аммония. Рисунок составлен на основе данных Metges et al. (28). Обогащение в среднем ¹⁵ N (APE). Столбики погрешностей ± стандартное отклонение. APE, атомный процент избытка.

РИСУНОК 3

Включение ¹⁵ N микрофлоры кишечника в различные аминокислоты плазмы 6 здоровых взрослых субъектов, получавших ¹⁵ N-хлорид аммония.Рисунок составлен на основе данных Metges et al. (28). Обогащение в среднем ¹⁵ N (APE). Столбики погрешностей ± стандартное отклонение. APE, атомный процент избытка.

Резюме

Лизин является особенным IAA, поскольку он ограничивает важные источники пищи (например, зерновые). Лизин катаболизируется сначала в сахаропин, а затем в 2-аминоадипиновый полуальдегид через один белок с активностью LKR и SDH. Хотя активность этих ферментов была обнаружена в нескольких различных тканях других видов животных, печень, по-видимому, является основным местом катаболизма лизина у людей.

Лизин, по-видимому, не отличается метаболическим действием у человека от других ИУК. Например, обмен и окисление как лейцина, так и лизина во всем организме сохраняются одинаково у людей с ограничением белка, и аналогичная реакция сохранения происходит с точки зрения экстракции первого прохода через внутренностное ложе. В ранних исследованиях сообщалось, что животные, получавшие диету с дефицитом лизина, теряли массу тела медленнее, чем при ограничении другой ИУК. Однако в этих исследованиях не измерялись многие IAA, и у них были проблемы с дизайном эксперимента, которые ограничивали интерпретацию результатов.

Специфический синтез лизина кишечной микрофлорой с поглощением хозяином также считается потенциально важным источником лизина по сравнению с другими ИУК. Тем не менее, исследования были сосредоточены на кормлении ¹⁵ NH ₄ Cl, который включен в микробные аминокислоты, но измерения обогащения ¹⁵ N не позволяют измерить количество аминокислоты, синтезированной и переданной хозяину. Результаты показывают, что измерения индикаторов завышают чистый вклад лизина в микрофлору человека.Сравнение ¹⁵ N мечения аминокислот плазмы, полученных из кишечной микрофлоры, позволяет предположить, что микробный вклад лизина не отличается от вклада других аминокислот и может быть меньше. Однако эти результаты, возможно, связаны с используемыми методами. В условиях ограниченного потребления лизина с пищей микрофлора кишечника может играть важную роль в метаболизме лизина у человека. Однако современные методы не позволяют напрямую оценить метаболизм кишечной микрофлоры или влияние, которое могут оказывать эти микробы.Методы индикаторов стабильных изотопов — хорошее начало, но план эксперимента необходимо будет улучшить, если мы надеемся понять абсолютный вклад продукции лизина кишечной микрофлорой и его передачи хозяину.

Благодарности

Вклад автора заключался в следующем: DEM: отвечал за дизайн, написание и окончательное содержание рукописи; и DEM: прочитать и утвердить окончательный вариант рукописи.

Примечания

Автор сообщил, что финансирование этой работы не получено.

Раскрытие информации автором: DEM сообщает об отсутствии конфликта интересов.

В Токио, Япония, 19–20 ноября 2019 г. прошел 10-й семинар по оценке адекватного и безопасного потребления пищевых аминокислот. Конференция была организована при поддержке Международного совета по изучению аминокислот (ICAAS).

Эта статья является частью приложения к 10-му семинару по оценке аминокислот, спонсируемому Международным советом по изучению аминокислот (ICAAS). Приглашенными редакторами приложения являются: Деннис М. Бир, Люк Сайнобер, Сидни Моррис, Патрик Стовер, Мотони Кадоваки и Раджавель Эланго.Расходы на проезд и проживание приглашенных редакторов были полностью оплачены ICAAS. Затраты на публикацию этого приложения частично покрывались за счет оплаты страниц. Мнения, выраженные в этой публикации, принадлежат авторам и не принадлежат ни спонсорам, ни издателю, ни редактору, ни редакционной коллегии The Journal of Nutrition .

Используемые сокращения: АК, аминокислота; ААС, аминокислотный скор; AASS, 2-аминоадипатполуальдегидсинтетаза; APE, атомный процент избытка; ИУК, незаменимая аминокислота; LKR, L-лизин-2-кетоглутаратредуктаза; Массачусетский технологический институт, Массачусетский технологический институт; СДГ, сахаропиндегидрогеназа.

Каталожные номера

1.

Мэтьюз

Германия

.

Белки и аминокислоты

. В:

Ross

AC

,

Caballero

,

Caballero

B

,

двоюродные братья

RJ

,

Tucker

KL

,

Ziegler

TR

, EDS.

Современное питание в норме и при болезни

.

Филадельфия

:

Липпинкотт, Уильямс и Уилкинс

,

2014

:

3

–

35

.2.

Роуз

WC

,

Борман

А

,

Кун

MJ

,

Ламберт

ГФ

.

Потребность человека в аминокислотах. X. Потребность в лизине

.

J Биол Хим

.

1955

;

214

:

579

–

87

.3.

Митчелл

HH

,

Блок

RJ

.

Некоторые зависимости между содержанием аминокислот в белках и их пищевой ценностью для крыс

.

J Биол Хим

.

1946

;

163

:

599

–

620

.4.

Миллуорд

DJ

.

Шкала аминокислот для оценки качества белка

.

Бр Дж Нутр

.

2012

;

108

:

S31

–

43

.5.

Ямасита

К

,

Ашида

К

.

Метаболизм лизина у крыс, получавших диету без лизина

.

Дж Нутр

.

1969

;

99

:

267

–

73

.6.

Саид

АК

,

Хегстед

DM

,

Хейс

KC

.

Реакция взрослых крыс на недостаток различных незаменимых аминокислот

.

Бр Дж Нутр

.

1974

;

31

:

47

–

57

.7.

Торраллардона

D

,

Харрис

CI

,

Фуллер

MF

.

Микробный синтез и утилизация аминокислот у крыс: роль копрофагии

.

Бр Дж Нутр

.

1996

;

76

:

701

–

9

.8.

Хигасино

К

,

Цукада

К

,

Либерман

I

.

Сахаропин: продукт распада лизина в печени млекопитающих

.

Биохим Биофиз Рес Сообщество

.

1965

;

20

:

285

–

90

.9.

Hutzler

J

,

Dancis

J

.

Превращение лизина в сахаропин тканями человека

.

Биохим Биофиз Акта

.

1968

;

158

:

62

–

9

.10.

Нода

С

,

Ичихара

А

.

Очистка и свойства L-лизин-α-кетоглутаратредуктазы из митохондрий печени крыс

.

Биохим Биофиз Акта

.

1978

;

525

:

307

–

13

.11.

Марковиц

П.Дж.

,

Чуанг

ДТ

,

Кокс

РП

.

