Станозолол или туринабол: Что лучше Туринабол или Станозолол, эффективнее и сильнее

Содержание

Что лучше Туринабол или Станозолол, эффективнее и сильнее

Практически каждый спортсмен, который определенно решил набрать качественную мышечную массу и получить сохранение на долгое время сталкивается с выбором подходящего стероида. У многих выбор падает на Туринабол и Станозолол, что лучше купить на курс, а в дополнение, если он еще и первый. На это вопрос есть несколько советов, которые подкреплены практикой и для вас они будут полезны.

  

Если вас интересует сам полноценный оральный курс Станозоло + Туринабол, он представлен здесь.  Как правило, между выбором оказываются атлеты, которые принимали не дорогие препараты, но качество мускулатуры их не устроило. Потому многие начинают рассматривать Туринабол и Станозолол, но правильный выбор сделать очень не просто, ведь и тот и другой препарат может подсушивать и дает качество, а цена существенно отличается. Именно в данной ситуации можно рекомендовать однозначно покупать Туринабол. Конечно, он будет стоить в два раза дороже, но если вы уже принимали сильные анаболики такие, как Метан, Данабол, Сустанон и похожие, тогда Станозолол можно вообще не ощутить. Не пытайтесь экономить деньги в таком случае, ведь вы просто можете выкинуть их на ветер. Однозначно Туринабол сильнее, за Станозолол и по приливу силы, по выносливости и самое главное, по приросту мышечной массы. Вот потому он и стоит в два раза дороже по причине того, что ровно в два раза сильнее. Так же можно увеличить суточную дозировку, что не приведет к побочкам, но результат однозначно увеличится. Так поступают многие опытные атлеты и эффект от курса того стоит. Средняя суточная дозировка Туринабола 50 мг, это 5 таб.

Туринабол или Станозолол для новичков

Практически похожая ситуация слаживается у многих новичков, которые не знают, что лучше Туринабол или Станозолол. Если вы никогда не принимали стероиды и решили выбрать себе на первый курс безопасный препарат, тогда рассматривайте Станозолол. Смысл в том, что этот препарат более мягче воздействует на организм и при соблюдении дозировки до 50 мг. в сутки, побочки действительно никогда не проявляются. Однозначно можно сказать, что прилив силы и выносливости хорошо ощутим, а после 10 дней приема курса, уже можно визуально наблюдать плавное увеличение мускулатуры. Мышцы растут постепенно и не создают вид анаболического воздействия, все выглядит максимально естественно, но прогресс присутствует постоянно. Так же стоит отметить, что Станозолол лучше сушит, чем Туринабол, потому тело приобретает красивые и спортивные формы. После данного стероида нет смысла принимать после курсовые препараты, ведь негативное воздействие при таком приеме если и есть, то оно самое минимальное.


Но даже новички часто отдают предпочтение Туринаболу а не Станозололу. Это связано только с целью получения результата, ведь курс Туринабола действительно дает хороший прирост качественной мускулатуры. Потому если вы планируете получить максимальный результат от препарата, тогда покупайте Туринабол, ведь он на порядок сильнее и результативнее, а Станозолол больше подойдет для мягкого и менее опасного курса. Но мышечный рост будет не существенным.

Если у вас есть вопросы, или вам нужна дополнительная консультация, тогда обращайтесь к администратору. Он поможет подобрать подходящий препарат и подскажет, как его принимать. Обращайтесь в любое время.

Как правильно провести курс — туринабол и станозолол ~ Yetsbody.ru

 

Фото: Туринабол и станозолол

Курс туринабол и станозолол прекрасно подходит для спортсменов с любым уровнем подготовки – новичок не сталкивается с необходимостью вводить инъекционные анаболические препараты, а профессиональный спортсмен сможет качественно нарастить собственные физические показатели. Многие атлеты задаются вопросом, что лучше станозолол или туринабол, но стоит учитывать, что данные средства имеют немного отличающийся друг от друга принцип действия:

Туринабол – это анаболический оральный стероидный препарат. Его принцип действия довольно схож с метандиеноном, но туринабол менее токсичен. Стероид используется преимущественно для наращивания сухой мышечной массы, поскольку он практически не задерживает воду в организме, поэтому после курса откат отсутствует. Также препарат провоцирует значительное прибавление в силовых показателях.

Станозолол имеет немного иной принцип действия. Он используется преимущественно на курсах сушки уже набранной мускулатуры. От его использования масса становится тверже, мышцы приобретают выраженный рельеф, значительно уменьшается количество жировых отложений. Схожесть препаратов заключается в том, что они оба увеличивают силовые показатели, поэтому станозолол значительно увеличивает силовые возможности.

Многие спортсмены, чтобы не выбирать туринабол или станозолол, решают использовать комбинированный курс, что является оптимальным вариантом, поскольку данный курс отлично подходит даже в качестве первого цикла приема. В ходе применения препаратов наблюдается значительный прирост сухой мускулатуры – порядка 5-6 кг, при этом на курсе полностью исключается накопление жировых отложений и задержка жидкости в мышечных тканях.

Курс туринабол и станозолол не проявляет признаки ароматизации, поэтому во время приема стероидов спортсмен не сталкивается с гинекомастией и прочими побочными реакциями. Препараты в незначительной мере влияют на работу дуги гипоталамус-гипофиз-яички, поэтому естественный тестостерон практически не угнетается, а послекурсовая терапия проводится в профилактических целях.

Какие положительные эффекты проявляются на курсе стероидов

 

Фото: Туринабол и станозолол

Не стоит выбирать, что лучше станозолол или туринабол, поскольку оба препарата угнетают активность гликопротеина SHGB, из-за чего в организме атлета освобождается все большее количество свободного тестостерона. Также стоит отметить, что станолозол обладает антиэстрогеновым воздействием. Курс туринабол и станозолол подходит преимущественно для тех спортсменов, кто впервые знакомиться с вспомогательной спортивной фармакологией.

Он оптимально подходит в качестве первого курса и является максимально безопасным. По итогам курса можно ожидать возникновения следующих положительных реакций:

  • ускоренное уменьшение количества подкожных жировых накоплений;
  • прирост энергетического потенциала у спортсмена, что позволяет проводить более результативный тренинг в зале;
  • увеличение силовых возможностей;
  • набор качественной, просушенной мускулатуры;
  • придание мышцам выраженной рельефности, твердости, прорисовки каждой мышцы;
  • стимуляция метаболических процессов;
  • ускорение восстановительных процессов после интенсивных нагрузок в зале.

Как указывают, оставленные на станозолол и туринабол курс отзывы от новичков в спортивных дисциплинах, так и от профессиональных спортсменов, комбинированное использование двух оральных стероидов приносит исключительно положительный результат, поскольку такое сочетание препаратов является наиболее безопасным для здоровья атлетов. Спортсмены подчеркивают эффективность препаратов, выраженную в стабильном наборе сухой мускулатуры с выраженной прорисовкой рельефности.

Как правильно использовать стероиды на курсе для достижения максимального результата

Все стероидные препараты, присутствующие на курсе, используются перорально. Необходимость делать инъекции полностью исключается, что является еще одним плюсом курса для использования новичками. Суммарная продолжительность курса составляет 9 недель – 5 недель приема стероидов, неделя перерыва и 3 недели послекурсовой терапии. Увеличивать дозировки препаратов необходимо постепенно, за счет этого любой организм подготовится к увеличению дозы и отлично приспособится к действию препаратов на курсе.
Таблетки анаболических препаратов необходимо запивать водой или подкладывать под язык и держать до полного рассасывания для обеспечения более быстрого и эффективного воздействия. Специалисты рекомендуют принимать стероиды в различное время дня, чтобы между приемами разных препаратов было не менее 5 часов перерыва, при этом туринабол предпочтительней принимать в первой половине дня, а станозолол в вечернее время.

Таблетки лучше принимать до или после еды. Курс приема стероидов выглядит следующим образом:

  • на первой неделе курса принимается по 2 таблетки туринабола ежедневно и по 2 таблетки станозолола каждый день;
  • на второй неделе используется 3 таблетки туринабола и столько же станозолола ежедневно, также происходит на третей, четвертой и пятой неделе курса – по три таблетки каждого препарата ежедневно.

В качестве основного средства на послекурсовой терапии используется кломид. Послекурсовая терапия проводится спустя неделю после прохождения курса. Антиэстроген используется на протяжении первых 7 дней пкт в дозировке по 100 мг ежедневно, далее принимается по 50 мг ежедневно, завершается послекурсовая терапия приемом кломида в дозировке по 25 мг ежедневно на протяжении 7 дней.

Какие могут быть побочные эффекты от приема стероидов

 

Фото: Туринабол и станозолол

Не стоит забывать, что неправильное использование стероидов – несоблюдение указанных дозировок, превышение продолжительности курса, может спровоцировать проявление следующих побочных реакций:

  • туринабол может спровоцировать угнетение производства собственного тестостерона, из-за чего возникает эректильная дисфункция, преждевременная эякуляция, падение либидо;
  • станозолол выводит лишнюю жидкость из организма, что провоцирует повышенную травматичность – болевые ощущения в суставах, воспалительные процессы в связках, надрывы;
  • также на курсе может возникнуть облысение на голове, высокое артериальное давление, угревая сыпь, рост концентрации тестостерона в организме.

В принципе, данные побочные эффекты возникают в довольно редких случаях при существенном превышении рекомендуемых дозировок совместно с продолжительностью приема. Если придерживаться правил приема, то комбинированный курс принесет исключительно положительный результат в виде красивого тела со значительными объемами мускулатуры и выраженной прорисовкой мышц.

Безопасные стероиды готовы показать вам короткий путь к мускулистому телу

Большинство профессиональных спортсменов активно использует стероиды для увеличения мышечной массы и придания телу красивого рельефа. Конечно, никто не застрахован от ошибок, и иногда новички отдают предпочтение дешевым аналогам, тем самым рискуя получить не только неутешительный результат, но и проблемы со здоровьем. При этом, стероиды низкого качества работают за счет задержки жидкости в организме, а по окончанию курса, мышцы спортсмена просто «сдуваются». Однако, среди широкого выбора стероидных средств есть те, которые действительно пользуются популярностью у атлетов и бодибилдеров, гарантируя им качественный и долговременный результат. Так, когда физических нагрузок и правильного питания недостаточно для достижения поставленной цели, в игру вступает Туринабол. 

К сожалению, сегодня, учитывая современные законы и недобросовестность некоторых магазинов, купить хорошие стероиды проблематично. Поэтому, чтобы использовать для достижения своих желаний качественный препарат, таблетки Туринабол можно купить на этом сайте: https://mutagen.com.ua/tabletirovannye/turinabol.

Выпускается данный препарат в виде таблеток. Его отличает от аналогов отсутствие задержки жидкости в организме и накопление жировой массы во время приема. То есть, результат от приема курса Туринабола более чем отличный, учитывая, что за счет его тело становиться рельефным, упругим и сохраняет свой внешний вид и после приема. Самое приятное, что у Туринабола нет побочных эффектов, и соблюдая заявленную производителем дозировку курс пройдет без каких-либо негативных последствий. Способ приема достаточно простой для всех спортсменов, понимающих правила, вне зависимости от опыта тренировок. Если отталкиваться от классической схемы приема Туринабола, то дозировку необходимо постепенно увеличивать. Начиная с двух таблеток в день, до седьмого дня приема можно прийти к пяти таблеткам в сутки, и это будет оптимальной дозой. 

Станозолол – это тоже работает

Также вас может заинтересовать станозолол. Его приобрести можно по этой ссылке: https://mutagen. com.ua/tabletirovannye/stanozolol/strombafort-strombafort. Как и Туринабол, он хорошо зарекомендовал себя на рынке стероидов и пользуется спросом среди спортсменов. Препарат отличается от всех существующих инъекционных стероидов тем, что создан на основе масляных растворов эфиров, то бишь инъекционный станозолол – водная суспензия. Как и во всех случаях, естественно, никаких резких дозировок проводить не нужно, и следует увеличивать количество инъекций постепенно и размеренно. Отзывы о нем достаточно положительные. Как отмечают спортсмены, курс из вышеупомянутых препаратов сам по себе эффективен, но для более качественного результата стоит принимать и активные жиросжигатели. В таком случае, результатами остаются довольны не только новички, но и профессиональные спортсмены, которые явно видят результаты всего курса.

Карта сайта

Согласие на обработку персональных данных

Согласие на обработку персональных данных Настоящим в соответствии с Федеральным законом № 152-ФЗ «О персональных данных» от 27.07.2006 года свободно, своей волей и в своем интересе выражаю свое безусловное согласие на обработку моих персональных данных МАУ г.Нижневартовска «Спортивная школа», зарегистрированным в соответствии с законодательством РФ по адресу: 628600, Тюменская обл. ХМАО-ЮГРА, г.Нижневартовск, ул.Чапаева, 22 (далее по тексту — Оператор). Персональные данные — любая информация, относящаяся к определенному или определяемому на основании такой информации физическому лицу. Настоящее Согласие выдано мною на обработку следующих персональных данных: — Имя; — E-MAIL. Согласие дано Оператору для совершения следующих действий с моими персональными данными с использованием средств автоматизации и/или без использования таких средств: сбор, систематизация, накопление, хранение, уточнение (обновление, изменение), использование, обезличивание, а также осуществление любых иных действий, предусмотренных действующим законодательством РФ как неавтоматизированными, так и автоматизированными способами. Данное согласие дается Оператору для обработки моих персональных данных в следующих целях: — предоставление мне услуг/работ; — направление в мой адрес уведомлений, касающихся предоставляемых услуг/работ; — подготовка и направление ответов на мои запросы; — направление в мой адрес информации, в том числе рекламной, о мероприятиях/товарах/услугах/работах Оператора. Настоящее согласие действует до момента его отзыва путем направления соответствующего уведомления на электронный адрес [email protected]. В случае отзыва мною согласия на обработку персональных данных Оператор вправе продолжить обработку персональных данных без моего согласия при наличии оснований, указанных в пунктах 2 – 11 части 1 статьи 6, части 2 статьи 10 и части 2 статьи 11 Федерального закона №152-ФЗ «О персональных данных» от 27.07.2006 г.

Принимаю Не принимаю

Тестостерон пропионат + Станозолол + Туринабол

В курс входит:

Тестостерон пропионат (100мг/1мл) — 14 мл

Станозолол Депо (100мг/1мл) — 14 мл

Туринабол (1таб 10мг) — 168 табл

Клебутерол (1таб 20мкг) — 56 таб

Тамоксифен (1таб 10мг) — 91 таб

 

Неделя Туринабол Тестостерон П Станозолол Кленбутерол Тамоксифен
1 30мг (в день) 50мг (через день) 50мг (через день)    
2 30мг (в день) 50мг (через день) 50мг (через день)    
3 30мг (в день) 50мг (через день) 50мг (через день)    
4 30мг (в день) 50мг (через день) 50мг (через день)    
5 30мг (в день) 50мг (через день) 50мг (через день)    
6 30мг (в день) 50мг (через день) 50мг (через день)    
7 30мг (в день) 50мг (через день) 50мг (через день)    
8 30мг (в день) 50мг (через день) 50мг (через день)    
9       40мкг (в день) 60мг (в день)
10       40мкг (в день) 40мг (в день)
11       40мкг (в день) 20мг (в день)
12       40мкг (в день) 10мг (в день)

 

Фактически данная схема оптимальна для набора качественной мышечной массы и силовых показателей. Ставить надо будет по 0,5мл если дозировки по 100мг в 1 мл препарата. Есть небольшой риск гинекомастии (вследствие ароматизации тестостерона), однако эстрогены положительно влияют на рост силовых показателей, а также пропионат в меньшей степени ароматизируется, по сравнению с другими более длинными эфирами типа энантата или ципионата. Для полной уверенности допустимо применение ингибиторов ароматазы (типа Анастрозол или Эксеместан) в низких дозировках, начиная со 2-3 недели введения тестостерона.

 

Фармаколог СПбГУ о допинг-пробе Джона Джонса: скорее всего, боец одержал победу нечестно

Ранее, перед поединком Джонса и Густафссона, атлетическая комиссия штата Невада отказалась выдавать лицензию Джону Джонсу: в допинг-пробе спортсмена обнаружили анаболический стероид. Однако эксперты атлетической комиссии штата Калифорния не согласились с коллегами и допустили Джонса к состязаниям, заявив, что в его организме остался след от прежнего приема туринабола, за который боец ранее уже отбыл 15-месячную дисквалификацию.

Какое действие на организм оказывает туринабол, а главное — может ли это вещество оставаться в организме более года, рассказал профессор, заведующий кафедрой фармакологии СПбГУ Борис Андреев.

Какие процессы туринабол вызывает в организме?

Туринабол (химическое название 4-хлор-1-дигидро-17-альфа-метилтестостерон) относится к группе анаболических стероидов, синтезированных на основе мужского полового гормона тестостерона. Тестостерон обладает анаболической активностью. Эта активность стимулирует белковый синтез, увеличивает мышечную массу, задерживает кальций в костной ткани, стимулирует процессы заживления. Изначально анаболические стероиды создавали в качестве лекарств, которые сохраняют или даже превосходят тестостерон по анаболической активности, но лишены андрогенных свойств (отвечают за признаки мужского пола).

Анаболические стероиды активно используются в медицинской практике, ведь эти вещества повышают аппетит, увеличивают мышечную массу, улучшают фиксацию кальция в зубах и костной ткани, ускоряют репаративные (восстановительные) процессы в организме. При этом все анаболические стероиды могут использоваться в качестве допинга и поэтому входят в список запрещенных препаратов ВАДА (Всемирного антидопингового агентства).

Какое количество туринабола надо принять спортсмену, чтобы он значительно улучшил свои физические показатели?

Туринабол не зарегистрирован в России, поэтому рекомендуемые дозы препарата для приема внутрь (например, орал туринабол — до 100 мг / сутки) ориентированы не на пациентов, а на спортсменов и, соответственно, рекомендованы не для лечения, а для увеличения мышечной массы и повышения физической работоспособности.

Туринабол в виде масляного раствора для внутримышечных инъекций позиционируется как препарат для лечения нарушений белкового обмена при кахексии различного происхождения, остеопороза, хронических заболеваний печени и почек; периода восстановления после тяжелых травм, операций, ожогов, тяжелых инфекционных заболеваний, сопровождающихся потерей белка; коррекции катаболических побочных эффектов глюкокортикоидной терапии. Дозы для спортсменов мне неизвестны, но ряд экспертов считает, что они могут превышать терапевтические дозы в десять и более раз.

За какое время туринабол полностью выводится из организма? Действительно ли в организме Джонса в результате допинг-теста мог быть обнаружен след от туринабола, который он применял более 15 месяцев назад? Или — скорее всего — спортсмен повторно принял этот стероид?

Например, T1/2 (период полувыведения — время, необходимое для снижения концентрации лекарственного средства в крови на 50 % в результате выведения из организма) для орал туринабола составляет примерно 16 часов. Согласно канонам классической фармакологии препарат полностью выводится из организма в течение пяти Т1/2, и, соответственно, его не должно быть в крови примерно через 3,3 дня. Однако после курсового применения препарата время обнаружения следов его метаболитов в крови может достигать шести недель, что обусловлено усовершенствованием методов обнаружения запрещенных веществ.

T1/2 для инъекционной лекарственной формы туринабола и его аналогов фирмы производители данного препарата не указывают, но если исходить из рекомендуемой кратности его введения (от одного раза в неделю до одной инъекции каждые 3–4 недели), период полувыведения исходной молекулы может составлять примерно три недели. Таким образом, после последней инъекции туринабола через 3,5 месяца исходной молекулы лекарства и его метаболитов в крови спортсмена определяться не должно.

Вместе с тем, поскольку 4-хлор-1-дигидро-17-альфа-метилтестостерон — это производное метандростенолона (тоже анаболик), в молекулу которого введен атом хлора, ряд экспертов предупреждает спортсменов: при допинг-контроле следы метандростенолона могут быть зафиксированы в крови даже спустя шесть – девять месяцев после завершения курсового приема туринабола. Тем не менее, срок 15-месячной дисквалификации, на мой взгляд, является чрезмерным для утверждения, что Джонс не использовал туринабол повторно. Думаю, что спортсмен снова принимал это вещество. В средствах массовой информации, со ссылкой на слова Джонса, пишут, что ряд специалистов утверждает: туринабол может оставаться в организме до семи лет. Я категорически не согласен с этим мнением. Полагаю, что подобная точка зрения некоторых экспертов обусловлена очевидным наличием конфликта интересов.

Можно ли без назначения лечащего врача принимать анаболические стероиды? Могут ли они нанести вред организму?

Без рекомендации лечащего врача, соответствующего врачебного наблюдения и контроля принимать анаболические стероиды не следует. Препараты данной группы могут вызывать ряд серьезных дозозависимых побочных эффектов, в том числе гепатотоксичность, развитие импотенции у мужчин в результате подавления выработки собственного тестостерона.