Семейные гиперлизинемии. Очистка и характеристика бифункциональной аминоадипиновой полуальдегидсинтазы с активностью лизин-кетоглутаратредуктазы и сахаропиндегидрогеназы

.

J Биол Хим

.

1984

;

259

:

11643

–

6

.12.

Сондерс

ПП

,

Броквист

HP

.

Сахаропин, промежуточное соединение аминоадипиновой кислоты в пути биосинтеза лизина. IV. Сахаропиндегидрогеназа

.

J Биол Хим

.

1966

;

241

:

3435

–

40

.13.

Блемингс

КП

,

Креншоу

TD

,

Беневенга

Нью-Джерси

.

Поглощение лизина митохондриями ограничивает окисление лизина в печени у крыс, получавших рацион, содержащий 5, 20 или 60% казеина

.

Дж Нутр

.

1998

;

128

:

2427

–

34

.14.

Hommes

FA

,

Kitchings

L

,

Eller

AG

.

Поглощение орнитина и лизина митохондриями печени крыс

.

Биохим Мед

.

1983

;

30

:

313

–

21

.15.

Manangi

MK

,

SF

SF

,

Engels

JG

,

JG

,

Higgins

AD

,

Killefer

J

,

Wilson

Me

,

Blemings

KP

.

Лизин α-кетоглутаратредуктаза и окисление лизина распределяются во внепеченочных тканях кур

.

Дж Нутр

.

2005

;

135

:

81

–

5

.16.

розовый

дБ

,

GATRELL

SK

,

ELANGO

R

,

TURCHINSKY

J

,

KIESS

AS

,

BLEMINGS

KP

,

DIXON

WT

,

Мяч

RO

.

Лизин α-кетоглутаратредуктаза, но не сахаропиндегидрогеназа, подвергается субстратному ингибированию в печени свиней

.

Нутр Рез

.

2011

;

31

:

544

–

54

.17.

Meredith

CN

,

WEN

Z-M

,

Bier

DM

,

Matthews

de

,

Young

VR

.

Кинетика лизина при постепенном потреблении лизина у молодых мужчин

.

Am J Clin Nutr

.

1986

;

43

:

787

–

94

.18.

Zello

GA

,

Pencharz

PB

,

Мяч

RO

.

Пищевая потребность молодых взрослых мужчин в лизине, определяемая путем окисления L-[1- ¹³ C]фенилаланина

.

Am J Physiol Endocrinol Metab

.

1993

;

264

:

E677

–

E85

.19.

ФАО/ВОЗ/УООН

.

Потребность в белках и аминокислотах в питании человека

.

Женева (Швейцария)

:

Всемирная организация здравоохранения

,

2007

.20.

ФАО/ВОЗ/УООН

.

Потребность в энергии и белке

.

Женева

:

Всемирная организация здравоохранения

,

1985

.21.

Совет по пищевым продуктам и питанию — Медицинский институт (США)

.

Справочное пищевое потребление энергии, углеводов, клетчатки, жира, жирных кислот, холестерина, белка и аминокислот

.

Вашингтон (округ Колумбия)

:

National Academy Press

,

2002

.22.

Hoerr

RA

,

Matthews

DE

,

Bier

DM

,

Young

VR

VR.

Влияние ограничения белка и быстрого возобновления питания на кинетику лейцина и лизина у молодых мужчин

.

Am J Physiol Endocrinol Metab

.

1993

;

264

:

E567

–

E75

.23.

Вальзер

М

,

Боденлос

ЛЖ

.

Метаболизм мочевины у человека

.

Дж Клин Инвест

.

1959

;

38

:

1617

–

26

.24.

Forrester

T

,

Badaloo

AV

,

Persaud

C

,

Jackson

AA

.

Производство мочевины и спасение во время беременности у нормальных ямайских женщин

.

Am J Clin Nutr

.

1994

;

60

:

341

–

6

.25.

Джексон

АА

.

Спасение азота мочевины и потребности в белке

.

Proc Nutr Soc

.

1995

;

54

:

535

–

47

.26.

Torrallardona

D

,

Harris

CI

,

Coates

ME

,

Fuller

MF

MF.

Микробный синтез и использование аминокислот у крыс: включение ¹⁵ N из ¹⁵ NH ₄ Cl в лизин в тканях стерильных и обычных крыс

.

Бр Дж Нутр

.

1996

;

76

:

689

–

700

.27.

Metges

CC

,

El Khoury

AE

,

HENNAMEN

L

,

PETZKE

KJ

,

гранта

KJ

I

,

BEDRI

S

,

Pereira

PP

,

Аджами

AM

,

Фуллер

МФ

,

Янг

ВР

.

Наличие кишечного микробного лизина для гомеостаза лизина всего организма у людей

.

Am J Physiol Endocrinol Metab

.

1999

;

277

:

E597

–

607

.28.

Metges

CC

,

Petzke

KJ

,

El Khoury

AE

,

Henneman

L

,

гранта

I

,

BEDRI

S

,

REGAN

мм

,

Фуллер

МФ

,

Янг

ВР

.

Включение мочевины и аммиачного азота в микробные белки подвздошной кишки и фекалий и свободные аминокислоты плазмы у здоровых мужчин и илеостоматозов

.

Am J Clin Nutr

.

1999

;

70

:

1046

–

58

.29.

EL-KOURY

AE

,

AE

,

NK

,

NK

,

Sánchez

M

,

TSAY

RH

,

GLEASE

RH

RE

,

CHAPMAN

TE

,

YOUNG

VR

.

Валидация концепции баланса индикаторов в отношении лейцина: 24-часовые исследования внутривенных индикаторов с L-[1- ¹³ C]лейцином и [ ¹⁵ N- ¹⁵ N]мочевиной

.

Am J Clin Nutr

.

1994

;

59

:

1000

–

11

.30.

El-Khoury

AE

,

Basile

A

,

Beaumier

L

,

Wang

SY

,

AL-AMIRI

HA

,

SELVARAJ

A

,

WONG

S

,

Аткинсон

A

,

Аджами

AM

,

Янг

VR

.

Суточные исследования внутривенных и пероральных индикаторов L-[1- ¹³ C]-2-аминоадипиновой кислоты и L-[1- ¹³ C]лизина в качестве индикаторов при большом потреблении азота и лизина у здоровых взрослые

.

Am J Clin Nutr

.

1998

;

68

:

827

–

39

.

© Автор(ы), 2020. Опубликовано Oxford University Press от имени Американского общества питания.

Студенты с инвалидностью возвращаются в университетские городки и боятся, что их «оставят позади»

«Это влияет на мою учебу.Это влияет на мою способность хорошо учиться в классе», — сказал Чайкоф, чьи нарушения слуха и зрения вызваны синдромом Ашера. «В целом, это было очень неприятно».

История продолжается под рекламой

Многие учащиеся приветствовали возвращение к очному обучению, но это изменение возродило трудности до пандемии и создало новые для некоторых учащихся с ограниченными возможностями. Некоторые сетовали на сокращение онлайн-обучения, которое позволило им читать скрытые субтитры во время лекций в режиме реального времени, выключать свои камеры при необходимости и смотреть записанные лекции дома и в своем собственном темпе, среди его преимуществ.

Потеря этой гибкости, по словам Чайкофа и других, привела к физическому и психическому расстройству, а также к ощущению, что о них забыли.

«Я должен работать в 10 раз усерднее, чем мои одноклассники, чтобы добиться успеха, и все же меня не поддерживают», — сказал Чайкоф.

История продолжается под рекламой

Факультет социологии Американского университета, подчеркнула она, был полезен, но реакция университета разочаровала ее, сказала она. По ее словам, Чайкоф попросила личного расшифровщика для субтитров в реальном времени и неоднократно разговаривала с университетом, чтобы приобрести его для необходимого ей курса.Представитель Американского университета сказал, что школа может предоставить Чайкофу только услуги удаленного субтитров из-за нехватки личных расшифровщиков и растущего спроса на них.

По оценкам экспертов, каждый восьмой студент колледжа в США имеет хотя бы одну инвалидность, согласно Скотту Лисснеру, председателю комитета по государственной политике Ассоциации высшего образования и инвалидов. Некоторые из этих учеников, в том числе с ограниченными возможностями, связанными с дефицитом внимания, говорят, что онлайн-обучение им было труднее.Но в целом возвращение к очному обучению представляет собой серьезную проблему для студентов с ограниченными возможностями, а также для каждого колледжа по всей стране, сказала Фелиция Нурмсен, управляющий директор службы работодателей в Национальной организации по делам инвалидов.

Проблема усугубляется, по словам Нурмсена, в государственных школах с высоким процентом учащихся с ограниченными возможностями и ограниченными ресурсами. Нурмсен сказала, что большинство университетов, с которыми она работала, все еще выясняют, как расширить возможности онлайн-классов в качестве приспособления для людей с ограниченными возможностями.

История продолжается ниже рекламного объявления

«Единого подхода к этому нет, — сказала она. «В каждом колледже есть студенты с ограниченными возможностями. Нам всем нужно подумать о том, как поддержать наших учеников с невидимой и видимой инвалидностью».

Зэнди Вонг, студентка второго курса нейробиологии в Университете Джона Хопкинса в Балтиморе, у которой также есть нарушения слуха, также изо всех сил пытается не отставать от своих занятий.

Она запросила прозрачные лицевые маски для дискуссионной части своего класса математического анализа II в службе по работе с инвалидами своего университета, чтобы она могла читать по губам своего социально дистанцированного преподавателя и одноклассников.Но инструктор и класс перестали носить прозрачные маски через неделю, сказала Вонг, и она не хотела называть себя инвалидом на каждом собрании класса, чтобы напоминать всем об их ношении. В результате, по ее словам, ей было трудно усваивать материал курса.

История продолжается под объявлением

«Я беспокоюсь, что с переходом на очное обучение учащиеся-инвалиды, такие как я, снова останутся позади», — сказал Вонг. «Пандемия показала мне, что среды можно сделать полностью доступными в виртуальной или гибридной среде с небольшими затратами для школы.

Представитель Университета Джона Хопкинса сообщил, что университет предоставил больше онлайновых и гибридных предложений в программах, которые до пандемии были в основном очными, и что университет рассматривает возможность использования технологий, чтобы сделать занятия более инклюзивными и справедливыми.

Эксперты говорят, что многие университеты понимают то же самое и находят способы сделать обучение более справедливым, в том числе с помощью моделирования для лабораторий, видеоплатформ и гибридных инструментов обучения для асинхронного обучения.

История продолжается ниже рекламного объявления

«Технология была конкретизирована, и логистика теперь понятна», — сказал Лисснер. «И теперь есть гораздо больший круг людей, которые могли бы извлечь выгоду». Пандемия, добавил он, дала учащимся с ограниченными возможностями возможность настаивать на дальнейших изменениях в системе образования.

Но проблемы остаются. В Стэнфорде студент третьего курса математики и вычислительной техники Пуджит Хегде сказал, что онлайн-обучение принесло ему пользу, резко повышая уровень его физической и умственной энергии каждый день.У Хегде синдром хронической усталости, и в 2018 году ему поставили диагноз синдрома постуральной ортостатической тахикардии, или POTS; POTS ограничивает его подвижность и ухудшает его здоровье, когда температура его тела колеблется.

Пока он посещал занятия дистанционно, Хегде мог отказаться от прогулок по кампусу Стэнфорда, площадь которого составляет более 8 100 акров. Но с тех пор, как он вернулся к очным занятиям, по его словам, он снова стал беспокоиться о том, хватит ли сил дойти до занятий. Обычно он пользовался службой гольф-каров в кампусе, которая обеспечивает транспортировку между местами в кампусе для людей с ограниченными возможностями или определенными заболеваниями в университете.Но Хегде сказал, что в этом году ему было трудно получить доступ к этому объекту из-за возросшего спроса. Представитель Стэнфорда сказал, что университет увеличил штат транспортной службы в начале учебного года, потому что количество пассажиров увеличилось с четырех пассажиров в день в прошлом учебном году до 50 в день этой осенью.

Продолжение истории под рекламой

В сентябре один из учеников Хегде спонтанно решил встретиться на свежем воздухе ранним днем, когда было 80 градусов, а он не был к этому готов.По его словам, обычно он брал с собой охлаждающий жилет, переносной вентилятор и воду.

«Под конец я очень пожалел, что пошел на занятия. Это повлияло на остаток моего дня и на следующий день», — сказал Хегде. «Поскольку моя инвалидность незаметна, если я недостаточно буду защищать себя, люди не будут меня слушать».

Лиза Мамедов-Турчински, выпускница Калифорнийского университета в Беркли, которая закончила шесть лет для получения степени бакалавра, сказала, что в этом году ей пришлось отказаться от половины курсов, потому что она не хотела посещать какие-либо очные занятия.Мамедов-Турчинский, изучающий риторику и антропологию, страдает иммунодефицитом, синдромом хронической усталости, хроническим болевым синдромом, астмой и СДВГ.

Продолжение истории ниже объявления

Представитель Беркли сказал, что учащимся с ограниченными возможностями разрешено участвовать удаленно, если это не меняет принципиально характер вовлеченных курсов. Кроме того, если дистанционное обучение невозможно, университет будет работать со студентами, чтобы найти подходящее жилье.

Но отделение Мамедова-Турчинского небольшое и не предлагает много виртуальных курсов, сказала она, и ее запрос не может быть удовлетворен. В результате, отчасти для того, чтобы избежать угрозы, которую представляет новый коронавирус, ей придется потратить еще год или, возможно, два, чтобы получить высшее образование.