Уже сейчас, после того как Джон Джонс выиграл бой, ВАДА заявила, что в течение года 12 раз будет проводить допинг-тесты этого спортсмена. На ваш взгляд, есть ли в этом смысл? И, если в допинг-пробах не обнаружат туринабола, может ли это быть серьезным аргументом в пользу того, что Джонс повторно не принимал стероид?

Да, это абсолютно адекватное решение, поскольку при такой кратности проведения допинг-тестов практически невозможно курсовое применение анаболических стероидов. Поэтому наличие отрицательных результатов в этом случае будет служить в пользу того, что Джонс не принимал в течение года препаратов данной группы.

туринабол и сжигание жира

туринабол и сжигание жира

туринабол и сжигание жира

>>>ПЕРЕЙТИ НА ОФИЦИАЛЬНЫЙ САЙТ >>>

Что такое туринабол и сжигание жира?

Данный комплекс для похудения представляет собой средство, помогающее быстро похудеть, без вреда для организма и особых усилий. Исключительно натуральный состав обладает широким спектром действия, позволяя запустить процесс похудения и восстанавливая естественную работу всего организма: Очищает организм от зашлакованности, выводит свободные радикалы, соли тяжелых металлов и токсины за счет способности разбухать, попадая в желудок и действовать как сорбент; Восстанавливает функциональность желчного пузыря и желчевыводящих путей, стимулируя отток желчи; Нормализует уровень сахара в крови, а также препятствует образованию вредного холестерина; Улучшает работу выделительной системы, в частности почек; Восстанавливает микрофлору кишечника, приводя в норму процессы пищеварения и перистальтики кишечника. Согласно научным исследованиям пища богатая на клетчатку позволяет очистить организм естественным образом, действую как щетка и помочь наладить процесс расщепления жиров.

Эффект от применения туринабол и сжигание жира

Хотелось снизить свой вес без вреда для здоровья, но и честно скажу, не особо напрягаясь. Поэтому в интернете почитала об активаторе сжигания жира. Решила попробовать и действовала по инструкции, как я поняла он не дает жирам откладываться, а выводит их из организма. А еще я заметила, что мой организм стал работать как часы и в итоге за месяц я похудела на 9 кг.

Мнение специалиста

Активатор сжигания жира – представляет собой усовершенствованный комплекс на основе природных компонентов, в частности клетчатке, способной очищать внутреннюю поверхность пищеварительного тракта и кишечника от вредных веществ, накапливающихся долгие годы. После избавления от токсинов, организм как-бы перезапускается и начинает работать с новой силой, расходуя массу энергии, извлекаемой из жиров, отложенных в подкожных слоях. Эффективность препарата обусловлена расщеплением висцерального жира, в том числе, обволакивающего брюшную полость. Таким образом, худеют только проблемные зоны – живот, бедра, ягодицы, а мышечная масса остается без изменений. Я рекомендую принимать коктейль людям страдающим ожирением на любой стадии, так как с его помощью можно легко избавиться от лишнего веса, и нормализовать работу всего организма. Результат закрепляется на длительный период, так как организм привыкает извлекать энергию из жиров, а ускоренный метаболизм не позволяет поступающим калориям надолго задерживаться в теле.

Как заказать

Для того чтобы оформить заказ туринабол и сжигание жира необходимо оставить свои контактные данные на сайте. В течение 15 минут оператор свяжется с вами. Уточнит у вас все детали и мы отправим ваш заказ. Через 3-10 дней вы получите посылку и оплатите её при получении.

Отзывы покупателей:

Катя

АСЖ-35 мне советовал диетолог. Сказала, что сейчас это самое безопасное средство и эффект от него хороший. Принимаю уже третью неделю, результат минус 8 кило (изначальный вес был 74 кг). Для меня это хороший результат, так как до этого мне ничего не помогало сдвинуть вес с мертвой точки. Надеюсь похудеть до заветных 52 кг)) Да, кстати, в аптеках этот активатор можете даже не искать, я весь город оббегала — нигде не слышали даже про такое средство. Здесь на сайте заказываю.

Анна

Полезный комплекс для сжигания жира АСЖ 35 состоит из: вытяжки из семян льна – очищает пищеварительную систему, обволакивает слизистую ЖКТ; клетчатки – пищевые волокна насыщают организм, утоляют голод, нормализуют микрофлору кишечника; аминокислот, протеинов, пектинов – регулируют обмен веществ, ускоряют регенеративные процессы в клетках, способствуют усвоению полезных веществ с пищи; витаминов групп В, С, Е – восполняют запас важных микроэлементов, повышают защитные силы организма; полиненасыщенных жирных кислот (Омега-3, Омега-6) – нормализуют кровообращение, работу сердца, снижают уровень холестерина.

Революционное похудение без физических нагрузок стало реальностью благодаря средству АСЖ-35. Оно очищает внутренности организма от шлаков и позволяет употреблять любые блюда без опаски за прибавку в весе. Уникальный напиток улучшает пищеварение и работу кишечника, сжигает адипоциты и настраивает организм на контроль массы тела. Инновационная программа дает современным людям возможность корректировать фигуру любого типа: «Груша» (небольшая грудь при узких плечах и широких бедрах) – нормализуется метаболизм, лишние килограммы уходят с нижней части тела, целлюлит становится малозаметным. «Яблоко» (жиры скапливаются в области талии) – живот становится подтянутым, фигура – стройной, кожа – свободной от «апельсиновой корочки». Результат похудения сохраняется навсегда. «Песочные часы» (тело пропорционально набирает вес в верхней и нижней частях) – препарат воздействует на подкожный жир, производит эффект лифтинга, сгоняет равномерно вес. Где купить туринабол и сжигание жира? Активатор сжигания жира – представляет собой усовершенствованный комплекс на основе природных компонентов, в частности клетчатке, способной очищать внутреннюю поверхность пищеварительного тракта и кишечника от вредных веществ, накапливающихся долгие годы. После избавления от токсинов, организм как-бы перезапускается и начинает работать с новой силой, расходуя массу энергии, извлекаемой из жиров, отложенных в подкожных слоях. Эффективность препарата обусловлена расщеплением висцерального жира, в том числе, обволакивающего брюшную полость. Таким образом, худеют только проблемные зоны – живот, бедра, ягодицы, а мышечная масса остается без изменений. Я рекомендую принимать коктейль людям страдающим ожирением на любой стадии, так как с его помощью можно легко избавиться от лишнего веса, и нормализовать работу всего организма. Результат закрепляется на длительный период, так как организм привыкает извлекать энергию из жиров, а ускоренный метаболизм не позволяет поступающим калориям надолго задерживаться в теле.
Положительные эффекты туринабола. Туринабол обладает высокой анаболической активностью и низкой андрогенной. Несомненно, положительных эффектов туринабол дает гораздо больше, чем побочных. Но все же они могут возникнуть. К положительным эффектам от приема туринабола можно отнести: 1). Процесс сжигания жира не является стремительным, но многие его замечают, а так же отмечают хорошую . Что сильнее, или мощнее Туринабол или Станозолол очевидно даже для новичка, но только от вас зависит выбор нужного стероида. Если это первый ваш курс, тогда купите Станозолол и получите не. Туринабол – мясонаборный препарат для наращивания красивых форм за короткий промежуток времени, без побочных эффектов . В курсе препарат используется для более продолжительного воздействия Кленбутерола на сжигание жиров. Т.к. Кленбутерол эффективно воздействует на организм, как жиросжигатель. Туринабол награждает спортсмена своими эффектами: силой, скоростью, выносливостью, сухим мясом – без побочных эффектов. Turinabol– это популярнейший препарат среди легкоатлетов, бегунов, пловцов, теннисистов. На сегодняшний день туринабол является ак. 6. Как и все таблетированные препараты, туринабол токсичен для печени. Токсичность эта аналогична метану. Как правило, люди, которые не испытывают проблем с печенью, не имеют их и при приёме туринабола. Область применения. Из свойств и особенностей этого анаболического стероида логично. «Туринабол Орал» — сравнительно безопасный препарат, однако и он может нанести непоправимый удар состоянию здоровья . Как действует «Туринабол»? Являясь относительно безвредным и мягким стероидом в таблетированной форме, он при регулярном употреблении является достаточно эффективным для. На цикле туринабол и кленбутерол можно принимать совместно и раздельно. Оральный Туринабол пьют в . Кленбутерол — не стероид, а больше после курсовой препарат, который помогает улучшить рельеф методом сжигания жира. Еще он хороший анти катаболик, который блокирует повышение кортизола после. Туринабола: Побочные эффекты и Руководство пользователя для экстремальных тощей массы Прибыли. Использование Turinabol приносит умеренную природу мышечной массы, но хорошего качества, без жира и воды. Орал Туринабол – стероид анаболического типа, по структуре и свойствам схожий с метандростенолоном. . Анаболический препарат туринабол считается одним из самых эффективных среди ему подобных. Даже за короткий курс приема он позволяет набрать мышечную массу, максимально снизив при этом количество. Туринабол — является лидером нашего обзора. Топ продаж среди таблетированных препаратов. . Ключевым фактором, без которого невозможно сжигание жира является диета, на втором месте — правильные тренировки и отдых. Туринабол, по сути, выполнял функции препарата, поддерживающего силовые. В подарке от дилера помимо моего заказа пришел стромбофорт – тот же станозолол, только в дозировке 5мг в таблетке, а не 10мг. План курса Туринабол (также известен под названиями: туранабол, turamoth, turanabol, турик, turinabolos, туриновер, орал туринабол, Oral Tbol) – это оральное анаболическое и андрогенное средство (ААС) на основе хлордегидрометилтестостерона (4-chlorodehydromethyltestosterone). Фармакологическая активность и. Станозолол или Винстрол является препаратом для сжигания липидных запасов и создания рельефа тела. Приём обеспечивает наращивание мышечной массы без задержки воды в организме, поэтому станозолол часто используют на сушку. Количество содержащегося тестостерона в препарате является. Туринабол (также известен под названиями: туранабол, turamoth, turanabol, турик, turinabolos, туриновер, орал туринабол, Oral Tbol) – это оральное анаболическое и андрогенное средство (ААС) на основе хлордегидрометилтестостерона (4-chlorodehydromethyltestosterone). Фармакологическая активность и.
http://piotrdolny.pl/files/upload/protein_dlia_szhiganiia_zhira_u_zhenshchin8773.xml
http://budohurtsa.pl/userfiles/dieta_dlia_szhiganiia_zhira_na_zhivote8734.xml

http://pnp-studio. com/fckeditorfiles/silnye_slabitelnye_sredstva_bystrogo_deistviia_dlia_pokhudeniia3597.xml
http://aturtle.ru/upload/knigi_allen_karr_legkii_sposob_pokhudet9001.xml
Хотелось снизить свой вес без вреда для здоровья, но и честно скажу, не особо напрягаясь. Поэтому в интернете почитала об активаторе сжигания жира. Решила попробовать и действовала по инструкции, как я поняла он не дает жирам откладываться, а выводит их из организма. А еще я заметила, что мой организм стал работать как часы и в итоге за месяц я похудела на 9 кг.
туринабол и сжигание жира
Данный комплекс для похудения представляет собой средство, помогающее быстро похудеть, без вреда для организма и особых усилий. Исключительно натуральный состав обладает широким спектром действия, позволяя запустить процесс похудения и восстанавливая естественную работу всего организма: Очищает организм от зашлакованности, выводит свободные радикалы, соли тяжелых металлов и токсины за счет способности разбухать, попадая в желудок и действовать как сорбент; Восстанавливает функциональность желчного пузыря и желчевыводящих путей, стимулируя отток желчи; Нормализует уровень сахара в крови, а также препятствует образованию вредного холестерина; Улучшает работу выделительной системы, в частности почек; Восстанавливает микрофлору кишечника, приводя в норму процессы пищеварения и перистальтики кишечника. Согласно научным исследованиям пища богатая на клетчатку позволяет очистить организм естественным образом, действую как щетка и помочь наладить процесс расщепления жиров.
Как запустить процесс жиросжигания, сохранив мышцы? 7 проверенных must-know принципов в питании, тренировках и восстановлении. . Если процесс сжигания жира является для тебе обременением, не приносящим удовольствие, можешь забыть о поставленной цели. Не нравится тренажерка – тренируйся. Кардио для сжигания жира. Как научить организм быстрее жечь жир? Как понять, что вы согнали именно жир, а не мышцы или воду? Чтобы запустить жиросжигание, надо, фактически, перехитрить свой организм. Потому что он-то будет беречь свои отложения до последнего, жертвуя водой, мускулатурой и вашим. Что такое сжигание жира. Под жиросжиганием подразумевается часть сложнейшего процесса в . Сжечь жир на животе и боках быстро и результативно можно при помощи . Как запустить процесс жиросжигания. Быстрее всего сжигается жир в организме при совмещении правильного и сбалансированного питания с. Гормоны играют огромную роль в том, что касается сжигания жира, и регулирование гормонального фона будет иметь решающее значение в этом процессе Инсулин Каждый раз, когда мы едим, наш организм вырабатывает инсулин. Сжигание жира: основные правила. 27 Августа, 2018. Диеты. Валерия Дашкевич. Как запустить процесс жиросжигания в организме? . Как происходит процесс жиросжигания в организме? По-другому дела обстоят с внутренним жиром, который не реагирует на уровень инсулина и поддается расщеплению. Поэтому висцеральный жир сжигать проще. Правда, есть одно, но: расщепляясь на жирные кислоты, внутренний жир пополняет запасы… подкожного жира! Итак, что же делать, чтобы максимально запустить процесс жиросжигания? Процесс накопления жиров в жировую ткань называется липогенез. Происходит этот процесс в первую очередь из-за . Как запустить жиросжигание. Для того чтобы организм запустил процесс жиросжигания, ему нужна стрессовая ситуация. Такая как недостаток калорий. Допустим, что для нормальной. Рассказываем, что быстро сжигает жир — как происходит процесс похудения и жиросжигания в организме, физиология, как сжигаются липиды во время тренировки и на. . Как ускорить сжигание жиров в организме. Что бы ускорить процесс сжигания жира в организме необходимо поддерживать водный баланс. Для этого необходимо выпивать 1,5-2 литра воды в сутки. Вода нормализует работу желудочно-кишечного тракта, ускоряет процесс обмена веществ, повышая скорость метаболизма на 30%. Белок. Для того что.

Туринабол и Винстрол для красивых мышц — Амарпушп

Содержание

Туринабол и Винстрол для красивых мышц

Туринабол, также известный как Tbol, Oral Turinabol, Oral Tbol и 4-хлоргидрометилтестостерон, является пероральным анаболически-андрогенным стероидом (AAS). Это производное дианабола (дбол), но не ароматизируется до эстрогена. Фактически, он дает медленный высококачественный прирост с меньшим количеством побочных эффектов примоболана, продаваемого в Австралии, чем метандростенолон.Туринабол https://mutagen.com.ua/products/turanabol был представлен фармацевтической компанией Jenapharm, Восточная Германия, в 1960-х годах. Единственная цель заключалась в том, чтобы получить конкурентное преимущество для спортсменов-мужчин и женщин на Олимпийских играх. Туринабол — это стероид, у которого нет откатов, но это не значит, что он не дает больших преимуществ при курсах. Поскольку он не ароматизируется, спортсмену не нужно беспокоиться об эстрогенах, таких как гинекомастия, отеки, бессонница или высокое кровяное давление (гипертония).

Улучшите либидо и мышцы с помощью тестостерона ципионата

Также есть несколько преимуществ приема этого препарата:

Результат без прибавки в весе

Стек Тренболон и Винстрол Депо

Тяжелые мышцы без воды

Винстрол (станозолол) — полное руководство для начинающих 2019

Увеличение силовых показателей

Увеличение мышечной массы

Винстрол | ОБЗОР | Использовать это или нет? ЗА и МИНУСЫ

Повышение уровня тестостерона

Мужчинам рекомендуется принимать 20-50 мг в день как часть курса стероидов.Многие бодибилдеры считают, что для хороших результатов нужно употреблять его в больших дозах, но это не так. Поскольку туринабол не ароматизируется, не следует ожидать, что вес будет увеличиваться ежедневно, так как спортсмен не сможет удерживать в мышцах много воды. Период полувыведения составляет 16 часов, поэтому один раз в день дозировка будет работать нормально. Хотя многие бодибилдеры разделили дозу с 12-часовыми интервалами, чтобы получить «идеальный» уровень в крови.

Винстрол — один из сильнодействующих препаратов для коррекции веса.

Винстрол для спортивных целей

Винстрол https://mutagen.com.ua/products/strombaged — это тип анаболического стероида, который доступен в нескольких различных препаратах. Этот стероид ранее использовался для лечения отека Квинке, который вызывает отек лица, горла или конечностей. Это, наверное, любимое преимущество Винстрола для большинства мужчин. В отличие от многих других анаболических стероидов, Винстрол не превращается в эстроген, что является одним из его наиболее важных преимуществ. Стероиды, которые внутри тела превращаются в эстроген, могут вызывать у мужчин серьезные побочные эффекты.Поскольку винстрол не превращается в организм эстрогена, мужчинам не нужно беспокоиться о таких проблемах, как гинекомастия (развитие женской груди). Тем не менее, все же важно принимать этот стероид под наблюдением врача, чтобы избежать других потенциальных побочных эффектов. Винстрол обеспечивает качественный рост мышц, что является еще одним преимуществом этого стероида. В то время как другие анаболические стероиды увеличивают размер мышц, не вызывая увеличения силы, Винстрол помогает нарастить сильные мышцы в сочетании с отличными тренировками.Для людей, заинтересованных в наращивании мышц Винстрола, этот стероид предлагает отличный способ не только увеличить размер мышц, но и увеличить их силу. Другие анаболические стероиды часто приводят к задержке воды, что лишает шею мускулистого вида, которого хотят многие бодибилдеры. Некоторые бодибилдеры, которые хотят чистого размера, не возражают и переходят к Anadrol. Однако одним из преимуществ винстрола в бодибилдинге является то, что он не удерживает воду, как другие анаболические стероиды. Это делает его популярным вариантом для бодибилдеров, которые могут избежать побочных эффектов, которые anavar готовятся к шоу.Купить препараты можно в магазине анаболических стероидов в Америке https://mutagen.com.ua/.