«Я не могу выбирать между жизнью и дипломом. Мне очень трудно находиться в таком положении», — сказала она. «Что было самым болезненным и душераздирающим в пандемии, так это то, что мир в мгновение ока смог реструктурировать себя, когда дело дошло до нетрудоспособных людей, нуждающихся в этих приспособлениях.А теперь стало еще труднее быть равным среди сверстников».

История продолжается под рекламой

Алекс Чанд, студентка пятого курса факультета физики и английского языка Университета Лоуренса, страдающая аутизмом, сказала, что ей нравится обучение в Zoom, потому что она чувствует, что может лучше понимать социальные сигналы: ей не нужно просить других присоединиться их группы, потому что профессор мог автоматизировать комнаты для обсуждения, она могла легко оставить свою руку поднятой в очереди, и в целом она меньше беспокоилась о посещении занятий.

Возвращение к очному обучению в кампусе в Эпплтоне, штат Висконсин, было напряженным, сказала Чанд, потому что ей пришлось приложить гораздо больше усилий, чтобы бороться за жилье. Этой осенью она обратилась к психиатру за лекарствами, которые помогут справиться с тревогой.

«Некоторое время после возвращения в кампус я боялся выходить из своей комнаты, — сказал Чанд. «Это был настоящий стресс для меня, потому что мне трудно расшифровать то, что говорится между строк».

Барбара Хонг, декан Университетского колледжа Техасского международного университета A&M и профессор специального образования, предположила, что трудностей, с которыми сталкиваются учащиеся, можно было бы избежать, если бы школы рассматривали возможность открытия школ поэтапно.

Хонг рекомендовал инструкторам и администраторам в этом учебном году пересмотреть методы преподавания и оценки знаний в классе.

«Пандемия потребовала от преподавателей быть более творческими и учиться использовать новые технологии, — сказал Хонг, — и ничего из этого не исчезнет».

Катаболит лизина сахаропин препятствует развитию, нарушая митохондриальный гомеостаз | Журнал клеточной биологии

Чтобы понять, как митохондрии были увеличены в гиподерме aass-1(yq170) , мы выполнили визуализацию живых клеток для мониторинга динамики митохондрий, меченных Mito-GFP.У животных N2 митохондрии подверглись динамическому слиянию и делению, что сохранило их преимущественно трубчатую морфологию (рис. 4, А и С; и видео 3). Интересно, что у личинок aass-1(yq170) (например, на стадии L4) мы наблюдали, что трубчатые митохондрии подвергались ретракции и в конечном итоге становились сферическими, и трубчатость этих сферических митохондрий не происходила (рис. 4 B и видео 4). У aass-1(yq170) взрослых животных наблюдались слияния между аномально увеличенными митохондриями, при этом за период наблюдения не наблюдалось деления (рис.4, Б и С; и видео 5). Чтобы понять, как митохондриальная динамика была затронута у aass-1 мутантов SDH, мы исследовали митохондриальное рекрутирование DRP-1, гомолога C. elegans DRP1 млекопитающих, необходимого для деления митохондрий (Labrousse et al., 1999). В WT меченный GFP DRP-1, который функционально восстанавливал сверхсвязанные митохондрии в делеционных мутантах drp-1(tm1108) до уровней WT (рис. 4E), часто локализовался в местах сужения митохондрий (рис. .4, F, H и I). Однако у мутантов aass-1(yq170) было обнаружено, что GFP::DRP-1 пристыковывается к сферическим митохондриям с гораздо большим диаметром, чем WT, и не наблюдалось митохондриальной перетяжки в местах стыковки (рис. 4, G). -Я). Кроме того, мы обнаружили, что ЭР, меченный GFP::TRAM-1, пересекает митохондрии в местах перетяжки у WT, но не у мутантов aass-1(yq170) (рис. 4J), что свидетельствует о том, что ЭР – митохондриальное взаимодействие, вероятно, было нарушено у мутантов.В целом, эти данные свидетельствуют о том, что накопление сахаропина у aass-1 мутантов SDH, вероятно, нарушает DRP-1- и ER-зависимую тубуляцию и деление митохондрий, в то время как непрерывное слияние способствует аномальному увеличению митохондрий. Подтверждая этот вывод, двойные мутанты aass-1(yq170) с fzo-1(tm1133) , делеционным аллелем fzo-1 /MFN1/2, который необходим для слияния митохондриальной внешней мембраны (Breckenridge et al. ., 2008; Ичишита и др., 2008), обнаруживали небольшие сферические митохондрии, подобные одиночным мутантам fzo-1(tm1133) (рис. 4D). Точно так же РНКи еат-3 /OPA1, необходимая для слияния внутренних митохондриальных мембран (Kanazawa et al., 2008), подавляла увеличение митохондрий у aass-1(yq170) животных (рис. 4D). .

питательных веществ | Бесплатный полнотекстовый | Влияние ожирения и потери веса на биорегуляцию врожденных/воспалительных реакций: макрофаги и иммунометаболизм