Станозолол vs туринабол, станозолол vs анавар — Профиль — Marimba.org Forum

Станозолол vs туринабол, станозолол vs анавар — Юридические стероиды для продажи







Станозолол vs туринабол для легких случаев, исследования о дексаметазоне отмечены большой звездочкой: хотя кажется, что он помогает тяжелобольным, он вредит другим.Дексаметазон, названный «крупным прорывом» в лечении коронавируса. Дексаметазон, дешевый и широко используемый стероид, стал первым лекарством, способным спасти жизни пациентов с COVID-19. «Первый препарат, снижающий смертность от COVID-19, — это не какое-то новое дорогое лекарство, а старый дешевый стероид», — сказал Уолш. «Последствия огромны во всем мире. Дешевый и широко используемый стероид под названием дексаметазон стал первым лекарством, способным спасти жизни пациентов с COVID-19, что, по словам ученых, является «крупным прорывом» в мире.Борис Джонсон приветствует «самый большой прорыв» в борьбе с коронавирусом в Великобритании, поскольку NHS одобряет стероид стоимостью 5 фунтов стерлингов, который может «спасти тысячи жизней» после того, как испытание обнаружило, что он «снижает риск смерти до 35%». Дешевый и широко используемый стероид под названием дексаметазон стал первым лекарством, способным спасти жизни пациентов с COVID-19, что, по мнению ученых, является «большим прорывом». Дексаметазон: стероидный препарат — «прорыв» в лечении коронавируса Дешевый и широко используемый стероид стал первым лекарством, способным спасти жизни пациентов с коронавирусом.Стероидные препараты недорогие, широко доступны и используются десятилетиями. По словам британских ученых, стероид, дексаметазон, является первым лекарством, которое помогает спасти тяжелобольных пациентов с коронавирусом. Большой прорыв », — сказал д-р. Ученые из Великобритании открыли дешевое и доступное лечение для пациентов с COVID-19. Они описали использование обычного стероидного препарата дексаметазона для лечения коронавируса как «крупный прорыв». Профессор Питер Хорби, академик Оксфордского университета, который руководил исследованием, сказал, что «то, что мы видели, было действительно весьма примечательным».
Кто использует анаболические стероиды, станозолол против туринабола.
Станозолол и анавар
Туринабол различаются в зависимости от типа углеводов в составе. Есть добавки с легкоусвояемыми простыми углеводами, а есть такие, которые усваиваются надолго. Людям с избыточным весом, а также склонным к полноте регулярное употребление туринабола противопоказано. Станозолол в основном называется таблетированной формой, а инъекционная форма — винстролом. Спортсмены и бодибилдеры поставили стероид на третье место в рейтинге анаболических веществ, а остальные места достались тестостерону и тренболону.Туринабол был прекращен в девяностых годах из-за стигмы, связанной с использованием анаболических стероидов. Его никогда не снимали с полок из-за опасности для здоровья Сегодня стероид используется как добавка, а не как лекарство. Лекарственное использование туринабола прекратилось в восьмидесятые годы. Станозолол — активный ингредиент анаболического стероида винстрола — за очень короткое время стал центром внимания. Важно упомянуть канадского спринтера, который выиграл золотую медаль в беге на 100 метров среди мужчин в 1988 году на Олимпийских играх в Сеуле в Южной Корее… используя винстрол.Станозолол — это искусственный стероид, похожий на встречающийся в природе стероид тестостерон. Станозолол используется при лечении наследственного ангионевротического отека, который вызывает приступы отека лица, конечностей, половых органов, стенки кишечника и горла. Станозолол может снизить частоту и тяжесть этих приступов. Turanabol balkan известен 4 своими полезными эффектами и очень низкими осложнениями. По затратам он заметно превосходит стоимость обычных вариантов, включая стенолон — только отмену туринабола.Эта деталь вызвала поток обзоров — «пероральный туринабол против истории и обзор станозолола: станозолол, несомненно, является одним из самых популярных анаболических стероидов, когда-либо сделанных. Почти все знают это по имени. Станозолол или винстрол — это хорошо известный анаболический стероид, полученный из тестостерона с несколькими молекулярными изменениями, которые придают ему его уникальные свойства. Выпускается как в таблетках, так и в инъекциях. Бодибилдеры и спортсмены ставят станозолол на третье место среди лучших анаболических стероидов после тестостерона и тренболона.В одном краткосрочном исследовании на собаках с экспериментально индуцированной хронической сердечной недостаточностью у станозолола были неоднозначные эффекты. Общее количество потребляемой пищи, безжировая масса тела и азотный баланс увеличились, но значительного влияния на жировые отложения, минералы костей или потребление пищи на кг массы тела не наблюдалось. Продолжительность действия, вероятно, не менее недели. Однако отдельные частицы станозолола могут оставаться в месте инъекции в течение продолжительных периодов времени, что может привести к сбою теста на наркотики. Депо винстрола и женщины.Хотя ни один анаболический стероид не является полностью безопасным для женщин, станозолол — особенно неподходящий выбор. В ГДР есть несколько интересных фактов о спорте, которыми я мог бы поделиться: все дети в возрасте 10 лет были оценены специалистами. После быстрой оценки роста, веса и симметрии тела было определено, для какого вида спорта они могут быть одарены, а также было определено, могут ли они впоследствии быть непригодными для военной службы из-за каких-либо ортопедических проблем. Что такое винстрол (станозолол)? Винстрол, который очень часто называют многие бодибилдеры и принимающие стероиды, Винни, представляет собой анаболический и андрогенный стероид с 17 альфа-алкилированием (c17aa aas).Винстрол — это торговая марка и самая известная торговая марка с активным веществом (химическое название) станозолол. Он включает в себя BCAA, белок и аденозин-5′-трифосфат в своей формуле, станозолол против туринабола.
Стероиды коронавирусный прорыв, станозолол против анавара
Станозолол против туринабола, купить анаболические стероиды онлайн Visa Card. Пока зарплаты и контракты остаются большими, игроки тоже будут использовать анаболические стероиды, чтобы добиться этого и оставаться такими. Блейк Тиррелл, «Запах пота: греческая легкая атлетика, Олимпийские игры и культура», издательство Bolchazy-Carducci Publishers, Wauconda, сравнение станозолола и туринабола.J Здоровье подростков. 10 лучших натуральных анаболиков на 2019 год. Https://regiofunk38.de/community/profile/sarms40266627/ Большинство подростков умны и держатся подальше, станозолол против туринабола. Станозолол против туринабола, цена купить законный цикл анаболических стероидов. Как это работает: дополнительные биодоступные аминокислоты являются достойным союзником в вашей борьбе с катаболизмом, будь то приготовление и без того высокобелковой пищи с еще большим содержанием белка с отличным соотношением аминокислот или добавление некоторых аминокислот между приемами пищи, чтобы сохранить азот и Высокий уровень гормона роста в течение дня, станозолол против анавара.
Результаты по остарину и кардарину, остарину и gw.
«Первый препарат, снижающий смертность от COVID-19, — это не какое-то новое дорогое лекарство, а старый дешевый стероид», — сказал Уолш. «Последствия огромны во всем мире. Его со-ведущий исследователь Питер Хорби назвал дексаметазон «большим прорывом». В период с марта по июнь в ходе испытания было рандомизировано 403 взрослых пациента с коронавирусом, поступивших в отделение интенсивной терапии, которые получали стероид гидрокортизон или вообще не получали стероиды. Испытание обнаружило 93 пациента. .«Прорыв»: кто приветствует стероидное лечение коронавируса, исследование в Великобритании показывает, что дексаметазон снижает смертность примерно на 30 процентов у критических пациентов с коронавирусом, что некоторые американские врачи настроены скептически. Эксперты утверждают, что дешевые и легкодоступные стероиды могут помочь снизить риск смерти от коронавируса. Было обнаружено, что гидрокортизон, который стоит всего 5 фунтов стерлингов, снижает риск смерти в. Стероидный прорыв в лечении коронавируса, upmc говорит, что общедоступный стероид может помочь тем, кто страдает от коронавируса, пережить болезнь, говорится в новом исследовании.Автор: Эрик Хейл, патч. Результатом стала эпидемия недоверия, которая еще больше подрывает и без того хаотичный и неэффективный ответ страны на новый коронавирус, вызывающий болезнь covid-19. По мнению экспертов в области здравоохранения в Великобритании, лечение низкими дозами стероидов дексаметазоном может стать крупным прорывом в борьбе с коронавирусом. Они говорят, что препарат может снизить риск смерти на треть для пациентов, находящихся на искусственной вентиляции легких, и на пятую часть для тех, кто нуждается в кислороде. Обычный стероид, который стоит всего 6 фунтов стерлингов, был назван «крупным прорывом» в поисках лекарства от коронавируса.Согласно недавнему исследованию в Великобритании, дексаметазон снижает риск смерти от коронавируса на треть у пациентов, находящихся на искусственной вентиляции легких. Дешевый стероид стал первым спасающим жизнь препаратом в пандемии covid-19, который ученые описали как крупный прорыв и вселяющий надежды на выживание тысяч из самых
CrazyBulk D-Bal (альтернатива Дианабола). естественная и безопасная альтернатива Dianabol, имитирующая его эффекты. D-Bal на сегодняшний день является лучшим легальным стероидом для курсов увеличения объема, поскольку он естественным образом способствует росту мышечной массы за счет увеличения содержания азота.Чем больше азота в мышцах, тем больше белка они могут синтезировать. Больше белка приводит к большему количеству мышечных волокон, что приводит к массивному приросту мышц, прорыву стероидов и коронавируса. CrazyBulk D-Bal следует принимать через 45 минут после тренировки. Запрос на выполнение Dbal, запрос на запуск dbal Даже если у вас нет заболевания печени, лучше всего пройти функциональные тесты печени, если вы принимаете андростендион. Синдром поликистозных яичников (СПКЯ): есть опасения, что добавки андростендиона могут ухудшить симптомы СПКЯ, станозолол по сравнению с оксандролоном.Ниже мы расскажем о лучших поддерживающих курсах, а также о некоторых законных натуральных стероидных альтернативах. Купите легальные стероиды онлайн здесь, станозолол против мастерона. Когда вы просматриваете полки аптек в поисках добавок, ищите бутылки с отметкой «Проверено USP», — сказал Фейерштейн. Эта печать указывает на то, что продукт был добровольно оценен Фармакопеей США, которая проверяет, что добавка не содержит опасных уровней загрязняющих веществ и сделана из ингредиентов, перечисленных на этикетке, — станозолола против оксандролона.Активные ингредиенты этой добавки включают корень мака (Lepidium meyenii), экстракт ягод боярышника (Crataegus laevigata), экстракт мукуны жгучей 4: 1 (бархатные бобы) и L-аргинин, что делает его одной из самых эффективных добавок гормона роста, доступных в Интернете, станозолол против туринабола. . Когда дело доходит до добавок для повышения уровня анаболических гормонов, в том числе гормона роста, Genius Test лидирует. Чтобы найти баланс, потребуется время, но как только он будет достигнут, вы можете по мере необходимости использовать фазу сокращения в течение нескольких недель, сравнивая станозолол с туринаболом.Как начать анаболическую диету. Наращивание качественной мышечной массы может занять много времени, так почему бы вам не ускорить это с помощью этих анаболических добавок, станозолола против анавара. Побочных эффектов нет, будьте умны и придерживайтесь рекомендуемых дозировок. Принятие решения о покупке гормона роста гипофиза от Anabolic Research означает, что вы получите его в кратчайшие сроки благодаря их вариантам быстрой доставки, которые доступны во всем мире, станозолол против оксандролона. Добавка также на 100% легальна и не требует рецепта для ее получения.Тем не менее, безжировая масса не была увеличена в течение 8-недельного испытания, хотя процентное содержание жира в организме уменьшилось на 3. ДГТ может вызывать такие побочные эффекты, как прыщи, выпадение волос и увеличение простаты, станозолол по сравнению с туринаболом. Какие стероиды безопасны, станозолол или оксандролон. Независимо от того, поднимаете ли вы тяжести, чтобы набрать дополнительную силу или построить отличное телосложение, получение желаемого результата может занять некоторое время. Дозирование ААС в силовых видах спорта имеет тенденцию быть более либеральным, поскольку многие федерации не тестируют эти и другие вещества, станозолол против анавара.В то время как более сильные эффекты могут быть замечены при более высоких дозах, также увеличивается риск побочных эффектов. Самые популярные продукты:
Тестовый пропионат 70 мг
Anavar 10 Maha Pharma
Oxa-Max 10 мг (100 таблеток)
Сустанон 250 мг / мл x 10 мл
T3 Cytolmel
MSD
Stan-Max 10 мг (100 таблеток)
Dragon Pharma
Winstrol — 50 мг
Singani Pharma
Anavar 10 мг x 50 таблеток
Para Pharma США DOM до 20 дней
Dragon Pharma US DOM до 20 дней
Adcock Ingram
ANAVAR 10 мг (100 таблеток)
Provironum 25 мг x 100 таблеток
Testosterone Ундеканоат
Maha Pharma
Станозолол против туринабола, станозолол против анавара Общие (от 1% до 10%): повышение уровня простатического специфического антигена (ПСА), рак простаты, станозолол по сравнению с туринаболом.Редко (менее 0. Часто (от 1% до 10%): утомляемость, гипергидроз; озноб, боль в теле, нарушение обоняния. Редко (менее 0. Частота не сообщается: отек. Https://consultmylife.com/community/profile) / sarms18949789 / Станозолол в основном называется таблетированной формой, а инъекционная форма — винстролом. Спортсмены и бодибилдеры ставят стероид на третье место в рейтинге анаболических веществ, а другие места достались тестостерону и тренболону. 5 самых популярных стероидов. стеки и циклы опубликованы 28 марта 2017 г. 28 марта 2017 г. • 141 отметка «Нравится» • 13 комментариев.Винстрол (анаболические стероиды), торговая марка таблеток станозолола, представляет собой анаболический стероид, синтетическое производное тестостерона. Каждая таблетка для приема внутрь содержит 2 мг станозолола. Химически он обозначается как 17-метил-2 ‘h -5 (альфа) -андрост-2-ено [3,2-c] пиразол-17 (бета) -ол. Люди волнуются, пассивно стремясь к популярности, когда 4 или 5 фунтов недостаточно. Цена точечного туринабола исчезает, если спортсмен получает предпочтительный результат, полностью меняя внешний вид за несколько месяцев. Просыпайтесь и смотрите в зеркало — начните сегодня — у вас одна жизнь, никогда не задерживайтесь! Вы, наверное, слышали, как люди сравнивают туринабол и анавар.Оба считаются мягкими пероральными стероидами, что в определенной степени верно. То, что стероид слабый, не означает, что с ним не стоит проводить исследования. Anavar — отличный стероид для использования перед соревнованиями. История и обзор станозолола: станозолол, несомненно, является одним из самых популярных анаболических стероидов, которые когда-либо производились. Почти все знают это по имени. Станозолол — это искусственный стероид, похожий на встречающийся в природе стероид тестостерон. Станозолол используется при лечении наследственного ангионевротического отека, который вызывает приступы отека лица, конечностей, половых органов, стенки кишечника и горла.Станозолол может снизить частоту и тяжесть этих приступов. Винстрол (станозолол) был самым популярным стероидом среди многих спортсменов, поскольку они считают, что он относительно безопасен и мягок как для мужчин, так и для женщин. С другой стороны, анадрол представляет собой соединение, производное от dht, и 17-альфа-алкилированный стероид. Первоначально он был изготовлен, чтобы помочь людям, страдающим анемией. Turanabol balkan известен 4 своими полезными эффектами и очень низкими осложнениями. По затратам он заметно превосходит стоимость обычных вариантов, включая стенолон — только отмену туринабола.Эта деталь вызвала поток отзывов: «Туринабол пероральный против винстрола, анавара и теста: мой 1-й курс. Здесь я подробно расскажу обо всех своих переживаниях, о том, через что я прошел, о побочных эффектах и ​​о том, как я достиг идеального телосложения. Винстрол — это тип анаболического стероида, который доступен в виде нескольких различных препаратов. Что такое винстрол (станозолол)? Винстрол, который очень часто называют многие бодибилдеры и принимающие стероиды, Винни, представляет собой анаболический и андрогенный стероид с 17 альфа-алкилированием (c17aa aas).Винстрол — это торговая марка и самая известная торговая марка с активным веществом (химическое название) станозолол
Быстрая доставка: Нью-Йорк, Лос-Анджелес, Чикаго, Хьюстон, Феникс, Филадельфия, Сан-Антонио, Сан-Диего, Даллас, Детройт, Сан Хосе, Индианаполис, Джексонвилл, Сан-Франциско, Хемпстед, Колумбус, Остин, Мемфис, Балтимор, Шарлотта, Форт-Уэрт, Милуоки, Бостон, Эль-Пасо, Вашингтон, Нашвилл-Дэвидсон, Сиэтл, Денвер, Лас-Вегас, Портленд, Оклахома-Сити, Тусон , Альбукерке, Атланта, Лонг-Бич, Брукхейвен, Фресно, Новый Орлеан, Сакраменто, Кливленд, Меса, Канзас-Сити, Вирджиния-Бич, Омаха, Окленд, Майами, Талса, Гонолулу, Миннеаполис, Колорадо-Спрингс.Аризона, Калифорния, Колорадо, Округ Колумбия, Флорида, Джорджия, Гавайи, Иллинойс, Индиана, Луизиана, Мэриленд, Массачусетс, Мичиган, Миннесота, Миссури, Небраска, Невада, Нью-Мексико, Нью-Йорк, Северная Каролина, Огайо, Оклахома, Орегон, Пенсильвания, Теннесси, Техас, Вирджиния, Вашингтон, Висконсин, Алабама, Алабама, Аляска, AK, Аризона, Аризона, Арканзас, АР, Калифорния, Калифорния, Колорадо, Колорадо, Коннектикут, Коннектикут, Коннектикут, Делавэр, Делавэр, округ Колумбия, округ Колумбия, Флорида, Флорида, Джорджия, Джорджия, Гавайи, Гавайи, Айдахо, Айдахо, Иллинойс, Иллинойс, Индиана, Индиана, Айова, Айова, Канзас, Канзас, Кентукки, Кентукки, Луизиана, Лос-Анджелес, Мэн, Мэн, Мэриленд, Мэриленд, Массачусетс, Массачусетс, Мичиган, Мичиган, Миннесота, Миннесота, Миссисипи, Миссисипи, Миссури, Миссури, Монтана, MT, Небраска, NE, Невада, Невада, Невада, Нью-Гэмпшир, NH, Нью-Джерси, Нью-Джерси, Нью-Мексико, Нью-Мексико, Нью-Йорк, Нью-Йорк, Северная Каролина, Северная Каролина, Северная Дакота, Северная Дакота, Огайо, Огайо, Оклахома, Оклахома, Орегон, Орегон, Пенсильвания, Пенсильвания, Род-Айленд, Род-Айленд, Южная Каролина, Южная Каролина, Южная Дакота, Южная Дакота, Теннесси, Теннесси, Теннесси, Техас, Техас, Юта , Юта, Вермонт, Вирджиния, Вирджиния, Вашингтон, WA, Западная Вирджиния, WV, Висконсин, WI, Вайоминг, WY

Доставка по всему миру: США, США, Италия, Великобритания, Германия, Австралия, Испания, Франция, Нидерланды, Ирландия, Швейцария, Япония, Дания, Швеция, Австрия, Норвегия, Новая Зеландия, Греция, Бельгия blabla

Прием станозолола в сочетании с упражнениями приводит к снижению активности теломеразы, возможно, связанному со старением печени

Int J Mol Med.2018 июл; 42 (1): 405–413.

, # 1, * , # 1, * , 2 , 3 , 3 , 4 , 3 , 3 , 5 , 3 и 1

Эрен Озкагли

1 Кафедра фармацевтической токсикологии фармацевтического факультета

Мехтап Кара

1 Кафедра фармацевтической токсикологии фармацевтического факультета

и

Тугба Котил

2 Кафедра гистологии и эмбриологии медицинского факультета Стамбульского университета, Стамбул 34116, Турция

Персефони Фрагкиадаки

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион

Манолис Н.Цацаракис

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион

Кристина Цицимпику

4 Государственная химическая лаборатория Греции, 11521 Афины

Polychronis D. Stivaktakis

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион

Димитриос Цукалас

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион

Деметриос А.Спандидос

5 Лаборатория клинической вирусологии Медицинского факультета Критского университета, 71003 Ираклион, Греция

Аристидес М. Цацакис

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии Медицинского факультета Критского университета, 71003 Ираклион

Букет Альпертунга

1 Кафедра фармацевтической токсикологии фармацевтического факультета и

1 Кафедра фармацевтической токсикологии фармацевтического факультета и

2 Кафедра гистологии и эмбриологии медицинского факультета Стамбульского университета, Стамбул 34116, Турция

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион

4 Общая химическая государственная лаборатория Греции, 11521 Афины

5 Лаборатория клинической вирусологии Медицинского факультета Критского университета, 71003 Ираклион, Греция

# Внесен равный вклад.

Для корреспонденции: профессору Букету Альпертунга, кафедра фармацевтической токсикологии, фармацевтический факультет, Стамбульский университет, Беязит, Стамбул 34116, Турция, электронная почта: rt.ude.lubnatsi@agnutПрофессору Аристидесу М. Цацакису, Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинская школа, Университет Крита, ПО Box 1393, 71003 Heraklion, Greece, E-mail: [email protected]

* Внесено поровну

Получено 28 февраля 2018 г .; Принято 11 апреля 2018 г.

Эту статью цитировали в других статьях в PMC.
Заявление о доступности данных

Наборы данных, использованные и / или проанализированные в ходе текущего исследования, доступны у соответствующего автора по разумному запросу.

Реферат

Анаболические вещества — это допинговые вещества, которые обычно используются в спорте. Станозолол, 17α-алкилированное производное тестостерона, широко используется спортсменами и бодибилдерами. Некоторые медицинские и поведенческие побочные эффекты связаны со злоупотреблением анаболическими андрогенными стероидами (ААС), в то время как печень остается наиболее узнаваемым органом-мишенью.В настоящем исследовании изучалось влияние на печень введения станозолола крысам в высоких дозах, напоминающих дозы, применяемые для допинга, в присутствии или отсутствии физических упражнений. Станозолол и его метаболиты, 16-β-гидроксистанозолол и 3′-гидроксистанозолол, были обнаружены в печени крыс с помощью жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии (ЖХ-МС). Активность теломеразы, которая участвует в клеточном старении и онкогенезе, была обнаружена путем исследования уровней экспрессии обратной транскриптазы теломеразы (TERT) и фосфатазы и гомолога тензина (PTEN) в печени крыс, получавших станозолол.Станозолол индуцировал теломеразную активность на молекулярном уровне в ткани печени крыс, и упражнения обращали эту индукцию, отражая возможное преждевременное старение ткани печени. На экспрессию гена PTEN в печени крыс практически не влияли ни упражнения, ни введение станозолола.

Ключевые слова: станозолол, гомолог фосфатазы и тензина, обратная транскриптаза теломеразы, теломеразная активность, 16-β-гидроксистанозолол, 3′-гидроксистанозолол

Введение

Станозолол является анаболическим андрогенным стероидом, повышающим эффективность, повышающим эффективность.Среди всех ААС станозолол является одним из наиболее часто используемых стероидов профессиональными спортсменами и молодыми людьми для улучшения внешнего вида и работоспособности. Станозолол представляет собой 17α-алкилированное производное тестостерона с анаболическими и высокими андрогенными свойствами (1,2), и его использование в спорте запрещено Всемирным антидопинговым агентством (WADA) (3).

В прошлом ААС использовались только элитными спортсменами и бодибилдерами для целей допинга. Однако в настоящее время даже молодые люди злоупотребляют ААС в супрафизиологических дозах для улучшения внешнего вида (4,5).Сообщается, что станозолол является одним из наиболее часто используемых ААС (6), и он отвечает за несколько медицинских и поведенческих побочных эффектов, являясь признанным фактором риска заболеваний печени как у экспериментальных животных, так и у людей (7-13). . Станозолол широко биотрансформируется ферментативными путями в печени. Сообщалось, что основными метаболитами станозолола являются 3′-гидроксистанозолол, 4-β-гидроксистанозолол и 16-β-гидроксистанозолол (14,15). В целом, ААС проявляют свои эффекты посредством нескольких различных механизмов, таких как модуляция экспрессии рецепторов андрогенов (16).Неблагоприятные эффекты, связанные с печенью, чаще связаны с 17α-алкильными производными ААС и, как сообщается, не связаны с путем введения. Однако точные механизмы еще полностью не изучены (17).

Теломеры представляют собой гетерохроматиновые нуклеопротеидные комплексы на концах хромосом, участвующие в ряде основных биологических функций (). Известно, что теломеры играют ключевую роль в формировании и прогрессировании до 90% злокачественных новообразований. Теломеразная активность играет ключевую роль в клеточном старении и онкогенезе (18).Повышенная активность теломеразы обнаруживается в большинстве случаев рака человека (19). Теломераза — это рибонуклеопротеин, отвечающий за поддержание длины теломер. Ядро теломеразы состоит из двух компонентов: каталитической обратной транскриптазы теломеразы (TERT) и компонента теломеразной РНК (TERC) ().

Теломеры — это защитные колпачки хромосом (59) (адаптировано с разрешения Shutterstock).

Теломераза добавляет теломерные повторы (TTAGGG) к 3′-гидроксильному концу ведущей цепи теломеры.Компонент РНК служит шаблоном для добавления нуклеотидов. Это теломеразный комплекс, который состоит из компонента обратной транскриптазы (TERT), компонента РНК (TERC), белка дискерина и других связанных белков (NHP2, NOP10 и GAR1).

Уровень экспрессии мРНК TERT был изучен в качестве биомаркера, поскольку было продемонстрировано, что он является лимитирующим детерминантом активности теломеразы при различных злокачественных новообразованиях (20). Ген фосфатазы и белка-гомолога тензина (PTEN) кодирует белок-супрессор опухоли с фосфатазной активностью.Сообщалось, что частота гетерозиготности PTEN при гепатоцеллюлярной карциноме человека (ГЦК) человека снижается до 33% (21). PTEN участвует в подавлении активности теломеразы посредством регуляции активности TERT (22). PTEN является негативным регуляторным белком сигнального пути фосфоинозитид-3-киназы / AKT механизма регуляции выживания клеток и индуцирует клеточный апоптоз (23). PTEN предотвращает активацию AKT посредством дефосфорилирования фосфатидилинозитол (3,4,5) -трисфосфата (PIP3) до фосфатидилинозитол-4,5-бисфосфата (PIP2).Подавление PTEN связано с онкогенной активностью в клетке (24).

Целью этого исследования было изучить, по крайней мере, насколько нам известно, роль теломеразы в вызванной станозололом гепатотоксичности путем изучения корреляции между активностью теломеразы и уровнями экспрессии гена PTEN-TERT. Также была исследована биоаккумуляция станозолола и двух его основных метаболитов (3′-гидроксистанозолол и 16-β-гидроксистанозолол) в ткани печени, а также его связь с активностью теломеразы.

Материалы и методы

Эксперименты на животных

Всего было получено 34 крысы-самца Sprague-Dawley в возрасте 8 недель, которые разместили в помещениях для лабораторных животных Департамента лабораторных наук о животных Института экспериментальной медицины Стамбульского университета. (Стамбул, Турция) в соответствии с Комитетом по этике экспериментов на животных Стамбульского университета, HADYEK (номер утверждения 2013/100). Крысы были разделены на 5 групп следующим образом: i) контрольная (C) группа; ii) группу обработки пропилена (PG); iii) группу обработки станозололом (ST); iv) группа лечения и упражнений с пропиленом (PGE); и v) группа лечения станозололом и физических упражнений (STE).Животных размещали по 4 животных в одной металлической клетке и содержали в 12-часовом цикле темнота / свет при температуре 20–23 ° C. Количество крыс в экспериментальной группе, уход за крысами, обращение и используемые экспериментальные процедуры соответствовали руководящим принципам HADYEK. Вес крыс при покупке регистрировали и использовали для корректировки дозы (). Гуманными конечными точками, определенными в нашем исследовании, были боль, дистресс, неправильная осанка и судороги в соответствии с Руководящим документом ОЭСР (25). Ни у одного животного не было клинических признаков гуманных конечных точек, которые оправдывали бы их жертвоприношение до окончания эксперимента.Экспериментальный план исследования представлен в.

Таблица I

Вес крыс при покупке.

902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 3 264 902 группа 902 902 902 902 902 902 902 902
Количество крыс Вес крыс при покупке (г)
Контроль
1 259
2
4 264
5 282
Пропиленгликоль
1 255
2
2 261
5 272
Пропиленгликоль и упражнение
1 262
2 276 2 276
5 278
6 263 902 75
7 260
8 277
Стероидная группа
1 280
2 2902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 4 272
5 277
6 272
7 263
8 902 902 275
2 277
3 290
4 263
5 280
280
8 273

Таблица II

Experi мысленный дизайн исследования.

мл / кг пропиленгликоля в день
Группы Количество крыс Подкожные инъекции Упражнение
Контроль 5 Без инъекций Без упражнений
Без упражнений
Лечение станозололом 8 5 мг / кг станозолола в день Без упражнений
Лечение пропиленгликолем и упражнения 8 1 8 8 90 мл кг пропиленгликоля в день Плавание: 20 мин / день, 5 дней в неделю
Лечение станозололом и упражнения 8 5 мг / кг станозолола в день Плавание: 20 мин / день, 5 дней / неделя

Плавание было выбрано в качестве модели упражнений (26, 27) и началось за 1 неделю до схемы лечения, чтобы мальчики адаптироваться.Крыс плавали в прямоугольном полиэтиленовом резервуаре (длина 120 см × глубина 50 см × ширина 43 см), наполненном водой при температуре 29 ± 1 ° C. Во время экспериментов в течение 20 минут в день, 5 дней в неделю крыс подвергали плаванию после периода адаптации в течение 1 недели. Животных адаптировали к процессу плаванием в воде в течение 5 минут в течение первых 2 дней, а затем время плавания постепенно увеличивали до 5 минут в день до конечной продолжительности 20 минут на 5 день.

Пропиленгликоль (PG ) (Tekkim, Стамбул, Турция) использовался в качестве носителя для станозолола (Sigma, Schnelldorf, Германия).Известно, что PG является хорошим проводником для экспериментальных исследований in vivo (28,29). Однако сообщалось, что высокие концентрации PG могут вызывать повреждение ДНК в эукариотических клетках и ооцитах мышей (30,31). Подкожное введение было выбрано, а дозы были выбраны в соответствии с предыдущими исследованиями (32–34). Группы, подвергшиеся воздействию, получали однократную дозу PG (1 мл / кг) и ST (5 мл / кг) подкожно в течение 5 дней в неделю.

После 28 дней лечения животным была проведена легкая анестезия с использованием процента 1.9% диэтиловый эфир в анестезиологической камере и эвтаназия путем шейного вывиха, проводимая обученным персоналом. Были собраны образцы ткани печени и разделены на 2 секции. Один срез немедленно замораживали в жидком азоте и хранили при -80 ° C, а другой фиксировали 10% забуференным формалином и залитым парафином для гистохимического анализа.

Анализ жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии (ЖХ-МС)

Стандарты станозолола, 3′-гидроксистанозолола и 16-β-гидроксистанозолола в концентрациях 0,0.1, 0,25, 0,5 и 1 частей на миллион были приготовлены из стандартных исходных растворов с концентрацией 20 частей на миллион. Туринабол (LGC, Лидс, Великобритания) использовали в качестве внутреннего стандарта (IS) с целевыми ионами m / z 317,25 и m / z 335,25. Калибровочные кривые были получены путем измерения отношения площадей пиков целевых ионов к IS следующим образом: для станозолола m / z 370,4 , 352,3 и 329,35, для 3′-гидроксистанозолола m / z 386,4 , 345,35, для 16-β- гидроксистанозолол m / z 386,4 , 366,3 и 345,35 для IS туринабол () (ион m / z, используемый для количественной оценки, выделен жирным шрифтом).Образцы печени необработанных животных, которые дали отрицательные результаты (

Таблица III

Параметры анализа ЖХ-МС.

Агент Rt m / z target m / z m / z Mw
4α-гидроксистанозолол 9 9 902.4 345,35
4β-hydroxystanozolol 9,3 386,4 345,35
3-hydroxystanozolol 10,15 386,4 345,35 344,49
16-β-гидроксистанозолол 10,45 386,4 366,3 345,35 344,49
Станозолол 12.95 370,4 352,3 329,35 328,49
Туринабол (IS) 13,9 317,25 335,25 33470 каждый образец печени 0,1% механическая гомогенизация на высокой скорости в течение 2 мин с 1,0 мл воды. Гомогенаты сильно встряхивали и затем инкубировали в ультразвуковой бане в течение 10 мин. Затем добавляли 1,5 мл этилацетата и проводили экстракцию аналитов в течение 10 мин.Образцы центрифугировали при 1820 × g в течение 2 мин при 4 ° C. Супернатанты переносили в пустую пробирку и упаривали досуха в атмосфере азота при 30 ° C. После выпаривания добавляли 100 мкл л ацетонитрила и сильно встряхивали. Супернатанты переносили во флаконы, и 10 мкл мкл из них вводили в систему ЖХ-МС для анализа.

Система ЖХ-МС состоит из бинарного насоса ЖХ (Shimadzu Prominence, Киото, Япония), вакуумного дегазатора, автоматического пробоотборника и термостата для колонок.В качестве подвижной фазы был выбран градиент 0,1% муравьиной кислоты в воде (растворитель A) и ацетонитриле (растворитель B). Разделение аналитов было достигнуто на колонке для ВЭЖХ Discovery C18 (250 × 4,6 мм, 5 мкм, м), термостатированной при 30 ° C. Масс-спектрометр (LCMS-2010 EV; Shimadzu Prominence) в сочетании с интерфейсом химической ионизации при атмосферном давлении (APCI) и одиночным квадрупольным масс-фильтром использовался в выбранном положительном режиме ионного мониторинга (SIM). Температура интерфейса, CDL и теплового блока составляла 400, 200 и 200 ° C соответственно.Напряжение детектора составляло 1,5 кВ, поток распыляющего газа составлял 2,5 л / мин, а осушающий газ составлял 0,02 МПа.

Анализ активности теломеразы

Определение активности теломеразы в образцах ткани печени крысы выполняли количественно с использованием набора teloTAGGG telomerase PCR ELISA PLUS (Roche Diagnostic GmbH, Mannheim, Germany). Протокол набора следовал для оценки активности теломеразы, как описано ранее (35,36).

Оценка экспрессии гена

Выделение

РНК проводили из залитых парафином срезов ткани печени крысы с использованием выделения РНК High Pure FFPET (Roche Diagnostic GmbH) в соответствии с инструкциями производителя.Для синтеза кДНК использовали фиксированное количество РНК из каждого образца. кДНК получали с использованием набора Transcriptor First Strand cDNA Synthesis (Roche Diagnostic GmbH) в соответствии с инструкциями производителя. Уровни экспрессии генов TERT и PTEN анализировали с помощью количественной (в реальном времени) полимеразной цепной реакции (кПЦР) с использованием аппарата Light Cycler 480 (Roche Diagnostic GmbH) с анализом каталога Real Time Ready (Roche Diagnostic GmbH) в соответствии с инструкциями производителя. Последовательности праймеров были следующими: PTEN прямой, 5′-AGAACAAGATGCTCAAAAAGGACAA-3 ‘и обратный, 5′-TGTCAGGGTGAGCACAAGAT-3′; TERT вперед, 5’-GACATGGAGAACAAGCTGTTTGC-3 ‘; и обратный, 5’-ACAGGGAAGTTCACCACTGTC-3 ‘; и GAPDH прямой, 5’-TTCAACGGCACAGTCAAGG-3 ‘и обратный, 5′-CTCAGCACCAGCATCACC-3’.ПЦР-амплификации выполняли в соответствии с инструкциями производителя в трех экземплярах. Реакционную смесь без матрицы кДНК использовали в качестве отрицательного контроля. Уровни экспрессии (2 -ΔΔCt ) рассчитывали, как описано ранее (37,38).

Иммуногистохимический (ИГХ) анализ

ИГХ-анализы были выполнены с использованием наборов для определения Ultra Streptavidin HRP [BioLegend Sig-32248, набор для определения Ultra Streptavidin HRP (Multi-Specation, DAB)] и BioLegend Sig-32250, набор для обнаружения Ultra Streptavidin (Multi-views, AEC) (BioLegend, San Diego, CA, USA) для уровней экспрессии PTEN и TERT соответственно.Залитые парафином срезы помещали на предметные стекла Superfrost (Menzel-Gläser, Брауншвейг, Германия). После сушки в течение ночи был проведен ИГХ-анализ PTEN и TERT с использованием метода меченой стрептавидин-биотин-пероксидазы. Предметные стекла обрабатывали ксилолом и регидратировали в растворах этанола возрастающих классов. Извлечение антигена осуществляли путем кипячения предметных стекол в течение 5 мин / 3 раза в цитратном буфере (0,01 М). Для подавления активности эндогенной пероксидазы срезы ткани обрабатывали блокирующим реагентом 1 в течение 15 минут и промывали PBS.Все срезы инкубировали с блокирующим реагентом 2 в течение 5 минут при комнатной температуре, чтобы избежать неспецифического связывания. Инкубации поликлональных антител PTEN (251264) и TERT (250509) (оба от Abbiotec, Aachen, Germany) проводили в течение ночи при 4 ° C с разведениями 1/100. Слайды инкубировали со связывающим реагентом 4, а затем с реагентом для маркировки 5 в течение 20 минут при комнатной температуре. Слайды визуализировали хромогенами DAB и AEC, контрастировали гематоксилином Майера и, наконец, монтировали.Уровни экспрессии PTEN и TERT оценивали под световым микроскопом (Olympus BX40F4; Olympus, Токио, Япония). Анализы TERT и PTEN IHC были классифицированы невооруженным глазом на 4 категории на основе интенсивности окрашивания следующим образом: 0, нет окрашивания; +, слабое окрашивание; ++, умеренное окрашивание; и +++, сильное окрашивание). Анализ проводился с использованием считывающего устройства для одного слайда для минимизации вариабельности из-за субъективной оценки.

Статистический анализ

Средние значения ± стандартное отклонение и медиана были использованы для экспрессии уровней станозолола и его метаболитов, а также для PTEN, TERT и относительной теломеразной активности в процентах.Изменения между двумя значениями были выражены в виде относительных изменений в процентах или иным образом на основе следующей формулы: (фактическое изменение / контрольное значение) * 100%.

Тест Колмогорова-Смирнова с поправкой Лилиэфорса применялся для проверки нормальности непрерывных переменных. R Спирмена применяли для измерения двумерных корреляций между двумя непрерывными переменными (например, относительная активность теломеразы в процентах по сравнению с уровнями экспрессии гена 3′-гидроксистанозолола TERT). Непараметрический тест Краскела-Уоллиса и параметрический односторонний дисперсионный анализ ANOVA применялись для сравнения различий в уровнях станозолола и его метаболитов между исследуемыми группами (контрольная, станозолол, PG и группы упражнений).Непараметрические апостериорные сравнения оценивали с использованием тестов Данна (непараметрические) и HSD Тьюки для параметрических тестов. Для статистического анализа использовалось программное обеспечение IBM SPSS Statistics 21.0 (IBM Corp., Армонк, Нью-Йорк, США). Уровень 0,05 был установлен для принятия или отклонения нулевой гипотезы (статистическая значимость). Размеры выборок для отдельных анализов незначительно различались из-за того, что некоторые недостающие значения возникли из-за условий эксперимента.

Результаты

Тесты на нормальность

Тесты на нормальность показали, что только процентная относительная активность теломеразы сохранила нулевую гипотезу, предполагая нормальное распределение данных (P = 0.137). Все другие протестированные непрерывные переменные, такие как TERT, PTEN и 3′-гидроксистанозолол, не следовали нормальному распределению (P <0,01) (данные не показаны).

Биоаккумуляция станозолола и его метаболитов в тканях печени

Результаты обобщены в. Уровни станозолола и его метаболитов были незначительно выше в группе STE по сравнению с группой ST (P> 0,05).

Таблица IV

Уровни концентрации (нг / мг) станозолола и его метаболитов в группах станозолола (ST) и станозолола в сочетании с упражнениями (STE).

Относительное изменение 0,480
Агент Группа ST (средние значения ± стандартное отклонение) Группа ST (среднее ± стандартное отклонение) Манна-Уитни (значение P) %
Станозолол (нг / мг) ) 2,98 ± 1,01 3,89 ± 1,09 0,240 30,5
3′-гидроксистанозолол (нг / мг) 0,34 ± 0,06 0,44 ± 0,18 0,44 ± 0,18 0,480 0,480 16-β-гидроксистанозолол (нг / мг) 0.25 ± 0,11 0,32 ± 0,15 0,485 28,0

Оценка теломеразной активности и экспрессии генов

Уровни экспрессии генов PTEN и TERT и процент относительной теломеразной активности в исследуемых группах представлены в. Значительная разница наблюдалась для экспрессии гена TERT в различных группах (χ 2 = 17,585, df = 4, P <0,001). Основываясь на тесте Данна, упражнения снижали экспрессию TERT на (71,0%; P = 0,001), а введение ST увеличивало экспрессию TERT на (160%; P <0.001) по сравнению с группой PG. Следует отметить, что вызванное станозололом увеличение экспрессии TERT по сравнению с группой станозолола было ограничено (68,0%; P = 0,042) у животных, подвергшихся физической нагрузке. Аналогичная картина наблюдалась и для процентной активности теломеразы. На экспрессию гена PTEN практически не влияли ни упражнения, ни прием станозолола. Следует отметить, что не все значения, представленные выше, показаны в из-за большого количества попарных сравнений.

Таблица V

Уровни экспрессии генов PTEN и TERT (2 -ΔΔCt ) и% относительной активности теломеразы на группу.

Контроль 902 0,83 лечение пропиленгликоль 6
Параметры Группы N Среднее SD Сравнение групп
Экспрессия гена PTEN (2 −ΔΔCt2 ) Kruskal-Wallis
Обработка пропиленгликолем 5 0,37 0,25 χ 2 = 3,643,
Обработка станозололом 640 0,42 df = 4, P = 0,456
Лечение пропиленгликолем и упражнения 5 0,98 1,62
Станозолол 1,13
Экспрессия гена TERT (2 −ΔΔCt ) Контроль 5 0,40 0,41 Kruskal-Wallis
Обработка пропиленгликолем 2 5 78 2,66 χ 2 = 17,585,
Лечение станозололом 6 7,25 1,40 df = 4, P = 0,001
и пропиленгликоль 0,81 0,96
Лечение станозололом и физические упражнения 6 2,29 0,97
% относительная активность теломеразы 1 1 Контроль.30 0,58 ANOVA:
Обработка пропиленгликолем 5 1,92 0,96 F = 3,015, df = 4,
Обработка станозололом P = 0,040
Лечение пропиленгликолем и упражнения 5 0,76 0,61
Лечение станозололом и упражнения 6 1.33 0,96

Умеренная корреляция между относительной процентной активностью теломеразы и уровнями экспрессии гена TERT наблюдалась с использованием коэффициента корреляции Спирмена (r = 0,424, P = 0,028) (). Уровни 3′-гидроксистанозолола, измеренные в группах ST и STE, имели тенденцию отрицательно коррелировать с относительной процентной активностью теломеразы (r Спирмена r = -0,566, P = 0,055) (). Не наблюдали корреляции между любыми параметрами, контролируемыми с помощью станозолола и 16-β-гидроксистанозолола (данные не показаны).

Диаграмма разброса экспрессии гена TERT и относительной активности теломеразы в процентах. TERT, обратная транскриптаза теломеразы.

Диаграмма рассеяния 3′-гидроксистанозолола и относительная активность теломеразы в процентах.

Анализы ИГХ

Изображения окрашивания ИГХ показаны в, а результаты суммированы в. Уровни экспрессии гена PTEN наблюдались вокруг центральной вены и паренхимы. В группе STE окрашивание гепатоцитов, окружающих эти области, было умеренным.Анализ TERT IHC выявил сильное окрашивание в группе ST вокруг портального поля, центральной вены и паренхимы, в то время как упражнения ослабляли увеличение экспрессии гена TERT (умеренное окрашивание в группе STE). Таким образом, наши результаты показали, что упражнения оказывают положительное влияние на экспрессию гена PTEN, как показано на рис.