2.Ожирение, иммунометаболизм и макрофаги

Воспаление жировой ткани у мышей, получавших диету с высоким содержанием жиров, способствует системной резистентности к инсулину и непереносимости глюкозы [68]. При ожирении в жировой ткани накапливаются различные типы врожденных и адаптивных иммунных клеток с повышенной продукцией адипоцитарных хемокинов [69,70]. Таким образом, помимо лейкоцитов, в воспалительную среду могут вносить вклад несколько типов клеток, включая адипоциты и стромальные клетки [42,43]. Однако макрофаги являются наиболее распространенными клетками в жировой ткани при ожирении [71] и представляют собой основной источник провоспалительных цитокинов, вызывая тем самым системную резистентность к инсулину [43].Важно отметить, что врожденные иммунные клетки также выполняют важные функции в физиологии здоровых тканей. Действительно, иммунные клетки также присутствуют в здоровой жировой ткани, способствуя гомеостазу ткани и играя решающую роль в здоровом расширении и ремоделировании ткани во время увеличения веса [72,73]. Резидентные и инфильтрирующие макрофаги отвечают за различные типы функций, как в медицинских ситуациях, так и в ответ на повреждение и инфекцию. Макрофаги осуществляют фагоцитоз множества инфекционных микроорганизмов, фагоцитируют тканевые остатки, апоптотические паренхиматозные клетки и нейтрофилы, восстанавливают поврежденную ткань и действуют как мост между врожденным и адаптивным иммунитетом.В соответствии с этими разнообразными функциями макрофаги проявляют разные фенотипы [74]. В макрофагах аргинин является предшественником двух важных метаболических путей аминокислот: он либо метаболизируется индуцируемой синтазой оксида азота (iNOS) до оксида азота (NO) и цитруллина (классический путь), либо гидролизуется аргиназой до орнитина и мочевины (альтернативный путь). ). Существование этих двух метаболических путей имеет решающее значение для их фенотипа и функции и, следовательно, для типа и исхода иммунных реакций, в которые вовлечены эти клетки [75].Фенотип M1 относится к «классически активированным» макрофагам, которые появляются во время клеточно-опосредованных иммунных ответов и характеризуются провоспалительным фенотипом. Интерферон-γ (ИФН-γ) и липополисахарид (ЛПС) стимулируют макрофаги к приобретению микробицидных и провоспалительных свойств, которые характеризуют этот фенотип, и они являются первой линией защиты от внутриклеточных патогенов, стимулирующих поляризацию Th2 CD4+ лимфоцитов. Они характеризуются экспрессией CD11c и индуцибельной синтазы оксида азота (iNOS) и более распространены, чем макрофаги с противовоспалительным фенотипом М2 при ожирении.С другой стороны, M2 или альтернативно активированные макрофаги являются аналогами Th3-лимфоцитов и характеризуются экспрессией CD206 и аргиназы типа 1 (ARG1). Макрофаги М1 связаны с продукцией провоспалительных медиаторов (таких как ИЛ-1β, ИЛ-6, ФНО-α), высокой микробицидной активностью и клеточным иммунитетом, тогда как макрофаги М2 связаны с высвобождением противовоспалительных цитокинов, таких как как IL-10 (который способствует инсулиночувствительному фенотипу), восстановлению тканей, процессам ремоделирования и гуморальному иммунитету [18,76,77].Сообщается, что макрофаги потенциально могут переключаться с одного фенотипа или состояния на другое в зависимости от стимулов окружающей среды [78]. Преобладающее присутствие резидентных в тканях макрофагов с противовоспалительным фенотипом, т. е. поляризованных в отношении репарационных и поддерживающих функций, в нежировой жировой ткани предполагает физиологическую роль этих клеток в гомеостазе. Более того, это указывает на то, что при метаболическом стрессе и ожирении они перепрограммируются в провоспалительный фенотип, что приводит к функциональному ухудшению [30].Большинство макрофагов жировой ткани экспрессируют поверхностные маркеры CD11b и F4/80. При ожирении большинство рекрутируемых макрофагов жировой ткани также являются CD11c+ с повышенной экспрессией провоспалительных генов, то есть макрофагов с провоспалительным фенотипом [71,79]. У худощавых, физически активных и соблюдающих здоровую диету сохраняется «противовоспалительный фенотип жировой ткани» (небольшой размер адипоцитов и наличие макрофагов М2). С другой стороны, отсутствие физической активности и нездоровое питание провоцируют положительный энергетический баланс, что приводит к увеличению висцерального жира, что вызывает развитие «воспаленной жировой ткани», характеризующейся инфильтрацией макрофагов М1, что коррелирует с резистентностью к инсулину как у мышей, так и у людей. [80,81].Рекрутирование циркулирующих моноцитов, происходящих из костного мозга, а также пролиферация способствует накоплению и поддержанию CD11c+ макрофагов жировой ткани [82,83,84], и также было продемонстрировано, что Т-клеточно-зависимые сигналы жировой ткани способствуют накоплению CD11c+ макрофагов жировой ткани и воспалению. с ожирением [85]. Метаболические факторы, которые модулируют иммунный ответ при ожирении и агрегацию макрофагов и других иммунных клеток в жировой ткани, еще недостаточно известны [42,86,87].Cinti и коллеги предположили, что некротическая гибель адипоцитов, которая, по их гипотезе, обусловлена ​​гипертрофией и ускоряется при ожирении, является первичным стимулом, который регулирует накопление макрофагов жировой ткани [46]. Действительно, также было продемонстрировано, что массивный апоптоз адипоцитов приводит к быстрому накоплению макрофагов жировой ткани [88]. Таким образом, одной из инициирующих причин провоспалительной передачи сигналов адипоцитами является гипоксия в белой жировой ткани, которая возникает очень рано в начале ожирения [68,89].Свободные жирные кислоты увеличиваются при ожирении и участвуют в резистентности к инсулину и индукции воспалительных сигналов в жировой ткани, печени, мышцах и поджелудочной железе, где они служат лигандами для комплекса TLR4, активируют классическую воспалительную реакцию и стимулируют накопление жировой ткани. макрофаги [77]. При ожирении, вызванном диетой, накопление триглицеридов само по себе является относительно благоприятным процессом. Однако ферментативная и структурная способность адипоцитов накапливать жирные кислоты в конечном итоге уступает место постоянному избытку калорий [90].Более того, реакция жировой сосудистой сети и стромы на расширение жировой ткани часто недостаточна, что приводит к гипоксии и переполнению. Неспособность накапливать избыточные жирные кислоты вызывает увеличение концентрации свободных жирных кислот и липидов, синтезируемых из жирных кислот, до опасного уровня. Это событие нарушает целостность и функцию адипоцитов и может вызывать апоптоз и некроз [91,92]. В этом контексте инициирующий механизм гипоксии включает разобщение окислительного метаболизма митохондрий в результате повышения уровня свободных жирных кислот [89].