Иммуногистохимическое окрашивание белков PTEN и TERT во всех экспериментальных группах (шкала, 50 мкм мкм). Группы крыс были следующими: i) контрольная (C) группа; ii) группу обработки пропилена (PG); iii) группу обработки станозололом (ST); iv) группа лечения и упражнений с пропиленом (PGE); и v) группа лечения станозололом и физических упражнений (STE).PTEN, белок-гомолог фосфатазы и тензина, TERT, обратная транскриптаза теломеразы.

Таблица VI

Результаты подсчета для иммуногистохимических анализов PTEN и TERT.

Обсуждение

Станозолол — широко используемый и наиболее мощный ААС, ответственный за ряд побочных эффектов, включая сердечно-сосудистые, репродуктивные, поведенческие эффекты и гепатотоксичность (17).Насколько нам известно, это первое исследование, посвященное изучению вызванных станозололом молекулярных путей активности теломеразы в печени крыс и любых соответствующих эффектов физических упражнений. Станозолол вызывает внутрипеченочные структурные изменения с холестазом и увеличивает риск ГЦК (37). Кроме того, было обнаружено, что злоупотребление ААС в целом является причиной гепатоцеллюлярных аденом (12,39). Несмотря на то, что механизмы, ответственные за гепатотоксичность, вызванную станозололом, еще четко не идентифицированы, пролиферативные эффекты на клетки печени могут играть центральную роль в наблюдаемой гепатотоксичности (12,40,41).В нашем предыдущем исследовании мы продемонстрировали, что станозолол оказывает повреждающее действие на ДНК в лимфоцитах периферической крови, что, вероятно, связано с изменениями активности теломеразы (35). Хотя известно, что различные факторы окружающей среды повышают и понижают активность теломеразы, влияние физических упражнений на активность теломеразы еще не было четко идентифицировано (42). Было показано, что на длину теломер и активность теломеразы влияет несколько факторов, включая оксидативный стресс, психологический стресс и социально-экономический статус.Одним из возможных механизмов укорочения теломер является окислительный стресс из-за продуктов окисления оснований ДНК (8-OHdG) в гуаниновых или белковых аддуктах (43,44). Согласно недавним исследованиям, повышенная активность теломеразы обнаруживается почти в 90% случаев рака человека и в 80% случаев ГЦК. Кроме того, хорошо задокументировано, что большинство здоровых клеток не обладают теломеразной активностью (19,20,45). Результаты этого исследования продемонстрировали повышенные уровни относительной активности теломеразы в тканях печени в группе ST, в соответствии с нандролоном, другим хорошо известным ASS, который продемонстрировал аналогичные эффекты за счет увеличения активности теломеразы в зависимости от дозы как при ткань сердца и моноциты периферической крови (2,46).Это может представлять собой компенсирующий механизм восстановления на тканевом уровне, в то время как повышенные уровни циркулирующей активности теломеразы могут указывать на системное воспаление. Связь повышенной активности и экспрессии теломеразы с пролиферативными эффектами в этом исследовании вряд ли возникла из-за короткого времени воздействия (28 дней). В целом механизмы, лежащие в основе влияния ААС на активность теломеразы, не выяснены и остаются практически неизвестными.

TERT представляет собой каталитическую субъединицу теломеразы, которая играет роль в ее регуляции на уровне транскрипции.Сообщалось, что мутации TERT связаны с переходом от аденомы к карциноме в печени (47). Следовательно, изменения в регуляции и экспрессии TERT играют важную роль при ГЦК (48). Было показано, что ген-супрессор опухолей PTEN отрицательно коррелирует с белком TERT человека в тканях HCC (21). Следовательно, PTEN и TERT играют противоположные роли в канцерогенезе. Сообщалось, что PTEN косвенно регулирует активность TERT через путь PI3K-PKB / Akt при ГЦК человека (21).Согласно результатам настоящего исследования, не наблюдалось значительных изменений в уровнях экспрессии PTEN между группами. Однако экспрессия гена TERT была значительно увеличена при лечении ST. Упражнения обращали вспять увеличение экспрессии TERT, вызванное станозололом, особенно в паренхиме, где сообщается о метаболической зональности: высвобождение глюкозы из гликогена и посредством глюконеогенеза, утилизация аминокислот и детоксикация аммиака, защитный метаболизм, образование желчи и синтез определенных белков плазмы, такие как альбумин и фибриноген, происходят в основном в перивенальной зоне, тогда как утилизация глюкозы, метаболизм ксенобиотиков и образование других белков плазмы, таких как альфа-1-антитрипсин или альфа-фетопротеин, происходят преимущественно в перивенальной зоне (49,50).

В этом исследовании уровни 3′-гидроксистанозолола и 16-β-гидроксистанозолола, основных метаболитов станозолола, были определены в образцах ткани печени животных, получавших станозолол, и была определена доза-реакция между активностью теломеразы и TERT / PTEN. экспрессия генов была определена. Измеренные уровни 3′-гидроксистанозолола в группах ST и STE были связаны с процентной относительной теломеразной активностью, тогда как для уровней станозолола или 16-β-гидроксистанозолола никакой связи не наблюдалось.Это может быть связано с тем, что 3′-гидроксистанозолол является наиболее мощным метаболитом станозолола (2,51).

Несколько исследований показали, что физические упражнения увеличивают активность теломеразы в различных типах клеток (52,53). Однако, насколько нам известно, на сегодняшний день нет доступных исследований, изучающих влияние станозолола на активность теломеразы в присутствии / отсутствии упражнений, за исключением нашего предыдущего исследования, которое было сосредоточено на циркуляции активности теломеразы в мононуклеарных клетках периферической крови (PBMCs). ) (35).Наши результаты показали повышение активности теломеразы и экспрессии TERT в ткани печени, что может быть связано либо с повышенным риском пролиферации из-за лечения станозололом (10), что маловероятно для такого короткого периода воздействия, либо может представлять собой механизм противодействия ( 54). Упражнения обращают вспять вызванное станозололом повышение активности теломеразы. Ряд исследований подтвердил, что упражнения обладают гепатопротекторным действием. Huang и др. продемонстрировали, что 12-недельная программа упражнений по плаванию подавляла маркеры старения и подавляла регуляцию воспалительных медиаторов в тканях печени у крыс, вызванных D-галактозой (55).Yi и др. продемонстрировали, что как острые, так и хронические упражнения оказывают профилактическое действие на печень крыс с диабетом 2 типа (56). С другой стороны, сообщалось, что физические упражнения увеличивают количество печеночных ферментов у людей (57), и существуют опасения относительно влияния физических упражнений на портальную гипертензию у пациентов с циррозом печени (58).

В заключение, станозолол индуцирует активность теломеразы на молекулярном уровне, и упражнения обращают эту индукцию вспять, по крайней мере, в отношении экспрессии TERT.Это может отражать преждевременное старение тканей из-за снижения активности теломеразы. Необходимы будущие исследования, чтобы изучить механизмы, с помощью которых упражнения могут быть использованы для предотвращения неблагоприятного воздействия станазолола на здоровье, и для выяснения молекулярных гепатоцеллюлярных механизмов побочных эффектов, вызванных станозололом.

Благодарности

Авторы хотели бы поблагодарить доктора Алегакиса Афанасиоса за его ценную помощь в статистических советах и ​​комментариях.

Сокращения

Группы Оценка PTEN IHC a Оценка TERT IHC a
Control + +
0
Лечение станозололом + +++
Лечение пропиленгликолем и упражнения + +
Лечение станозололом и упражнения ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++
Агентство HCC

моноклональная кровь

AAS анаболический андрогенный стероид
TERT теломераза обратная транскриптаза
TERC 902
TERC теломераза 902 WRNA компонент теломераза RNA
гепатоцеллюлярная карцинома
PG пропиленгликоль
IS внутренний стандарт
APCI химическая ионизация при атмосферном давлении Финансирование

Это исследование было поддержано Научно-исследовательскими проектами Стамбульского университета (грант №54169-24416).

Доступность данных и материалов

Наборы данных, использованные и / или проанализированные в ходе текущего исследования, доступны у соответствующего автора по обоснованному запросу.

Вклад авторов

EO, MK, AMT, BA и DAS задумали и разработали исследование, написали рукопись и внесли ценные предложения при подготовке рукописи. MK, TK, PF и MNT выполнили LC-MS анализ, оценку активности теломеразы и экспрессии генов; CT, PDS и DT выполнили статистический анализ и интерпретацию данных.EO, MK и BA внесли свой вклад в заявку на финансирование. Все авторы читали и одобрили окончательный вариант рукописи.

Одобрение этики и согласие на участие

Эксперименты на животных были одобрены Комитетом по этике экспериментов на животных Стамбульского университета, HADYEK (номер разрешения 2013/100).

Согласие на публикацию

Не применимо.

Конкурирующие интересы

DAS является главным редактором журнала, но не принимал личного участия в процессе рецензирования или какого-либо влияния с точки зрения вынесения окончательного решения по этой статье.

Ссылки

1. Balcells G, Matabosch X, Ventura R. Обнаружение метаболитов O- и N-сульфата станозолола и их оценка в качестве дополнительных маркеров при допинг-контроле. Анальный тест на наркотики. 2017; 9: 1001–1010. DOI: 10.1002 / dta.2107. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 2. Цицимпико Ц., Василаки Ф., Царухас К., Фрагкиадаки П., Царди М., Гутзурелас Н., Непка Ц., Калогераки А., Херетис I, Эпитропаки З. и др. Нефротоксичность у кроликов после длительного приема нандролона деканоата. Toxicol Lett.2016; 259: 21–27. DOI: 10.1016 / j.toxlet.2016.06.1122. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 3. Всемирное антидопинговое агентство Список запрещенных веществ и методов за 2017 год. https://www.wada-ama.org/. Проверено 14 февраля 2018 г. 4. Kioukia-Fougia N, Georgiadis N, Tsarouhas K, Vasilaki F, Fragiadaki P, Meimeti E, Tsitsimpikou C. Синтетические и натуральные пищевые добавки: «союзники» здоровья или риски для общественного здоровья. Недавние открытия Pat Inflamm Allergy Drug. 2017; 10: 72–85. DOI: 10,2174 / 1872213X106661603700.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 5. Цицимпику С., Хрисостому Н., Папалексис П., Царухас К., Цацакис А., Джамуртас А. Использование пищевых добавок спортсменами-любителями в Афинах, Греция. Int J Sport Nutr Exerc Exerc Metab. 2011; 21: 377–384. DOI: 10.1123 / ijsnem.21.5.377. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 6. Саго Д., Мольде Х., Андреассен С.С., Торсхайм Т., Паллесен С. Глобальная эпидемиология использования анаболических андрогенных стероидов: метаанализ и мета-регрессионный анализ. Ann Epidemiol. 2014; 24: 383–398.DOI: 10.1016 / j.annepidem.2014.01.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 7. Ампуэро Дж., Гарсия Э.С., Лоренцо М.М., Калле Р, Ферреро П., Гомес МР. Вызванный станозололом мягкий холестаз. Гастроэнтерол Гепатол. 2014; 37: 71–72. DOI: 10.1016 / j.gastrohep.2013.09.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 8. Баусерман Л.Л., Сарителли А.Л., Герберт П.Н. Влияние кратковременного приема станозолола на липопротеины сыворотки крови при печеночной липазной недостаточности. Обмен веществ. 1997; 46: 992–996. DOI: 10.1016 / S0026-0495 (97) -5. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 9.Эль-Сераг HB, Крамер Дж., Дуан З., Канвал Ф. Расовые различия в прогрессировании цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы у ветеранов, инфицированных ВГС. Am J Gastroenterol. 2014; 109: 1427–1435. DOI: 10.1038 / ajg.2014.214. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 10. Hansma P, Diaz FJ, Njiwaji C. Смертельный разрыв кисты печени из-за использования анаболических стероидов: презентация случая. Am J Forensic Med Pathol. 2016; 37: 21–22. DOI: 10.1097 / PAF.0000000000000218. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 11. Харкин К.Р., Коуэн Л.А., Эндрюс Г.А., Басараба Р.Дж., Фишер Дж.Р., Дебоуз Л.Дж., Руш Дж.К., Гульельмино М.Л., Кирк, Калифорния.Гепатотоксичность станозолола у кошек. J Am Vet Med Assoc. 2000. 217: 681–684. DOI: 10.2460 / javma.2000.217.681. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 12. Сокас Л., Зумбадо М., Перес-Лусардо О., Рамос А., Перес С., Эрнандес Дж. Р., Боада Л. Д.. Гепатоцеллюлярные аденомы, связанные со злоупотреблением анаболическими андрогенными стероидами у бодибилдеров: отчет о двух случаях и обзор литературы. Br J Sports Med. 2005; 39: e27. DOI: 10.1136 / bjsm.2004.013599. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 13. Стимак Д., Милич С., Динтиньяна Р.Д., Ковач Д., Ристич С.Андрогенный / анаболический стероид-индуцированный токсический гепатит. J Clin Gastroenterol. 2002. 35: 350–352. DOI: 10.1097 / 00004836-200210000-00013. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 14. Дешмук Н.И., Захар Г., Петроци А., Секели А.Д., Баркер Дж., Нотон Д.П. Определение станозолола и 3′-гидроксистанозолола в шерсти, моче и сыворотке крыс с использованием тандемной масс-спектрометрии с жидкостной хроматографией. Chem Cent J. 2012; 6: 162. DOI: 10.1186 / 1752-153X-6-162. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 15. Mateus-Avois L, Mangin P, Saugy M.Использование ионной газовой хроматографии-множественной масс-спектрометрии для обнаружения и подтверждения следовых уровней 3′-гидроксистанозолола в моче для допинг-контроля. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2005; 816: 193–201. DOI: 10.1016 / j.jchromb.2004.11.033. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 17. Бюттнер А., Тим Д. Побочные эффекты анаболических андрогенных стероидов: патологические данные и взаимосвязь между структурой и активностью. Handb Exp Pharmacol. 2010; 195: 459–484. DOI: 10.1007 / 978-3-540-79088-4_19.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 18. Рентукас Э., Царухас К., Капланис I, Короу Э, Николау М., Марафонитис G, Коккиноу С., Халиассос А., Мамалаки А., Куретас Д. и др. Связь активности теломеразы в МКПК с маркерами воспаления и эндотелиальной дисфункции у пациентов с метаболическим синдромом. PLoS One. 2012; 7: e35739. DOI: 10.1371 / journal.pone.0035739. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 21. Zhou X, Zhu H, Lu J. Экспрессия генов PTEN и hTERT и корреляция с гепатоцеллюлярной карциномой человека.Pathol Res Pract. 2015; 211: 316–319. DOI: 10.1016 / j.prp.2014.11.016. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 23. Ян Ц., Ли С., Ван М., Чанг А.К., Лю И, Чжао Ф., Сяо Л., Хань Л., Ван Д., Ли С., Ву Х. PTEN подавляет онкогенную функцию AIB1 за счет снижения стабильности его белка с помощью механизма, включающего Fbw7 альфа. . Молочный рак. 2013; 12:21. DOI: 10.1186 / 1476-4598-12-21. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 24. Jung S, Li C, Jeong D, Lee S, Ohk J, Park M, Han S, Duan J, Kim C, Yang Y и др.Онкогенная функция p34SEI-1 через NEDD4 1 опосредована убиквитинизацией / деградацией PTEN и активацией пути PI3K / AKT. Int J Oncol. 2013; 43: 1587–1595. DOI: 10.3892 / ijo.2013.2064. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 25. ОЭСР. Руководящий документ по распознаванию, оценке и использованию клинических признаков в качестве гуманных конечных точек для экспериментальных животных, используемых при оценке безопасности. ОЭСР; Париж: 2000. [Google Scholar] 26. Черичи Камарго IC, Баррейрос де Соуза Р., Фатима Паккола Мескита С., Чуффа Л.Г., Фрей Ф.Гистология яичников и оценка фолликулов у самок крыс, получавших деканоат нандролона и подвергавшихся физическим нагрузкам. Acta Biol Hung. 2009. 60: 253–261. DOI: 10.1556 / ABiol.60.2009.3.2. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 27. de Almeida Chuffa LG, de Souza RB, Frei F, de Fátima Paccola Mesquita S, Camargo IC. Деканоат нандролона и физическое усилие: гистологическая и морфометрическая оценка в матке взрослой крысы. Анат Рек (Хобокен) 2011; 294: 335–341. DOI: 10.1002 / ar.21314. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 28.Gopinathan S, O’Neill E, Rodriguez LA, Champ R, Phillips M, Nouraldeen A, Wendt M, Wilson AGE, Kramer JA. Токсикология наполнителей in vivo, обычно используемых при открытии лекарств на крысах. J Pharmacol Toxicol Methods. 2013; 68: 284–295. DOI: 10.1016 / j.vascn.2013.02.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 29. Healing G, Sulemann T, Cotton P, Harris J, Hargreaves A, Finney R, Kirk S, Schramm C, Garner C, Pivette P, Burdett L.Данные о безопасности 19 транспортных средств для использования в доклинических исследованиях на грызунах в течение 1 месяца: Введение гидроксипропил-β-циклодекстрина вызывает почечную токсичность.J Appl Toxicol. 2016; 36: 140–150. DOI: 10.1002 / jat.3155. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 30. Aye M, Di Giorgio C, De Mo M, Botta A, Perrin J, Courbiere B. Оценка генотоксичности трех криопротекторов, используемых для витрификации человеческих ооцитов: диметилсульфоксида, этиленгликоля и пропиленгликоля. Food Chem Toxicol. 2010; 48: 1905–1912. DOI: 10.1016 / j.fct.2010.04.032. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 31. Бертло-Рику А., Перрин Дж., Ди Джорджио С., де Мео М., Ботта А., Курбьер Б. Оценка генотоксичности 1,2-пропандиола (PrOH) на ооциты мышей с помощью анализа комет.Fertil Steril. 2011; 96: 1002–1007. DOI: 10.1016 / j.fertnstert.2011.07.1106. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 32. Каннингем Р.Л., Макгиннис М.Ю. Физическая провокация самцов крыс, подвергшихся воздействию пубертатных анаболических андрогенных стероидов, вызывает агрессию по отношению к самкам. Horm Behav. 2006; 50: 410–416. DOI: 10.1016 / j.yhbeh.2006.05.002. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 33. Matrisciano F, Modafferi AM, Togna GI, Barone Y, Pinna G, Nicoletti F, Scaccianoce S. Повторное лечение анаболическими андрогенными стероидами вызывает обратимые антидепрессантами изменения гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой оси, уровней BDNF и поведения.Нейрофармакология. 2010. 58: 1078–1084. DOI: 10.1016 / j.neuropharm.2010.01.015. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 34. Tucci P, Morgese MG, Colaianna M, Zotti M, Schiavone S, Cuomo V, Trabace L. Нейрохимические последствия злоупотребления стероидами: моноаминергические изменения, вызванные станозололом. Стероиды. 2012; 77: 269–275. DOI: 10.1016 / j.steroids.2011.12.014. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 35. Кара М., Озкагли Е., Фрагкиадаки П., Котил Т., Стивактакис П. Д., Спандидос Д. А., Цацакис А. М., Альпертунга Б. Определение повреждения ДНК и активности теломеразы у крыс, получавших станозолол.Exp Ther Med. 2017; 13: 614–618. DOI: 10.3892 / etm.2016.3974. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 36. Цицимпико Ц., Цацаракис М., Фрагкиадаки П., Коваци Л., Стивактакис П., Калогераки А., Куретас Д., Цацакис А. М.. Гистопатологические поражения, окислительный стресс и генотоксические эффекты в печени и почках после длительного воздействия диазинона и пропоксура на кроликов. Токсикология. 2013; 307: 109–114. DOI: 10.1016 / j.tox.2012.11.002. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 37. Сольбах П., Поттхофф А., Раатшен Х.Дж., Суда Б., Леманн Ю., Шнайдер А., Гебель М.Дж., Маннс М.П., ​​Фогель А.Гепатоцеллюлярная карцинома с положительным тестостерон-рецептором у 29-летнего бодибилдера с историей злоупотребления анаболическими андрогенными стероидами: отчет о болезни. BMC Gastroenterol. 2015; 15:60. DOI: 10.1186 / s12876-015-0288-0. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 38. Ливак К.Дж., Шмитген Т.Д. Анализ данных относительной экспрессии генов с использованием количественной ПЦР в реальном времени и метода 2 (-4Delta Delta C (T)). Методы. 2001; 25: 402–408. DOI: 10.1006 / meth.2001.1262. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 39.Кеслер Т., Сандху Р.С., Кришнамурти С. Гепатология: гепатоцеллюлярная карцинома у молодого человека, вторичная по отношению к злоупотреблению андрогенными анаболическими стероидами. J Gastroenterol Hepatol. 2014; 29: 1852. DOI: 10.1111 / jgh.12809. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 40. Боада Л. Д., Зумбадо М., Торрес С., Лопес А., Диас-Чико Б. Н., Кабрера Дж. Дж., Лусардо ОП. Оценка острых и хронических гепатотоксических эффектов анаболического андрогенного стероида станозолола у взрослых самцов крыс. Arch Toxicol. 1999. 73: 465–472. DOI: 10.1007 / s002040050636.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 41. Канаяма Дж., Хадсон Дж. И., Поуп Х. Дж., Младший. Долгосрочные психиатрические и медицинские последствия злоупотребления анаболическими андрогенными стероидами: надвигающаяся проблема общественного здравоохранения? Зависимость от наркотиков и алкоголя. 2008; 98: 1–12. DOI: 10.1016 / j.drugalcdep.2008.05.004. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 42. Орниш Д., Лин Дж., Чан Дж. М., Эпель Э, Кемп С., Вайднер Дж., Марлин Р., Френда С. Дж., Магбануа М. Дж. М., Даубенмьер Дж. И др. Влияние всесторонних изменений образа жизни на активность теломеразы и длину теломер у мужчин с подтвержденным биопсией раком простаты низкого риска: 5-летнее наблюдение за описательным пилотным исследованием.Ланцет Онкол. 2013; 14: 1112–1120. DOI: 10.1016 / S1470-2045 (13) 70366-8. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 43. Мишра С., Кумар Р., Малхотра Н., Сингх Н., Дада Р. Мягкий окислительный стресс полезен для поддержания длины теломер сперматозоидов. World J Methodol. 2016; 6: 163–170. DOI: 10.5662 / wjm.v6.i2.163. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 44. Зар Т., Грэбер С., Перацелла М.А. Распознавание, лечение и профилактика токсичности пропиленгликоля. Semin Dial. 2007. 20: 217–219. DOI: 10.1111 / j.1525-139X.2007.00280.x. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 45. Djojosubroto MW, Chin AC, Go N, Schaetzlein S, Manns MP, Gryaznov S, Harley CB, Rudolph KL. Антагонисты теломеразы GRN163 и GRN163L подавляют рост опухоли и повышают химиочувствительность гепатомы человека. Гепатология. 2005; 42: 1127–1136. DOI: 10.1002 / hep.20822. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 46. Василаки Ф., Цицимпико Ц., Цароухас К., Германакис I, Царди М., Каввалакис М., Озкагли Э., Куретас Д., Цацакис А. М.. Кардиотоксичность у кроликов после длительного приема нандролона деканоата.Toxicol Lett. 2016; 241: 143–151. DOI: 10.1016 / j.toxlet.2015.10.026. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 47. Пилати С., Летузе Э., Нолт Дж. К., Имбо С., Булай А., Кальдераро Дж., Пуссен К., Франкони А., Куши Дж., Моркретт Дж. И др. Геномное профилирование гепатоцеллюлярных аденом позволяет выявить повторяющиеся мутации, активирующие FRK, и механизмы злокачественной трансформации. Раковая клетка. 2014; 25: 428–441. DOI: 10.1016 / j.ccr.2014.03.005. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 49. Юнгерманн К., Кицманн Т. Зонирование паренхиматозного и непаренхиматозного метаболизма в печени.Анну Рев Нутр. 1996. 16: 179–203. DOI: 10.1146 / annurev.nu.16.070196.001143. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 50. Юнгерманн К. Метаболическое зонирование паренхимы печени. Semin Liver Dis. 1988. 8: 329–341. DOI: 10,1055 / с-2008-1040554. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 51. Сальвадор Дж. П., Санчес-Баеса Ф, Марко М. П.. Одновременное иммунохимическое определение станозолола и основного метаболита человека, 3′-гидроксистанозолола, в образцах мочи и сыворотки крови. Анальная биохимия. 2008; 376: 221–228. DOI: 10.1016 / j.ab.2008.02.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 52. Чилтон В.Л., Маркес Ф.З., Вест Дж., Канноуракис Дж., Берзиньш С.П., О’Брайен Б.Дж., Чарчар Ф.Дж. Острая физическая нагрузка приводит к регуляции генов, связанных с теломерами, и экспрессии микроРНК в иммунных клетках. PLoS One. 2014; 9: e
. DOI: 10.1371 / journal.pone.00. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 53. Ludlow AT, Gratidão L, Ludlow LW, Spangenburg EE, Roth SM. Острая физическая нагрузка активирует p38 MAPK и увеличивает экспрессию генов, защищающих теломеры, в сердечной мышце.Exp Physiol. 2017; 102: 397–410. DOI: 10.1113 / EP086189. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 54. Вардавас А.И., Стивактакис П.Д., Цацаракис М.Н., Фрагкиадаки П., Василаки Ф., Царди М., Дацери Г., Циаусис Дж., Алегакис А.К., Цицимпику С. и др. Длительное воздействие циперметрина и пиперонилбутоксида вызывает воспаление печени и почек и индуцирует генотоксичность у новозеландских белых кроликов-самцов. Food Chem Toxicol. 2016; 94: 250–259. DOI: 10.1016 / j.fct.2016.06.016. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 55.Хуан С.К., Чианг В.Д., Хуанг В.К., Хуанг С.Й., Сюй М.К., Лин В.Т. Гепатопротекторные эффекты упражнений по плаванию на крысиной модели индуцированного D-галактозой старения. Evid Based Complement Alternat Med. 2013; 2013: 275431. DOI: 10.1155 / 2013/275431. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 56. Yi X, Cao S, Chang B, Zhao D, Gao H, Wan Y, Shi J, Wei W., Guan Y. Влияние острых и хронических упражнений на сигнальный путь лептин-AMPK-ACC в печени у крыс с диабетом 2 типа . J Diabetes Res. 2013; 2013:

2.DOI: 10.1155 / 2013/

2. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 57. Петтерссон Дж., Хиндорф Ю., Перссон П., Бенгтссон Т., Мальмквист Ю., Веркстрём В., Экелунд М. Мышечные упражнения могут вызывать крайне патологические тесты функции печени у здоровых мужчин. Br J Clin Pharmacol. 2008. 65: 253–259. DOI: 10.1111 / j.1365-2125.2007.03001.x. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 58. Brustia R, Savier E, Scatton O. Физические упражнения у пациентов с циррозом: к реабилитации в листе ожидания трансплантации печени.Систематический обзор и метаанализ. Клин Рес Гепатол Гастроэнтерол. 2017 ноябрь 18; Epub впереди печати. [PubMed] [Google Scholar]

Прием станозолола в сочетании с упражнениями приводит к снижению активности теломеразы, возможно, связанному со старением печени

Int J Mol Med. 2018 июл; 42 (1): 405–413.

, # 1, * , # 1, * , 2 , 3 , 3 , 4 , 3 , 3 , 5 , 3 и 1

Эрен Озкагли

1 Кафедра фармацевтической токсикологии фармацевтического факультета

Мехтап Кара

1 Кафедра фармацевтической токсикологии фармацевтического факультета

и

Тугба Котил

2 Кафедра гистологии и эмбриологии медицинского факультета Стамбульского университета, Стамбул 34116, Турция

Персефони Фрагкиадаки

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион

Манолис Н.Цацаракис

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион

Кристина Цицимпику

4 Государственная химическая лаборатория Греции, 11521 Афины

Polychronis D. Stivaktakis

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион

Димитриос Цукалас

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион

Деметриос А.Спандидос

5 Лаборатория клинической вирусологии Медицинского факультета Критского университета, 71003 Ираклион, Греция

Аристидес М. Цацакис

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии Медицинского факультета Критского университета, 71003 Ираклион

Букет Альпертунга

1 Кафедра фармацевтической токсикологии фармацевтического факультета и

1 Кафедра фармацевтической токсикологии фармацевтического факультета и

2 Кафедра гистологии и эмбриологии медицинского факультета Стамбульского университета, Стамбул 34116, Турция

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион

4 Общая химическая государственная лаборатория Греции, 11521 Афины

5 Лаборатория клинической вирусологии Медицинского факультета Критского университета, 71003 Ираклион, Греция

# Внесен равный вклад.

Для корреспонденции: профессору Букету Альпертунга, кафедра фармацевтической токсикологии, фармацевтический факультет, Стамбульский университет, Беязит, Стамбул 34116, Турция, электронная почта: rt.ude.lubnatsi@agnutПрофессору Аристидесу М. Цацакису, Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинская школа, Университет Крита, ПО Box 1393, 71003 Heraklion, Greece, E-mail: [email protected]

* Внесено поровну

Получено 28 февраля 2018 г .; Принято 11 апреля 2018 г.

Эту статью цитировали в других статьях в PMC.
Заявление о доступности данных

Наборы данных, использованные и / или проанализированные в ходе текущего исследования, доступны у соответствующего автора по разумному запросу.

Реферат

Анаболические вещества — это допинговые вещества, которые обычно используются в спорте. Станозолол, 17α-алкилированное производное тестостерона, широко используется спортсменами и бодибилдерами. Некоторые медицинские и поведенческие побочные эффекты связаны со злоупотреблением анаболическими андрогенными стероидами (ААС), в то время как печень остается наиболее узнаваемым органом-мишенью.В настоящем исследовании изучалось влияние на печень введения станозолола крысам в высоких дозах, напоминающих дозы, применяемые для допинга, в присутствии или отсутствии физических упражнений. Станозолол и его метаболиты, 16-β-гидроксистанозолол и 3′-гидроксистанозолол, были обнаружены в печени крыс с помощью жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии (ЖХ-МС). Активность теломеразы, которая участвует в клеточном старении и онкогенезе, была обнаружена путем исследования уровней экспрессии обратной транскриптазы теломеразы (TERT) и фосфатазы и гомолога тензина (PTEN) в печени крыс, получавших станозолол.Станозолол индуцировал теломеразную активность на молекулярном уровне в ткани печени крыс, и упражнения обращали эту индукцию, отражая возможное преждевременное старение ткани печени. На экспрессию гена PTEN в печени крыс практически не влияли ни упражнения, ни введение станозолола.

Ключевые слова: станозолол, гомолог фосфатазы и тензина, обратная транскриптаза теломеразы, теломеразная активность, 16-β-гидроксистанозолол, 3′-гидроксистанозолол

Введение

Станозолол является анаболическим андрогенным стероидом, повышающим эффективность, повышающим эффективность.Среди всех ААС станозолол является одним из наиболее часто используемых стероидов профессиональными спортсменами и молодыми людьми для улучшения внешнего вида и работоспособности. Станозолол представляет собой 17α-алкилированное производное тестостерона с анаболическими и высокими андрогенными свойствами (1,2), и его использование в спорте запрещено Всемирным антидопинговым агентством (WADA) (3).

В прошлом ААС использовались только элитными спортсменами и бодибилдерами для целей допинга. Однако в настоящее время даже молодые люди злоупотребляют ААС в супрафизиологических дозах для улучшения внешнего вида (4,5).Сообщается, что станозолол является одним из наиболее часто используемых ААС (6), и он отвечает за несколько медицинских и поведенческих побочных эффектов, являясь признанным фактором риска заболеваний печени как у экспериментальных животных, так и у людей (7-13). . Станозолол широко биотрансформируется ферментативными путями в печени. Сообщалось, что основными метаболитами станозолола являются 3′-гидроксистанозолол, 4-β-гидроксистанозолол и 16-β-гидроксистанозолол (14,15). В целом, ААС проявляют свои эффекты посредством нескольких различных механизмов, таких как модуляция экспрессии рецепторов андрогенов (16).Неблагоприятные эффекты, связанные с печенью, чаще связаны с 17α-алкильными производными ААС и, как сообщается, не связаны с путем введения. Однако точные механизмы еще полностью не изучены (17).

Теломеры представляют собой гетерохроматиновые нуклеопротеидные комплексы на концах хромосом, участвующие в ряде основных биологических функций (). Известно, что теломеры играют ключевую роль в формировании и прогрессировании до 90% злокачественных новообразований. Теломеразная активность играет ключевую роль в клеточном старении и онкогенезе (18).Повышенная активность теломеразы обнаруживается в большинстве случаев рака человека (19). Теломераза — это рибонуклеопротеин, отвечающий за поддержание длины теломер. Ядро теломеразы состоит из двух компонентов: каталитической обратной транскриптазы теломеразы (TERT) и компонента теломеразной РНК (TERC) ().

Теломеры — это защитные колпачки хромосом (59) (адаптировано с разрешения Shutterstock).

Теломераза добавляет теломерные повторы (TTAGGG) к 3′-гидроксильному концу ведущей цепи теломеры.Компонент РНК служит шаблоном для добавления нуклеотидов. Это теломеразный комплекс, который состоит из компонента обратной транскриптазы (TERT), компонента РНК (TERC), белка дискерина и других связанных белков (NHP2, NOP10 и GAR1).

Уровень экспрессии мРНК TERT был изучен в качестве биомаркера, поскольку было продемонстрировано, что он является лимитирующим детерминантом активности теломеразы при различных злокачественных новообразованиях (20). Ген фосфатазы и белка-гомолога тензина (PTEN) кодирует белок-супрессор опухоли с фосфатазной активностью.Сообщалось, что частота гетерозиготности PTEN при гепатоцеллюлярной карциноме человека (ГЦК) человека снижается до 33% (21). PTEN участвует в подавлении активности теломеразы посредством регуляции активности TERT (22). PTEN является негативным регуляторным белком сигнального пути фосфоинозитид-3-киназы / AKT механизма регуляции выживания клеток и индуцирует клеточный апоптоз (23). PTEN предотвращает активацию AKT посредством дефосфорилирования фосфатидилинозитол (3,4,5) -трисфосфата (PIP3) до фосфатидилинозитол-4,5-бисфосфата (PIP2).Подавление PTEN связано с онкогенной активностью в клетке (24).

Целью этого исследования было изучить, по крайней мере, насколько нам известно, роль теломеразы в вызванной станозололом гепатотоксичности путем изучения корреляции между активностью теломеразы и уровнями экспрессии гена PTEN-TERT. Также была исследована биоаккумуляция станозолола и двух его основных метаболитов (3′-гидроксистанозолол и 16-β-гидроксистанозолол) в ткани печени, а также его связь с активностью теломеразы.

Материалы и методы

Эксперименты на животных

Всего было получено 34 крысы-самца Sprague-Dawley в возрасте 8 недель, которые разместили в помещениях для лабораторных животных Департамента лабораторных наук о животных Института экспериментальной медицины Стамбульского университета. (Стамбул, Турция) в соответствии с Комитетом по этике экспериментов на животных Стамбульского университета, HADYEK (номер утверждения 2013/100). Крысы были разделены на 5 групп следующим образом: i) контрольная (C) группа; ii) группу обработки пропилена (PG); iii) группу обработки станозололом (ST); iv) группа лечения и упражнений с пропиленом (PGE); и v) группа лечения станозололом и физических упражнений (STE).Животных размещали по 4 животных в одной металлической клетке и содержали в 12-часовом цикле темнота / свет при температуре 20–23 ° C. Количество крыс в экспериментальной группе, уход за крысами, обращение и используемые экспериментальные процедуры соответствовали руководящим принципам HADYEK. Вес крыс при покупке регистрировали и использовали для корректировки дозы (). Гуманными конечными точками, определенными в нашем исследовании, были боль, дистресс, неправильная осанка и судороги в соответствии с Руководящим документом ОЭСР (25). Ни у одного животного не было клинических признаков гуманных конечных точек, которые оправдывали бы их жертвоприношение до окончания эксперимента.Экспериментальный план исследования представлен в.

Таблица I

Вес крыс при покупке.

902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 3 264 902 группа 902 902 902 902 902 902 902 902
Количество крыс Вес крыс при покупке (г)
Контроль
1 259
2
4 264
5 282
Пропиленгликоль
1 255
2
2 261
5 272
Пропиленгликоль и упражнение
1 262
2 276 2 276
5 278
6 263 902 75
7 260
8 277
Стероидная группа
1 280
2 2902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 4 272
5 277
6 272
7 263
8 902 902 275
2 277
3 290
4 263
5 280
280
8 273

Таблица II

Experi мысленный дизайн исследования.

мл / кг пропиленгликоля в день
Группы Количество крыс Подкожные инъекции Упражнение
Контроль 5 Без инъекций Без упражнений
Без упражнений
Лечение станозололом 8 5 мг / кг станозолола в день Без упражнений
Лечение пропиленгликолем и упражнения 8 1 8 8 90 мл кг пропиленгликоля в день Плавание: 20 мин / день, 5 дней в неделю
Лечение станозололом и упражнения 8 5 мг / кг станозолола в день Плавание: 20 мин / день, 5 дней / неделя

Плавание было выбрано в качестве модели упражнений (26, 27) и началось за 1 неделю до схемы лечения, чтобы мальчики адаптироваться.Крыс плавали в прямоугольном полиэтиленовом резервуаре (длина 120 см × глубина 50 см × ширина 43 см), наполненном водой при температуре 29 ± 1 ° C. Во время экспериментов в течение 20 минут в день, 5 дней в неделю крыс подвергали плаванию после периода адаптации в течение 1 недели. Животных адаптировали к процессу плаванием в воде в течение 5 минут в течение первых 2 дней, а затем время плавания постепенно увеличивали до 5 минут в день до конечной продолжительности 20 минут на 5 день.

Пропиленгликоль (PG ) (Tekkim, Стамбул, Турция) использовался в качестве носителя для станозолола (Sigma, Schnelldorf, Германия).Известно, что PG является хорошим проводником для экспериментальных исследований in vivo (28,29). Однако сообщалось, что высокие концентрации PG могут вызывать повреждение ДНК в эукариотических клетках и ооцитах мышей (30,31). Подкожное введение было выбрано, а дозы были выбраны в соответствии с предыдущими исследованиями (32–34). Группы, подвергшиеся воздействию, получали однократную дозу PG (1 мл / кг) и ST (5 мл / кг) подкожно в течение 5 дней в неделю.

После 28 дней лечения животным была проведена легкая анестезия с использованием процента 1.9% диэтиловый эфир в анестезиологической камере и эвтаназия путем шейного вывиха, проводимая обученным персоналом. Были собраны образцы ткани печени и разделены на 2 секции. Один срез немедленно замораживали в жидком азоте и хранили при -80 ° C, а другой фиксировали 10% забуференным формалином и залитым парафином для гистохимического анализа.

Анализ жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии (ЖХ-МС)

Стандарты станозолола, 3′-гидроксистанозолола и 16-β-гидроксистанозолола в концентрациях 0,0.1, 0,25, 0,5 и 1 частей на миллион были приготовлены из стандартных исходных растворов с концентрацией 20 частей на миллион. Туринабол (LGC, Лидс, Великобритания) использовали в качестве внутреннего стандарта (IS) с целевыми ионами m / z 317,25 и m / z 335,25. Калибровочные кривые были получены путем измерения отношения площадей пиков целевых ионов к IS следующим образом: для станозолола m / z 370,4 , 352,3 и 329,35, для 3′-гидроксистанозолола m / z 386,4 , 345,35, для 16-β- гидроксистанозолол m / z 386,4 , 366,3 и 345,35 для IS туринабол () (ион m / z, используемый для количественной оценки, выделен жирным шрифтом).Образцы печени необработанных животных, которые дали отрицательные результаты (

Таблица III

Параметры анализа ЖХ-МС.

Агент Rt m / z target m / z m / z Mw
4α-гидроксистанозолол 9 9 902.4 345,35
4β-hydroxystanozolol 9,3 386,4 345,35
3-hydroxystanozolol 10,15 386,4 345,35 344,49
16-β-гидроксистанозолол 10,45 386,4 366,3 345,35 344,49
Станозолол 12.95 370,4 352,3 329,35 328,49
Туринабол (IS) 13,9 317,25 335,25 33470 каждый образец печени 0,1% механическая гомогенизация на высокой скорости в течение 2 мин с 1,0 мл воды. Гомогенаты сильно встряхивали и затем инкубировали в ультразвуковой бане в течение 10 мин. Затем добавляли 1,5 мл этилацетата и проводили экстракцию аналитов в течение 10 мин.Образцы центрифугировали при 1820 × g в течение 2 мин при 4 ° C. Супернатанты переносили в пустую пробирку и упаривали досуха в атмосфере азота при 30 ° C. После выпаривания добавляли 100 мкл л ацетонитрила и сильно встряхивали. Супернатанты переносили во флаконы, и 10 мкл мкл из них вводили в систему ЖХ-МС для анализа.

Система ЖХ-МС состоит из бинарного насоса ЖХ (Shimadzu Prominence, Киото, Япония), вакуумного дегазатора, автоматического пробоотборника и термостата для колонок.В качестве подвижной фазы был выбран градиент 0,1% муравьиной кислоты в воде (растворитель A) и ацетонитриле (растворитель B). Разделение аналитов было достигнуто на колонке для ВЭЖХ Discovery C18 (250 × 4,6 мм, 5 мкм, м), термостатированной при 30 ° C. Масс-спектрометр (LCMS-2010 EV; Shimadzu Prominence) в сочетании с интерфейсом химической ионизации при атмосферном давлении (APCI) и одиночным квадрупольным масс-фильтром использовался в выбранном положительном режиме ионного мониторинга (SIM). Температура интерфейса, CDL и теплового блока составляла 400, 200 и 200 ° C соответственно.Напряжение детектора составляло 1,5 кВ, поток распыляющего газа составлял 2,5 л / мин, а осушающий газ составлял 0,02 МПа.