Это приводит к повышенному потреблению кислорода адипоцитами, создавая относительную гипоксию адипоцитов [89,93]. Увеличение массы жировой ткани и объема адипоцитов имеет другие метаболические последствия, отражающиеся в снижении митохондриальной функции, повышенном стрессе эндоплазматического ретикулума, нарушении передачи сигналов инсулина и более высокой скорости базального липолиза [94,95,96]. Предполагается, что функцией макрофагов жировой ткани в состоянии ожирения является фагоцитоз избытка липидов, поскольку при увеличении ожирения они образуют многоядерные синцитии, содержащие крупные липидные капли [46,97].Эта тесная связь между размером адипоцитов, накоплением макрофагов и поглощением липидов предполагает, что избыток липидов может иметь решающее значение для накопления макрофагов жировой ткани. В этом контексте была выдвинута гипотеза, что иммунная система и макрофаги реагируют непосредственно на изменения метаболической функции, и, в частности, что вызванное ожирением усиление базального липолиза [94] может повышать локальные концентрации внеклеточных липидов и стимулировать накопление макрофагов жировой ткани. Если усиление липолиза приводит к накоплению макрофагов жировой ткани, то изменение липолиза должно модулировать накопление макрофагов жировой ткани таким же образом.Эти данные свидетельствуют о том, что макрофаги жировой ткани могут играть роль в сдерживании внеклеточного повышения концентрации свободных жирных кислот в периоды высокого липолиза и, таким образом, могут защищать локальную функцию адипоцитов. У худощавых людей адипоциты накапливают мало липидов, базальный липолиз ограничен, а макрофаги жировой ткани немногочисленны. При ожирении избыточное накопление липидов крупными адипоцитами увеличивает базальный липолиз и, следовательно, также вызывает явное высвобождение свободных жирных кислот. Макрофаги рекрутируются в жировую ткань, быстро накапливаясь, и хроническая стимуляция этих клеток способствует локальному воспалению и изменению метаболической функции [24].Повышенное высвобождение TNF-α (вместе с MCP-1 и IL-8) привлекает больше макрофагов и Т-лимфоцитов, что еще больше вызывает ситуацию гипоксии, которая усиливает местное воспаление и фиброз в жировой ткани [98]. После рекрутирования макрофаги жировой ткани фагоцитируют избыток липидов, возможно уменьшая стресс адипоцитов. Во время потери веса увеличение потребности в липолизе повышает локальные концентрации свободных жирных кислот и, таким образом, рекрутирование макрофагов жировой ткани. Однако постепенно, по мере уменьшения запасов триглицеридов и снижения базального липолиза, содержание макрофагов в жировой ткани снижается [24].Кроме того, одним из наиболее известных метаболических изменений при воспалительной активации макрофагов является активация анаэробного гликолиза [59], обеспечивающая преимущество в выживании в гипоксической среде, такой как жировая ткань у людей с ожирением [99]; вместе с накоплением промежуточных продуктов цикла Кребса, важных для продукции воспалительных цитокинов [100]. При поляризации макрофагов окисление жирных кислот играет ключевую роль в регуляции транскрипции. Поляризация макрофагов M1 зависит от гликолитической активности, тогда как дифференцировка в макрофаги M2 (активируемая IL-4) требует окисления жирных кислот [101].Тем не менее, нужно быть осторожным при определении гликолиза как провоспалительного, а окисление жирных кислот как противовоспалительного. Это может быть чрезмерным упрощением из-за участия обоих метаболических путей в провоспалительной и противовоспалительной активности [102]. В этом контексте важно отметить, что, как упоминалось выше, макрофаги могут способствовать регуляции энергетического баланса. и резистентность к инсулину в ответ на изменения в пищевой среде, поскольку их рецептор TLR4 может распознавать жирные кислоты и приводить к высвобождению провоспалительных цитокинов этими клетками [60].Более поздние исследования тщательно изучили активацию и функциональное влияние макрофагов жировой ткани. Например, Kratz и коллеги [103] продемонстрировали, что некоторые классические макрофагальные маркеры воспаления не индуцируются в ответ на метаболические стимулы, что позволяет предположить, что альтернативные пути активации, включая передачу сигналов PPARγ, управляемую жирными кислотами, могут лежать в основе метавоспалительных фенотипов; Шан и др. [104] показали, что хронический стресс эндоплазматического ретикулума при ожирении может приводить к воспалительной поляризации в макрофагах жировой ткани.TNF-α также вовлечен в липолиз и резистентность к инсулину в воспаленной жировой ткани. Большая часть TNF-α в воспаленной жировой ткани вырабатывается в адипоцитах (где находится большая часть его мРНК), поэтому, по-видимому, существует прямая связь между количеством жира и высвобождением этого воспалительного цитокина. TNFα, высвобождаемый в ткани, распознается его рецепторами TNF-R1 для стимуляции липолиза и апоптотических процессов и TNF-R2, участвующего в резистентности к инсулину посредством ингибирования передачи сигналов инсулина [105,106,107].Другим цитокином, который вносит большой вклад в слабовыраженное воспаление при ожирении, является ИЛ-6. Хотя 30 % общего производства IL-6, частично стимулируемого TNF-α, по-видимому, поступает из жировой ткани, адипоциты вносят только до 10 % вклада, поскольку остальная часть вырабатывается макрофагами, инфильтрирующими жировую ткань [105, 108], со сдвигом в сторону их увеличения. Воспалительный фенотип M1 по мере увеличения жировых отложений, продуцирующих больше TNF-α, IL-6 и IL-1β и способствуя резистентности к инсулину [109]. Локализованный висцеральный жир в большей степени способствует хроническому слабовыраженному воспалению, чем общее накопление жира в организме, поскольку увеличение количества висцерального жира, особенно в области живота и печени, предполагает большую инфильтрацию макрофагов и уровни воспалительных цитокинов и уменьшение висцерального жира уменьшает маркеры воспаления и может привести к потере веса [108].Помимо макрофагов жировой ткани, некоторые исследования были сосредоточены на неинфильтрированных перитонеальных макрофагах. Исследования нашей группы показали, что у тучных крыс Zucker перитонеальные макрофаги обнаруживают локальное нарушение регуляции конститутивного или спонтанного высвобождения провоспалительных цитокинов, таких как IL-1β, INF-γ, IL-6 и TNF-α, что способствует вялотекущий системный провоспалительный статус при ожирении. Высвобождение этих провоспалительных цитокинов также нарушается в ответ на антигенный (ЛПС) стимул, что потенциально повышает восприимчивость к инфекции [11, 110].Перитонеальные макрофаги мышей с ожирением демонстрируют различные воспалительные реакции на адренергическую стимуляцию с более выраженным противовоспалительным эффектом, чем у мышей с худощавым телом [111]. Более того, моноциты, которые являются предшественниками макрофагов, также проявляют дифференциальный воспалительный ответ на адренергическую стимуляцию при ожирении по сравнению с худыми людьми с противовоспалительным эффектом, который проявляется особенно у тучных людей [20, 111]. Мыши с ожирением также демонстрируют более низкий врожденный ответ, опосредованный моноцитами [10].