Анализ активности теломеразы

Определение активности теломеразы в образцах ткани печени крысы выполняли количественно с использованием набора teloTAGGG telomerase PCR ELISA PLUS (Roche Diagnostic GmbH, Mannheim, Germany). Протокол набора следовал для оценки активности теломеразы, как описано ранее (35,36).

Оценка экспрессии гена

Выделение

РНК проводили из залитых парафином срезов ткани печени крысы с использованием выделения РНК High Pure FFPET (Roche Diagnostic GmbH) в соответствии с инструкциями производителя.Для синтеза кДНК использовали фиксированное количество РНК из каждого образца. кДНК получали с использованием набора Transcriptor First Strand cDNA Synthesis (Roche Diagnostic GmbH) в соответствии с инструкциями производителя. Уровни экспрессии генов TERT и PTEN анализировали с помощью количественной (в реальном времени) полимеразной цепной реакции (кПЦР) с использованием аппарата Light Cycler 480 (Roche Diagnostic GmbH) с анализом каталога Real Time Ready (Roche Diagnostic GmbH) в соответствии с инструкциями производителя. Последовательности праймеров были следующими: PTEN прямой, 5′-AGAACAAGATGCTCAAAAAGGACAA-3 ‘и обратный, 5′-TGTCAGGGTGAGCACAAGAT-3′; TERT вперед, 5’-GACATGGAGAACAAGCTGTTTGC-3 ‘; и обратный, 5’-ACAGGGAAGTTCACCACTGTC-3 ‘; и GAPDH прямой, 5’-TTCAACGGCACAGTCAAGG-3 ‘и обратный, 5′-CTCAGCACCAGCATCACC-3’.ПЦР-амплификации выполняли в соответствии с инструкциями производителя в трех экземплярах. Реакционную смесь без матрицы кДНК использовали в качестве отрицательного контроля. Уровни экспрессии (2 -ΔΔCt ) рассчитывали, как описано ранее (37,38).

Иммуногистохимический (ИГХ) анализ

ИГХ-анализы были выполнены с использованием наборов для определения Ultra Streptavidin HRP [BioLegend Sig-32248, набор для определения Ultra Streptavidin HRP (Multi-Specation, DAB)] и BioLegend Sig-32250, набор для обнаружения Ultra Streptavidin (Multi-views, AEC) (BioLegend, San Diego, CA, USA) для уровней экспрессии PTEN и TERT соответственно.Залитые парафином срезы помещали на предметные стекла Superfrost (Menzel-Gläser, Брауншвейг, Германия). После сушки в течение ночи был проведен ИГХ-анализ PTEN и TERT с использованием метода меченой стрептавидин-биотин-пероксидазы. Предметные стекла обрабатывали ксилолом и регидратировали в растворах этанола возрастающих классов. Извлечение антигена осуществляли путем кипячения предметных стекол в течение 5 мин / 3 раза в цитратном буфере (0,01 М). Для подавления активности эндогенной пероксидазы срезы ткани обрабатывали блокирующим реагентом 1 в течение 15 минут и промывали PBS.Все срезы инкубировали с блокирующим реагентом 2 в течение 5 минут при комнатной температуре, чтобы избежать неспецифического связывания. Инкубации поликлональных антител PTEN (251264) и TERT (250509) (оба от Abbiotec, Aachen, Germany) проводили в течение ночи при 4 ° C с разведениями 1/100. Слайды инкубировали со связывающим реагентом 4, а затем с реагентом для маркировки 5 в течение 20 минут при комнатной температуре. Слайды визуализировали хромогенами DAB и AEC, контрастировали гематоксилином Майера и, наконец, монтировали.Уровни экспрессии PTEN и TERT оценивали под световым микроскопом (Olympus BX40F4; Olympus, Токио, Япония). Анализы TERT и PTEN IHC были классифицированы невооруженным глазом на 4 категории на основе интенсивности окрашивания следующим образом: 0, нет окрашивания; +, слабое окрашивание; ++, умеренное окрашивание; и +++, сильное окрашивание). Анализ проводился с использованием считывающего устройства для одного слайда для минимизации вариабельности из-за субъективной оценки.

Статистический анализ

Средние значения ± стандартное отклонение и медиана были использованы для экспрессии уровней станозолола и его метаболитов, а также для PTEN, TERT и относительной теломеразной активности в процентах.Изменения между двумя значениями были выражены в виде относительных изменений в процентах или иным образом на основе следующей формулы: (фактическое изменение / контрольное значение) * 100%.

Тест Колмогорова-Смирнова с поправкой Лилиэфорса применялся для проверки нормальности непрерывных переменных. R Спирмена применяли для измерения двумерных корреляций между двумя непрерывными переменными (например, относительная активность теломеразы в процентах по сравнению с уровнями экспрессии гена 3′-гидроксистанозолола TERT). Непараметрический тест Краскела-Уоллиса и параметрический односторонний дисперсионный анализ ANOVA применялись для сравнения различий в уровнях станозолола и его метаболитов между исследуемыми группами (контрольная, станозолол, PG и группы упражнений).Непараметрические апостериорные сравнения оценивали с использованием тестов Данна (непараметрические) и HSD Тьюки для параметрических тестов. Для статистического анализа использовалось программное обеспечение IBM SPSS Statistics 21.0 (IBM Corp., Армонк, Нью-Йорк, США). Уровень 0,05 был установлен для принятия или отклонения нулевой гипотезы (статистическая значимость). Размеры выборок для отдельных анализов незначительно различались из-за того, что некоторые недостающие значения возникли из-за условий эксперимента.

Результаты

Тесты на нормальность

Тесты на нормальность показали, что только процентная относительная активность теломеразы сохранила нулевую гипотезу, предполагая нормальное распределение данных (P = 0.137). Все другие протестированные непрерывные переменные, такие как TERT, PTEN и 3′-гидроксистанозолол, не следовали нормальному распределению (P <0,01) (данные не показаны).

Биоаккумуляция станозолола и его метаболитов в тканях печени

Результаты обобщены в. Уровни станозолола и его метаболитов были незначительно выше в группе STE по сравнению с группой ST (P> 0,05).

Таблица IV

Уровни концентрации (нг / мг) станозолола и его метаболитов в группах станозолола (ST) и станозолола в сочетании с упражнениями (STE).

Относительное изменение 0,480
Агент Группа ST (средние значения ± стандартное отклонение) Группа ST (среднее ± стандартное отклонение) Манна-Уитни (значение P) %
Станозолол (нг / мг) ) 2,98 ± 1,01 3,89 ± 1,09 0,240 30,5
3′-гидроксистанозолол (нг / мг) 0,34 ± 0,06 0,44 ± 0,18 0,44 ± 0,18 0,480 0,480 16-β-гидроксистанозолол (нг / мг) 0.25 ± 0,11 0,32 ± 0,15 0,485 28,0

Оценка теломеразной активности и экспрессии генов

Уровни экспрессии генов PTEN и TERT и процент относительной теломеразной активности в исследуемых группах представлены в. Значительная разница наблюдалась для экспрессии гена TERT в различных группах (χ 2 = 17,585, df = 4, P <0,001). Основываясь на тесте Данна, упражнения снижали экспрессию TERT на (71,0%; P = 0,001), а введение ST увеличивало экспрессию TERT на (160%; P <0.001) по сравнению с группой PG. Следует отметить, что вызванное станозололом увеличение экспрессии TERT по сравнению с группой станозолола было ограничено (68,0%; P = 0,042) у животных, подвергшихся физической нагрузке. Аналогичная картина наблюдалась и для процентной активности теломеразы. На экспрессию гена PTEN практически не влияли ни упражнения, ни прием станозолола. Следует отметить, что не все значения, представленные выше, показаны в из-за большого количества попарных сравнений.

Таблица V

Уровни экспрессии генов PTEN и TERT (2 -ΔΔCt ) и% относительной активности теломеразы на группу.

Контроль 902 0,83 лечение пропиленгликоль 6
Параметры Группы N Среднее SD Сравнение групп
Экспрессия гена PTEN (2 −ΔΔCt2 ) Kruskal-Wallis
Обработка пропиленгликолем 5 0,37 0,25 χ 2 = 3,643,
Обработка станозололом 640 0,42 df = 4, P = 0,456
Лечение пропиленгликолем и упражнения 5 0,98 1,62
Станозолол 1,13
Экспрессия гена TERT (2 −ΔΔCt ) Контроль 5 0,40 0,41 Kruskal-Wallis
Обработка пропиленгликолем 2 5 78 2,66 χ 2 = 17,585,
Лечение станозололом 6 7,25 1,40 df = 4, P = 0,001
и пропиленгликоль 0,81 0,96
Лечение станозололом и физические упражнения 6 2,29 0,97
% относительная активность теломеразы 1 1 Контроль.30 0,58 ANOVA:
Обработка пропиленгликолем 5 1,92 0,96 F = 3,015, df = 4,
Обработка станозололом P = 0,040
Лечение пропиленгликолем и упражнения 5 0,76 0,61
Лечение станозололом и упражнения 6 1.33 0,96

Умеренная корреляция между относительной процентной активностью теломеразы и уровнями экспрессии гена TERT наблюдалась с использованием коэффициента корреляции Спирмена (r = 0,424, P = 0,028) (). Уровни 3′-гидроксистанозолола, измеренные в группах ST и STE, имели тенденцию отрицательно коррелировать с относительной процентной активностью теломеразы (r Спирмена r = -0,566, P = 0,055) (). Не наблюдали корреляции между любыми параметрами, контролируемыми с помощью станозолола и 16-β-гидроксистанозолола (данные не показаны).

Диаграмма разброса экспрессии гена TERT и относительной активности теломеразы в процентах. TERT, обратная транскриптаза теломеразы.

Диаграмма рассеяния 3′-гидроксистанозолола и относительная активность теломеразы в процентах.

Анализы ИГХ

Изображения окрашивания ИГХ показаны в, а результаты суммированы в. Уровни экспрессии гена PTEN наблюдались вокруг центральной вены и паренхимы. В группе STE окрашивание гепатоцитов, окружающих эти области, было умеренным.Анализ TERT IHC выявил сильное окрашивание в группе ST вокруг портального поля, центральной вены и паренхимы, в то время как упражнения ослабляли увеличение экспрессии гена TERT (умеренное окрашивание в группе STE). Таким образом, наши результаты показали, что упражнения оказывают положительное влияние на экспрессию гена PTEN, как показано на рис.

Иммуногистохимическое окрашивание белков PTEN и TERT во всех экспериментальных группах (шкала, 50 мкм мкм). Группы крыс были следующими: i) контрольная (C) группа; ii) группу обработки пропилена (PG); iii) группу обработки станозололом (ST); iv) группа лечения и упражнений с пропиленом (PGE); и v) группа лечения станозололом и физических упражнений (STE).PTEN, белок-гомолог фосфатазы и тензина, TERT, обратная транскриптаза теломеразы.

Таблица VI

Результаты подсчета для иммуногистохимических анализов PTEN и TERT.

Обсуждение

Станозолол — широко используемый и наиболее мощный ААС, ответственный за ряд побочных эффектов, включая сердечно-сосудистые, репродуктивные, поведенческие эффекты и гепатотоксичность (17).Насколько нам известно, это первое исследование, посвященное изучению вызванных станозололом молекулярных путей активности теломеразы в печени крыс и любых соответствующих эффектов физических упражнений. Станозолол вызывает внутрипеченочные структурные изменения с холестазом и увеличивает риск ГЦК (37). Кроме того, было обнаружено, что злоупотребление ААС в целом является причиной гепатоцеллюлярных аденом (12,39). Несмотря на то, что механизмы, ответственные за гепатотоксичность, вызванную станозололом, еще четко не идентифицированы, пролиферативные эффекты на клетки печени могут играть центральную роль в наблюдаемой гепатотоксичности (12,40,41).В нашем предыдущем исследовании мы продемонстрировали, что станозолол оказывает повреждающее действие на ДНК в лимфоцитах периферической крови, что, вероятно, связано с изменениями активности теломеразы (35). Хотя известно, что различные факторы окружающей среды повышают и понижают активность теломеразы, влияние физических упражнений на активность теломеразы еще не было четко идентифицировано (42). Было показано, что на длину теломер и активность теломеразы влияет несколько факторов, включая оксидативный стресс, психологический стресс и социально-экономический статус.Одним из возможных механизмов укорочения теломер является окислительный стресс из-за продуктов окисления оснований ДНК (8-OHdG) в гуаниновых или белковых аддуктах (43,44). Согласно недавним исследованиям, повышенная активность теломеразы обнаруживается почти в 90% случаев рака человека и в 80% случаев ГЦК. Кроме того, хорошо задокументировано, что большинство здоровых клеток не обладают теломеразной активностью (19,20,45). Результаты этого исследования продемонстрировали повышенные уровни относительной активности теломеразы в тканях печени в группе ST, в соответствии с нандролоном, другим хорошо известным ASS, который продемонстрировал аналогичные эффекты за счет увеличения активности теломеразы в зависимости от дозы как при ткань сердца и моноциты периферической крови (2,46).Это может представлять собой компенсирующий механизм восстановления на тканевом уровне, в то время как повышенные уровни циркулирующей активности теломеразы могут указывать на системное воспаление. Связь повышенной активности и экспрессии теломеразы с пролиферативными эффектами в этом исследовании вряд ли возникла из-за короткого времени воздействия (28 дней). В целом механизмы, лежащие в основе влияния ААС на активность теломеразы, не выяснены и остаются практически неизвестными.

TERT представляет собой каталитическую субъединицу теломеразы, которая играет роль в ее регуляции на уровне транскрипции.Сообщалось, что мутации TERT связаны с переходом от аденомы к карциноме в печени (47). Следовательно, изменения в регуляции и экспрессии TERT играют важную роль при ГЦК (48). Было показано, что ген-супрессор опухолей PTEN отрицательно коррелирует с белком TERT человека в тканях HCC (21). Следовательно, PTEN и TERT играют противоположные роли в канцерогенезе. Сообщалось, что PTEN косвенно регулирует активность TERT через путь PI3K-PKB / Akt при ГЦК человека (21).Согласно результатам настоящего исследования, не наблюдалось значительных изменений в уровнях экспрессии PTEN между группами. Однако экспрессия гена TERT была значительно увеличена при лечении ST. Упражнения обращали вспять увеличение экспрессии TERT, вызванное станозололом, особенно в паренхиме, где сообщается о метаболической зональности: высвобождение глюкозы из гликогена и посредством глюконеогенеза, утилизация аминокислот и детоксикация аммиака, защитный метаболизм, образование желчи и синтез определенных белков плазмы, такие как альбумин и фибриноген, происходят в основном в перивенальной зоне, тогда как утилизация глюкозы, метаболизм ксенобиотиков и образование других белков плазмы, таких как альфа-1-антитрипсин или альфа-фетопротеин, происходят преимущественно в перивенальной зоне (49,50).

В этом исследовании уровни 3′-гидроксистанозолола и 16-β-гидроксистанозолола, основных метаболитов станозолола, были определены в образцах ткани печени животных, получавших станозолол, и была определена доза-реакция между активностью теломеразы и TERT / PTEN. экспрессия генов была определена. Измеренные уровни 3′-гидроксистанозолола в группах ST и STE были связаны с процентной относительной теломеразной активностью, тогда как для уровней станозолола или 16-β-гидроксистанозолола никакой связи не наблюдалось.Это может быть связано с тем, что 3′-гидроксистанозолол является наиболее мощным метаболитом станозолола (2,51).

Несколько исследований показали, что физические упражнения увеличивают активность теломеразы в различных типах клеток (52,53). Однако, насколько нам известно, на сегодняшний день нет доступных исследований, изучающих влияние станозолола на активность теломеразы в присутствии / отсутствии упражнений, за исключением нашего предыдущего исследования, которое было сосредоточено на циркуляции активности теломеразы в мононуклеарных клетках периферической крови (PBMCs). ) (35).Наши результаты показали повышение активности теломеразы и экспрессии TERT в ткани печени, что может быть связано либо с повышенным риском пролиферации из-за лечения станозололом (10), что маловероятно для такого короткого периода воздействия, либо может представлять собой механизм противодействия ( 54). Упражнения обращают вспять вызванное станозололом повышение активности теломеразы. Ряд исследований подтвердил, что упражнения обладают гепатопротекторным действием. Huang и др. продемонстрировали, что 12-недельная программа упражнений по плаванию подавляла маркеры старения и подавляла регуляцию воспалительных медиаторов в тканях печени у крыс, вызванных D-галактозой (55).Yi и др. продемонстрировали, что как острые, так и хронические упражнения оказывают профилактическое действие на печень крыс с диабетом 2 типа (56). С другой стороны, сообщалось, что физические упражнения увеличивают количество печеночных ферментов у людей (57), и существуют опасения относительно влияния физических упражнений на портальную гипертензию у пациентов с циррозом печени (58).

В заключение, станозолол индуцирует активность теломеразы на молекулярном уровне, и упражнения обращают эту индукцию вспять, по крайней мере, в отношении экспрессии TERT.Это может отражать преждевременное старение тканей из-за снижения активности теломеразы. Необходимы будущие исследования, чтобы изучить механизмы, с помощью которых упражнения могут быть использованы для предотвращения неблагоприятного воздействия станазолола на здоровье, и для выяснения молекулярных гепатоцеллюлярных механизмов побочных эффектов, вызванных станозололом.

Благодарности

Авторы хотели бы поблагодарить доктора Алегакиса Афанасиоса за его ценную помощь в статистических советах и ​​комментариях.

Сокращения

Группы Оценка PTEN IHC a Оценка TERT IHC a
Control + +
0
Лечение станозололом + +++
Лечение пропиленгликолем и упражнения + +
Лечение станозололом и упражнения ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++
Агентство HCC

моноклональная кровь

AAS анаболический андрогенный стероид
TERT теломераза обратная транскриптаза
TERC 902
TERC теломераза 902 WRNA компонент теломераза RNA
гепатоцеллюлярная карцинома
PG пропиленгликоль
IS внутренний стандарт
APCI химическая ионизация при атмосферном давлении Финансирование

Это исследование было поддержано Научно-исследовательскими проектами Стамбульского университета (грант №54169-24416).

Доступность данных и материалов

Наборы данных, использованные и / или проанализированные в ходе текущего исследования, доступны у соответствующего автора по обоснованному запросу.

Вклад авторов

EO, MK, AMT, BA и DAS задумали и разработали исследование, написали рукопись и внесли ценные предложения при подготовке рукописи. MK, TK, PF и MNT выполнили LC-MS анализ, оценку активности теломеразы и экспрессии генов; CT, PDS и DT выполнили статистический анализ и интерпретацию данных.EO, MK и BA внесли свой вклад в заявку на финансирование. Все авторы читали и одобрили окончательный вариант рукописи.

Одобрение этики и согласие на участие

Эксперименты на животных были одобрены Комитетом по этике экспериментов на животных Стамбульского университета, HADYEK (номер разрешения 2013/100).

Согласие на публикацию

Не применимо.

Конкурирующие интересы

DAS является главным редактором журнала, но не принимал личного участия в процессе рецензирования или какого-либо влияния с точки зрения вынесения окончательного решения по этой статье.