3. Потеря веса, воспаление и макрофаги

Принимая во внимание все вышеизложенное, кажется ясным, что данные убедительно подтверждают актуальность иммунометаболизма для здоровья и болезней, с потенциальной клинической ценностью и многообещающими новыми областями и механизмами вмешательства, которые разрабатываются, особенно в области ожирения и его метаболических осложнений, таких как диабет 2 типа.

Снижение массы тела является основной целью и основной рекомендацией по лечению ожирения и сопутствующих ожирению заболеваний.Для снижения веса учитываются различные стратегии вмешательства, такие как препараты против ожирения, бариатрическая хирургия и изменение образа жизни [112]. Среди них снижение потребления калорий (диетические вмешательства, такие как ограничение калорий или отказ от диеты с высоким содержанием жиров) и выполнение программы физических упражнений, безусловно, являются наиболее распространенными методами, способствующими снижению веса. В настоящем обзоре мы сосредоточились на диетических вмешательствах, поскольку они являются первым изменением образа жизни, к которому обращаются пациенты, и они представляют собой фундаментальные немедикаментозные и нехирургические стратегии в этом состоянии, оказывающие большое влияние на параметры здоровья и даже могут вмешиваться и определить результаты других сопутствующих стратегий, таких как упражнения.Эти вмешательства могут помочь улучшить метаболическую дисфункцию и уменьшить маркеры воспаления в жировой ткани [113,114]. Снижение риска заболевания в ответ на потерю веса может быть результатом улучшения воспалительного профиля, который включает снижение провоспалительных медиаторов и увеличение противовоспалительных [115]. Было показано, что потеря веса улучшает воспаление с точки зрения нескольких воспалительных маркеров, связанных с ожирением, в частности, снижения провоспалительных биомаркеров (CRP, TNF-α, IL-6 и лептина) и увеличения противовоспалительного биомаркера адипонектина [116]. ].Однако в этом контексте все еще необходимо прояснить клинические последствия изменений, вызванных ожирением, связанных с иммунитетом и некоторыми из этих вмешательств [5]. Широко описаны положительные метаболические эффекты потери веса, такие как обратимость профиля атерогенных липопротеинов за счет снижения триглицеридов, улучшения отношения инсулина к глюкозе и повышения уровня холестерина ЛПВП [117, 118, 119]. Умеренная потеря веса улучшает чувствительность к инсулину и многие из частых медицинских осложнений, связанных с ожирением, таких как диабет 2 типа [120,121].Хотя снижение веса на 10-20% может привести к значительному улучшению обмена веществ с повышением уровня глюкозы и инсулина [122], влияние на хроническое воспалительное состояние ожирения изучено менее тщательно. Эта практика с помощью образа жизни или хирургических вмешательств может уменьшить количество макрофагов жировой ткани, уменьшить воспаление и улучшить чувствительность к инсулину [24, 123]. Более того, в настоящее время считается, что потеря веса связана со снижением концентрации продуктов воспаления в кровотоке [124, 125, 126].Как упоминалось ранее, присутствие макрофагов может способствовать повышенной экспрессии воспалительных генов у лиц с ожирением. Таким образом, немедикаментозные и фармакологические манипуляции, снижающие содержание макрофагов жировой ткани или модифицирующие их воспалительное состояние у тучных животных, модулируют местное воспаление и связаны со снижением резистентности к инсулину [24]. Было описано, что ограничение калорий у мышей, получавших диету с высоким содержанием жиров, приводило к начальному увеличению рекрутирования макрофагов жировой ткани, в то время как было показано, что содержание макрофагов жировой ткани снижается после длительного периода потери веса.Пик числа макрофагов жировой ткани совпал с пиком циркулирующих концентраций свободных жирных кислот и липолиза жировой ткани, что свидетельствует о том, что липолиз стимулирует накопление макрофагов жировой ткани [24]. Конечно, липолиз, вызванный голоданием или фармакологическими подходами, быстро увеличивал накопление макрофагов жировой ткани, активность хемоаттрактантов и поглощение липидов макрофагами жировой ткани. И наоборот, диетические и генетические манипуляции, снижающие липолиз, уменьшали накопление макрофагов в жировой ткани.Истощение макрофагов в культурах жировой ткани увеличивает экспрессию жировой триглицеридной липазы и генов, регулируемых свободными жирными кислотами, и усиливает липолиз. Эти данные свидетельствуют о том, что локальные потоки липидов являются центральными регуляторами рекрутирования макрофагов жировой ткани и что после рекрутирования макрофаги жировой ткани образуют загруженные липидами макрофаги, которые могут буферировать локальное увеличение концентрации липидов, согласно Kosteli et al. [24]. В заключение, экспрессия генов макрофагов и жировых клеток в жировой ткани может по-разному регулироваться во время ограничения калорий и поддержания веса в рамках программы по снижению веса; таким образом, было высказано предположение, что потеря веса, вызванная диетой, связана со снижением системного воспаления и специфической метаболической адаптацией, что снова указывает на взаимодействие между питанием, иммунной системой и метаболизмом [127,128].Таким образом, существует много доказательств того, что потеря веса влияет на воспалительный профиль у лиц с ожирением и у лиц, ранее страдавших ожирением; однако большинство результатов являются спорными и противоречивыми, что может быть связано с различными методологическими подходами и проанализированными диетическими вмешательствами. Было показано, что потеря веса резко уменьшает воспаление в печени, скелетных мышцах и сердце, но не в жировой ткани. Применение диеты с низким содержанием жиров, способствующее снижению веса, снижает уровень липидов и избирательно улучшает чувствительность к инсулину в печени, а также повышает метаболизм глюкозы в сердце [129].Шмитц и его коллеги продемонстрировали, что потеря веса устраняла экспрессию провоспалительных генов исключительно в печени, тогда как висцеральная жировая ткань не демонстрировала значительного улучшения метаболических и воспалительных маркеров по сравнению с мышами с ожирением [130]. В исследовании, проведенном на женщинах с ожирением, потеря веса уменьшала воспаление слизистой оболочки толстой кишки за счет уменьшения воспалительных цитокинов и клеток, а также за счет подавления воспалительных и раковых генных путей [131]. В другом исследовании на группе женщин с ожирением изучался эффект 6-месячного диетического вмешательства, состоящего из двух периодов: 4 недели очень низкокалорийной диеты с последующей стабилизацией веса (2 месяца низкокалорийной диеты и 3–4 месяца низкокалорийной диеты). диета для поддержания веса).После кратковременного строгого ограничения калорийности содержание макрофагов жировой ткани не изменилось; однако в период стабилизации веса он значительно уменьшился. Это уменьшение макрофагов жировой ткани не сопровождалось изменением фенотипа макрофагов [132]. Также было продемонстрировано, что слабовыраженное системное воспаление у мужчин после ожирения (лица, которые больше не страдают ожирением) с долгосрочной устойчивой потерей веса было похоже на контрольную группу без ожирения, несмотря на более высокое содержание макрофагов CD68+ в подкожной жировой ткани [133]. .В другом исследовании мышей разделили на три диетические группы: диета с высоким содержанием жиров, диета с низким содержанием жиров и ограничение до 70% диеты с высоким содержанием жиров. Обе группы, получавшие диету с низким содержанием жиров и 70% рациона с высоким содержанием жиров, показали положительный эффект с точки зрения физиологических и метаболических параметров. Инфильтрация макрофагов в белой жировой ткани была снижена в результате обоих вмешательств, что еще более заметно при ограничении до 70% диеты с высоким содержанием жиров. Активация митохондриального углеводного и жирового обмена повышалась у мышей при ограничении до 70% рациона с высоким содержанием жиров.Таким образом, представляется, что 30%-ное ограничение высокожировой диеты вызывало более выраженные эффекты, чем переход на низкожировую диету, в частности, в отношении воспаления жировой ткани и экспрессии митохондриальных генов углеводного обмена [134]. Тем не менее, как мы уже упоминали, некоторые из этих результатов кажутся спорными, так как есть некоторые исследования, доказывающие, что потеря веса связана с постоянной экспрессией воспалительных цитокинов, таких как интерлейкин IL-6, IL-1β и TNF-α, в жировой ткани. ткани [129,135], что означает, что воспаление жировой ткани и чувствительность к инсулину не полностью исчезают после потери веса [114].Блащак и его коллеги наблюдали, что мыши, потреблявшие в течение 3 месяцев диету с высоким содержанием жиров, а затем 3 месяца на диете из обычного чау-чау, оставались более резистентными к инсулину и не переносили глюкозу, чем животные, которых кормили чау-чау, а также что адипоциты, регуляторные Т-клетки жировой ткани, CD8+ Т-клетки, врожденные лимфоидные клетки типа 2 и М1-подобные макрофаги не нормализовались после потери веса [136]. В исследовании, проведенном Замарроном и его коллегами, были исследованы лейкоциты жировой ткани у мышей после отмены диеты с высоким содержанием жиров.После 8 недель потери веса за счет отказа от диеты с высоким содержанием жиров вес и толерантность к глюкозе у мышей были такими же, как и у худощавых мышей того же возраста, но у них наблюдалась аномальная толерантность к инсулину. Кроме того, макрофаги жировой ткани (CD45+, CD64+) снижались в процессе снижения веса, но оставались значительно выше по сравнению с мышами, получавшими обычный рацион, несмотря на одинаковый вес жировой ткани. Таким образом, общее и провоспалительное содержание CD11c+ макрофагов жировой ткани оставалось повышенным у мышей группы похудения.Это содержание макрофагов жировой ткани у ранее страдающих ожирением мышей показало провоспалительный профиль, включая повышенную экспрессию интерферона-γ, TNF-α и интерлейкина-1β. Авторы пришли к выводу, что у ранее страдающих ожирением мышей наблюдаются долгосрочные изменения в составе макрофагов жировой ткани, поэтому потеря веса не устраняет полностью индуцированную ожирением активацию макрофагов жировой ткани, которая может способствовать стойкому повреждению жировой ткани и снижению чувствительности к инсулину, присутствующим у ранее страдающих ожирением мышей. [114].Дифференциальные результаты можно объяснить несколькими факторами, поскольку эффекты могут быть пропорциональны степени потери веса, поскольку потеря веса около 15%, а не 5%, продемонстрировала результат уменьшения воспаления жировой ткани. Кроме того, было показано, что увеличение и сохранение воспаления печени и жировой ткани зависят от пола, поскольку у самцов мышей наблюдалось стойкое воспаление даже после потери веса, несмотря на улучшение метаболизма [137]. Поэтому, принимая во внимание разногласия и разнородные результаты исследований, изучающих использование низкокалорийных диет или ограничение диет с высоким содержанием жиров для достижения снижения веса, важно рассмотреть другие диеты, стратегии питания или использование функциональные продукты.Например, было предложено использовать кетогенные диеты для контроля воспаления. Кетогенная диета, диета с высоким содержанием жиров и низким содержанием углеводов (таким образом, использование метаболизма жиров и липидов в качестве основного источника энергии), продемонстрировала, что она приводит к значительной потере веса, а также связана с уменьшением системного воспаления, снижением резистентности к инсулину. и уровень глюкозы в крови натощак, а также улучшение профиля липидов и окислительного стресса [138,139]. Однако другие исследования показывают противоречивые результаты, указывающие на повышение уровня холестерина и маркеров воспаления, снижение уровня триглицеридов и снижение инсулинопосредованного антилиполиза [140].Опять же, мы находим разные результаты и ограниченное количество исследований, которые вместе с долгосрочными тяжелыми побочными эффектами, обнаруженными после этого вмешательства [139], ясно показывают, что необходимы дальнейшие исследования в этой области, прежде чем предлагать его применение в качестве противовоспалительной стратегии. при ожирении.

SEC.gov | Порог частоты запросов превысил

Чтобы обеспечить равный доступ для всех пользователей, SEC оставляет за собой право ограничивать запросы, исходящие от необъявленных автоматических инструментов. Ваш запрос был идентифицирован как часть сети автоматизированных инструментов, выходящих за рамки приемлемой политики, и будет управляться до тех пор, пока не будут предприняты действия по объявлению вашего трафика.

Пожалуйста, заявите о своем трафике, обновив свой пользовательский агент, включив в него информацию о компании.

Чтобы ознакомиться с рекомендациями по эффективной загрузке информации с SEC.gov, включая последние документы EDGAR, посетите сайт sec.gov/developer. Вы также можете подписаться на получение по электронной почте обновлений программы открытых данных SEC, включая передовые методы, которые делают загрузку данных более эффективной, и улучшения SEC.gov, которые могут повлиять на процессы загрузки по сценарию. Для получения дополнительной информации обращайтесь по адресу opendata@sec.правительство

Для получения дополнительной информации см. Политику конфиденциальности и безопасности веб-сайта SEC. Благодарим вас за интерес, проявленный к Комиссии по ценным бумагам и биржам США.

Идентификатор ссылки: 0.7ecef50.1645265222.5cff821

Дополнительная информация

Политика безопасности Интернета

Используя этот сайт, вы соглашаетесь на мониторинг и аудит безопасности. В целях безопасности и для обеспечения того, чтобы общедоступные услуги оставались доступными для пользователей, эта правительственная компьютерная система использует программы для мониторинга сетевого трафика для выявления несанкционированных попыток загрузить или изменить информацию или иным образом нанести ущерб, включая попытки отказать в обслуживании пользователям.

Несанкционированные попытки загрузки информации и/или изменения информации в любой части этого сайта строго запрещены и подлежат судебному преследованию в соответствии с Законом о компьютерном мошенничестве и злоупотреблениях от 1986 г. и Законом о защите национальной информационной инфраструктуры от 1996 г. (см. Раздел 18 USC §§ 1001 и 1030).

Чтобы обеспечить хорошую работу нашего веб-сайта для всех пользователей, SEC отслеживает частоту запросов на контент SEC.gov, чтобы гарантировать, что автоматический поиск не повлияет на возможность других получить доступ к SEC.содержание правительства. Мы оставляем за собой право блокировать IP-адреса, отправляющие чрезмерные запросы. Текущие правила ограничивают количество пользователей до 10 запросов в секунду, независимо от количества компьютеров, используемых для отправки запросов.

Если пользователь или приложение отправляет более 10 запросов в секунду, дальнейшие запросы с IP-адреса(ов) могут быть ограничены на короткий период. Как только количество запросов упадет ниже порогового значения на 10 минут, пользователь может возобновить доступ к контенту в SEC.правительство Эта практика SEC предназначена для ограничения чрезмерных автоматических поисков на SEC.gov и не предназначена и не ожидается, что она повлияет на отдельных лиц, просматривающих веб-сайт SEC.gov.

Обратите внимание, что эта политика может измениться, поскольку SEC управляет SEC.gov, чтобы обеспечить эффективную работу веб-сайта и его доступность для всех пользователей.

Примечание: Мы не предлагаем техническую поддержку для разработки или отладки процессов загрузки по сценарию.

.

No related posts.