Ссылки

1. Balcells G, Matabosch X, Ventura R. Обнаружение метаболитов O- и N-сульфата станозолола и их оценка в качестве дополнительных маркеров при допинг-контроле. Анальный тест на наркотики. 2017; 9: 1001–1010. DOI: 10.1002 / dta.2107. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 2. Цицимпико Ц., Василаки Ф., Царухас К., Фрагкиадаки П., Царди М., Гутзурелас Н., Непка Ц., Калогераки А., Херетис I, Эпитропаки З. и др. Нефротоксичность у кроликов после длительного приема нандролона деканоата. Toxicol Lett.2016; 259: 21–27. DOI: 10.1016 / j.toxlet.2016.06.1122. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 3. Всемирное антидопинговое агентство Список запрещенных веществ и методов за 2017 год. https://www.wada-ama.org/. Проверено 14 февраля 2018 г. 4. Kioukia-Fougia N, Georgiadis N, Tsarouhas K, Vasilaki F, Fragiadaki P, Meimeti E, Tsitsimpikou C. Синтетические и натуральные пищевые добавки: «союзники» здоровья или риски для общественного здоровья. Недавние открытия Pat Inflamm Allergy Drug. 2017; 10: 72–85. DOI: 10,2174 / 1872213X106661603700.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 5. Цицимпику С., Хрисостому Н., Папалексис П., Царухас К., Цацакис А., Джамуртас А. Использование пищевых добавок спортсменами-любителями в Афинах, Греция. Int J Sport Nutr Exerc Exerc Metab. 2011; 21: 377–384. DOI: 10.1123 / ijsnem.21.5.377. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 6. Саго Д., Мольде Х., Андреассен С.С., Торсхайм Т., Паллесен С. Глобальная эпидемиология использования анаболических андрогенных стероидов: метаанализ и мета-регрессионный анализ. Ann Epidemiol. 2014; 24: 383–398.DOI: 10.1016 / j.annepidem.2014.01.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 7. Ампуэро Дж., Гарсия Э.С., Лоренцо М.М., Калле Р, Ферреро П., Гомес МР. Вызванный станозололом мягкий холестаз. Гастроэнтерол Гепатол. 2014; 37: 71–72. DOI: 10.1016 / j.gastrohep.2013.09.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 8. Баусерман Л.Л., Сарителли А.Л., Герберт П.Н. Влияние кратковременного приема станозолола на липопротеины сыворотки крови при печеночной липазной недостаточности. Обмен веществ. 1997; 46: 992–996. DOI: 10.1016 / S0026-0495 (97) -5. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 9.Эль-Сераг HB, Крамер Дж., Дуан З., Канвал Ф. Расовые различия в прогрессировании цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы у ветеранов, инфицированных ВГС. Am J Gastroenterol. 2014; 109: 1427–1435. DOI: 10.1038 / ajg.2014.214. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 10. Hansma P, Diaz FJ, Njiwaji C. Смертельный разрыв кисты печени из-за использования анаболических стероидов: презентация случая. Am J Forensic Med Pathol. 2016; 37: 21–22. DOI: 10.1097 / PAF.0000000000000218. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 11. Харкин К.Р., Коуэн Л.А., Эндрюс Г.А., Басараба Р.Дж., Фишер Дж.Р., Дебоуз Л.Дж., Руш Дж.К., Гульельмино М.Л., Кирк, Калифорния.Гепатотоксичность станозолола у кошек. J Am Vet Med Assoc. 2000. 217: 681–684. DOI: 10.2460 / javma.2000.217.681. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 12. Сокас Л., Зумбадо М., Перес-Лусардо О., Рамос А., Перес С., Эрнандес Дж. Р., Боада Л. Д.. Гепатоцеллюлярные аденомы, связанные со злоупотреблением анаболическими андрогенными стероидами у бодибилдеров: отчет о двух случаях и обзор литературы. Br J Sports Med. 2005; 39: e27. DOI: 10.1136 / bjsm.2004.013599. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 13. Стимак Д., Милич С., Динтиньяна Р.Д., Ковач Д., Ристич С.Андрогенный / анаболический стероид-индуцированный токсический гепатит. J Clin Gastroenterol. 2002. 35: 350–352. DOI: 10.1097 / 00004836-200210000-00013. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 14. Дешмук Н.И., Захар Г., Петроци А., Секели А.Д., Баркер Дж., Нотон Д.П. Определение станозолола и 3′-гидроксистанозолола в шерсти, моче и сыворотке крыс с использованием тандемной масс-спектрометрии с жидкостной хроматографией. Chem Cent J. 2012; 6: 162. DOI: 10.1186 / 1752-153X-6-162. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 15. Mateus-Avois L, Mangin P, Saugy M.Использование ионной газовой хроматографии-множественной масс-спектрометрии для обнаружения и подтверждения следовых уровней 3′-гидроксистанозолола в моче для допинг-контроля. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2005; 816: 193–201. DOI: 10.1016 / j.jchromb.2004.11.033. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 17. Бюттнер А., Тим Д. Побочные эффекты анаболических андрогенных стероидов: патологические данные и взаимосвязь между структурой и активностью. Handb Exp Pharmacol. 2010; 195: 459–484. DOI: 10.1007 / 978-3-540-79088-4_19.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 18. Рентукас Э., Царухас К., Капланис I, Короу Э, Николау М., Марафонитис G, Коккиноу С., Халиассос А., Мамалаки А., Куретас Д. и др. Связь активности теломеразы в МКПК с маркерами воспаления и эндотелиальной дисфункции у пациентов с метаболическим синдромом. PLoS One. 2012; 7: e35739. DOI: 10.1371 / journal.pone.0035739. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 21. Zhou X, Zhu H, Lu J. Экспрессия генов PTEN и hTERT и корреляция с гепатоцеллюлярной карциномой человека.Pathol Res Pract. 2015; 211: 316–319. DOI: 10.1016 / j.prp.2014.11.016. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 23. Ян Ц., Ли С., Ван М., Чанг А.К., Лю И, Чжао Ф., Сяо Л., Хань Л., Ван Д., Ли С., Ву Х. PTEN подавляет онкогенную функцию AIB1 за счет снижения стабильности его белка с помощью механизма, включающего Fbw7 альфа. . Молочный рак. 2013; 12:21. DOI: 10.1186 / 1476-4598-12-21. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 24. Jung S, Li C, Jeong D, Lee S, Ohk J, Park M, Han S, Duan J, Kim C, Yang Y и др.Онкогенная функция p34SEI-1 через NEDD4 1 опосредована убиквитинизацией / деградацией PTEN и активацией пути PI3K / AKT. Int J Oncol. 2013; 43: 1587–1595. DOI: 10.3892 / ijo.2013.2064. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 25. ОЭСР. Руководящий документ по распознаванию, оценке и использованию клинических признаков в качестве гуманных конечных точек для экспериментальных животных, используемых при оценке безопасности. ОЭСР; Париж: 2000. [Google Scholar] 26. Черичи Камарго IC, Баррейрос де Соуза Р., Фатима Паккола Мескита С., Чуффа Л.Г., Фрей Ф.Гистология яичников и оценка фолликулов у самок крыс, получавших деканоат нандролона и подвергавшихся физическим нагрузкам. Acta Biol Hung. 2009. 60: 253–261. DOI: 10.1556 / ABiol.60.2009.3.2. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 27. de Almeida Chuffa LG, de Souza RB, Frei F, de Fátima Paccola Mesquita S, Camargo IC. Деканоат нандролона и физическое усилие: гистологическая и морфометрическая оценка в матке взрослой крысы. Анат Рек (Хобокен) 2011; 294: 335–341. DOI: 10.1002 / ar.21314. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 28.Gopinathan S, O’Neill E, Rodriguez LA, Champ R, Phillips M, Nouraldeen A, Wendt M, Wilson AGE, Kramer JA. Токсикология наполнителей in vivo, обычно используемых при открытии лекарств на крысах. J Pharmacol Toxicol Methods. 2013; 68: 284–295. DOI: 10.1016 / j.vascn.2013.02.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 29. Healing G, Sulemann T, Cotton P, Harris J, Hargreaves A, Finney R, Kirk S, Schramm C, Garner C, Pivette P, Burdett L.Данные о безопасности 19 транспортных средств для использования в доклинических исследованиях на грызунах в течение 1 месяца: Введение гидроксипропил-β-циклодекстрина вызывает почечную токсичность.J Appl Toxicol. 2016; 36: 140–150. DOI: 10.1002 / jat.3155. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 30. Aye M, Di Giorgio C, De Mo M, Botta A, Perrin J, Courbiere B. Оценка генотоксичности трех криопротекторов, используемых для витрификации человеческих ооцитов: диметилсульфоксида, этиленгликоля и пропиленгликоля. Food Chem Toxicol. 2010; 48: 1905–1912. DOI: 10.1016 / j.fct.2010.04.032. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 31. Бертло-Рику А., Перрин Дж., Ди Джорджио С., де Мео М., Ботта А., Курбьер Б. Оценка генотоксичности 1,2-пропандиола (PrOH) на ооциты мышей с помощью анализа комет.Fertil Steril. 2011; 96: 1002–1007. DOI: 10.1016 / j.fertnstert.2011.07.1106. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 32. Каннингем Р.Л., Макгиннис М.Ю. Физическая провокация самцов крыс, подвергшихся воздействию пубертатных анаболических андрогенных стероидов, вызывает агрессию по отношению к самкам. Horm Behav. 2006; 50: 410–416. DOI: 10.1016 / j.yhbeh.2006.05.002. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 33. Matrisciano F, Modafferi AM, Togna GI, Barone Y, Pinna G, Nicoletti F, Scaccianoce S. Повторное лечение анаболическими андрогенными стероидами вызывает обратимые антидепрессантами изменения гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой оси, уровней BDNF и поведения.Нейрофармакология. 2010. 58: 1078–1084. DOI: 10.1016 / j.neuropharm.2010.01.015. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 34. Tucci P, Morgese MG, Colaianna M, Zotti M, Schiavone S, Cuomo V, Trabace L. Нейрохимические последствия злоупотребления стероидами: моноаминергические изменения, вызванные станозололом. Стероиды. 2012; 77: 269–275. DOI: 10.1016 / j.steroids.2011.12.014. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 35. Кара М., Озкагли Е., Фрагкиадаки П., Котил Т., Стивактакис П. Д., Спандидос Д. А., Цацакис А. М., Альпертунга Б. Определение повреждения ДНК и активности теломеразы у крыс, получавших станозолол.Exp Ther Med. 2017; 13: 614–618. DOI: 10.3892 / etm.2016.3974. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 36. Цицимпико Ц., Цацаракис М., Фрагкиадаки П., Коваци Л., Стивактакис П., Калогераки А., Куретас Д., Цацакис А. М.. Гистопатологические поражения, окислительный стресс и генотоксические эффекты в печени и почках после длительного воздействия диазинона и пропоксура на кроликов. Токсикология. 2013; 307: 109–114. DOI: 10.1016 / j.tox.2012.11.002. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 37. Сольбах П., Поттхофф А., Раатшен Х.Дж., Суда Б., Леманн Ю., Шнайдер А., Гебель М.Дж., Маннс М.П., ​​Фогель А.Гепатоцеллюлярная карцинома с положительным тестостерон-рецептором у 29-летнего бодибилдера с историей злоупотребления анаболическими андрогенными стероидами: отчет о болезни. BMC Gastroenterol. 2015; 15:60. DOI: 10.1186 / s12876-015-0288-0. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 38. Ливак К.Дж., Шмитген Т.Д. Анализ данных относительной экспрессии генов с использованием количественной ПЦР в реальном времени и метода 2 (-4Delta Delta C (T)). Методы. 2001; 25: 402–408. DOI: 10.1006 / meth.2001.1262. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 39.Кеслер Т., Сандху Р.С., Кришнамурти С. Гепатология: гепатоцеллюлярная карцинома у молодого человека, вторичная по отношению к злоупотреблению андрогенными анаболическими стероидами. J Gastroenterol Hepatol. 2014; 29: 1852. DOI: 10.1111 / jgh.12809. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 40. Боада Л. Д., Зумбадо М., Торрес С., Лопес А., Диас-Чико Б. Н., Кабрера Дж. Дж., Лусардо ОП. Оценка острых и хронических гепатотоксических эффектов анаболического андрогенного стероида станозолола у взрослых самцов крыс. Arch Toxicol. 1999. 73: 465–472. DOI: 10.1007 / s002040050636.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 41. Канаяма Дж., Хадсон Дж. И., Поуп Х. Дж., Младший. Долгосрочные психиатрические и медицинские последствия злоупотребления анаболическими андрогенными стероидами: надвигающаяся проблема общественного здравоохранения? Зависимость от наркотиков и алкоголя. 2008; 98: 1–12. DOI: 10.1016 / j.drugalcdep.2008.05.004. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 42. Орниш Д., Лин Дж., Чан Дж. М., Эпель Э, Кемп С., Вайднер Дж., Марлин Р., Френда С. Дж., Магбануа М. Дж. М., Даубенмьер Дж. И др. Влияние всесторонних изменений образа жизни на активность теломеразы и длину теломер у мужчин с подтвержденным биопсией раком простаты низкого риска: 5-летнее наблюдение за описательным пилотным исследованием.Ланцет Онкол. 2013; 14: 1112–1120. DOI: 10.1016 / S1470-2045 (13) 70366-8. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 43. Мишра С., Кумар Р., Малхотра Н., Сингх Н., Дада Р. Мягкий окислительный стресс полезен для поддержания длины теломер сперматозоидов. World J Methodol. 2016; 6: 163–170. DOI: 10.5662 / wjm.v6.i2.163. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 44. Зар Т., Грэбер С., Перацелла М.А. Распознавание, лечение и профилактика токсичности пропиленгликоля. Semin Dial. 2007. 20: 217–219. DOI: 10.1111 / j.1525-139X.2007.00280.x. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 45. Djojosubroto MW, Chin AC, Go N, Schaetzlein S, Manns MP, Gryaznov S, Harley CB, Rudolph KL. Антагонисты теломеразы GRN163 и GRN163L подавляют рост опухоли и повышают химиочувствительность гепатомы человека. Гепатология. 2005; 42: 1127–1136. DOI: 10.1002 / hep.20822. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 46. Василаки Ф., Цицимпико Ц., Цароухас К., Германакис I, Царди М., Каввалакис М., Озкагли Э., Куретас Д., Цацакис А. М.. Кардиотоксичность у кроликов после длительного приема нандролона деканоата.Toxicol Lett. 2016; 241: 143–151. DOI: 10.1016 / j.toxlet.2015.10.026. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 47. Пилати С., Летузе Э., Нолт Дж. К., Имбо С., Булай А., Кальдераро Дж., Пуссен К., Франкони А., Куши Дж., Моркретт Дж. И др. Геномное профилирование гепатоцеллюлярных аденом позволяет выявить повторяющиеся мутации, активирующие FRK, и механизмы злокачественной трансформации. Раковая клетка. 2014; 25: 428–441. DOI: 10.1016 / j.ccr.2014.03.005. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 49. Юнгерманн К., Кицманн Т. Зонирование паренхиматозного и непаренхиматозного метаболизма в печени.Анну Рев Нутр. 1996. 16: 179–203. DOI: 10.1146 / annurev.nu.16.070196.001143. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 50. Юнгерманн К. Метаболическое зонирование паренхимы печени. Semin Liver Dis. 1988. 8: 329–341. DOI: 10,1055 / с-2008-1040554. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 51. Сальвадор Дж. П., Санчес-Баеса Ф, Марко М. П.. Одновременное иммунохимическое определение станозолола и основного метаболита человека, 3′-гидроксистанозолола, в образцах мочи и сыворотки крови. Анальная биохимия. 2008; 376: 221–228. DOI: 10.1016 / j.ab.2008.02.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 52. Чилтон В.Л., Маркес Ф.З., Вест Дж., Канноуракис Дж., Берзиньш С.П., О’Брайен Б.Дж., Чарчар Ф.Дж. Острая физическая нагрузка приводит к регуляции генов, связанных с теломерами, и экспрессии микроРНК в иммунных клетках. PLoS One. 2014; 9: e
. DOI: 10.1371 / journal.pone.00. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 53. Ludlow AT, Gratidão L, Ludlow LW, Spangenburg EE, Roth SM. Острая физическая нагрузка активирует p38 MAPK и увеличивает экспрессию генов, защищающих теломеры, в сердечной мышце.Exp Physiol. 2017; 102: 397–410. DOI: 10.1113 / EP086189. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 54. Вардавас А.И., Стивактакис П.Д., Цацаракис М.Н., Фрагкиадаки П., Василаки Ф., Царди М., Дацери Г., Циаусис Дж., Алегакис А.К., Цицимпику С. и др. Длительное воздействие циперметрина и пиперонилбутоксида вызывает воспаление печени и почек и индуцирует генотоксичность у новозеландских белых кроликов-самцов. Food Chem Toxicol. 2016; 94: 250–259. DOI: 10.1016 / j.fct.2016.06.016. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 55.Хуан С.К., Чианг В.Д., Хуанг В.К., Хуанг С.Й., Сюй М.К., Лин В.Т. Гепатопротекторные эффекты упражнений по плаванию на крысиной модели индуцированного D-галактозой старения. Evid Based Complement Alternat Med. 2013; 2013: 275431. DOI: 10.1155 / 2013/275431. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 56. Yi X, Cao S, Chang B, Zhao D, Gao H, Wan Y, Shi J, Wei W., Guan Y. Влияние острых и хронических упражнений на сигнальный путь лептин-AMPK-ACC в печени у крыс с диабетом 2 типа . J Diabetes Res. 2013; 2013:

2.DOI: 10.1155 / 2013/

2. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 57. Петтерссон Дж., Хиндорф Ю., Перссон П., Бенгтссон Т., Мальмквист Ю., Веркстрём В., Экелунд М. Мышечные упражнения могут вызывать крайне патологические тесты функции печени у здоровых мужчин. Br J Clin Pharmacol. 2008. 65: 253–259. DOI: 10.1111 / j.1365-2125.2007.03001.x. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 58. Brustia R, Savier E, Scatton O. Физические упражнения у пациентов с циррозом: к реабилитации в листе ожидания трансплантации печени.Систематический обзор и метаанализ. Клин Рес Гепатол Гастроэнтерол. 2017 ноябрь 18; Epub впереди печати. [PubMed] [Google Scholar]

Прием станозолола в сочетании с упражнениями приводит к снижению активности теломеразы, возможно, связанному со старением печени

Int J Mol Med. 2018 июл; 42 (1): 405–413.

, # 1, * , # 1, * , 2 , 3 , 3 , 4 , 3 , 3 , 5 , 3 и 1

Эрен Озкагли

1 Кафедра фармацевтической токсикологии фармацевтического факультета

Мехтап Кара

1 Кафедра фармацевтической токсикологии фармацевтического факультета

и

Тугба Котил

2 Кафедра гистологии и эмбриологии медицинского факультета Стамбульского университета, Стамбул 34116, Турция

Персефони Фрагкиадаки

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион

Манолис Н.Цацаракис

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион

Кристина Цицимпику

4 Государственная химическая лаборатория Греции, 11521 Афины

Polychronis D. Stivaktakis

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион

Димитриос Цукалас

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион

Деметриос А.Спандидос

5 Лаборатория клинической вирусологии Медицинского факультета Критского университета, 71003 Ираклион, Греция

Аристидес М. Цацакис

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии Медицинского факультета Критского университета, 71003 Ираклион

Букет Альпертунга

1 Кафедра фармацевтической токсикологии фармацевтического факультета и

1 Кафедра фармацевтической токсикологии фармацевтического факультета и

2 Кафедра гистологии и эмбриологии медицинского факультета Стамбульского университета, Стамбул 34116, Турция

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион

4 Общая химическая государственная лаборатория Греции, 11521 Афины

5 Лаборатория клинической вирусологии Медицинского факультета Критского университета, 71003 Ираклион, Греция

# Внесен равный вклад.

Для корреспонденции: профессору Букету Альпертунга, кафедра фармацевтической токсикологии, фармацевтический факультет, Стамбульский университет, Беязит, Стамбул 34116, Турция, электронная почта: rt.ude.lubnatsi@agnutПрофессору Аристидесу М. Цацакису, Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинская школа, Университет Крита, ПО Box 1393, 71003 Heraklion, Greece, E-mail: [email protected]

* Внесено поровну

Получено 28 февраля 2018 г .; Принято 11 апреля 2018 г.

Эту статью цитировали в других статьях в PMC.
Заявление о доступности данных

Наборы данных, использованные и / или проанализированные в ходе текущего исследования, доступны у соответствующего автора по разумному запросу.

Реферат

Анаболические вещества — это допинговые вещества, которые обычно используются в спорте. Станозолол, 17α-алкилированное производное тестостерона, широко используется спортсменами и бодибилдерами. Некоторые медицинские и поведенческие побочные эффекты связаны со злоупотреблением анаболическими андрогенными стероидами (ААС), в то время как печень остается наиболее узнаваемым органом-мишенью.В настоящем исследовании изучалось влияние на печень введения станозолола крысам в высоких дозах, напоминающих дозы, применяемые для допинга, в присутствии или отсутствии физических упражнений. Станозолол и его метаболиты, 16-β-гидроксистанозолол и 3′-гидроксистанозолол, были обнаружены в печени крыс с помощью жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии (ЖХ-МС). Активность теломеразы, которая участвует в клеточном старении и онкогенезе, была обнаружена путем исследования уровней экспрессии обратной транскриптазы теломеразы (TERT) и фосфатазы и гомолога тензина (PTEN) в печени крыс, получавших станозолол.Станозолол индуцировал теломеразную активность на молекулярном уровне в ткани печени крыс, и упражнения обращали эту индукцию, отражая возможное преждевременное старение ткани печени. На экспрессию гена PTEN в печени крыс практически не влияли ни упражнения, ни введение станозолола.

Ключевые слова: станозолол, гомолог фосфатазы и тензина, обратная транскриптаза теломеразы, теломеразная активность, 16-β-гидроксистанозолол, 3′-гидроксистанозолол

Введение

Станозолол является анаболическим андрогенным стероидом, повышающим эффективность, повышающим эффективность.Среди всех ААС станозолол является одним из наиболее часто используемых стероидов профессиональными спортсменами и молодыми людьми для улучшения внешнего вида и работоспособности. Станозолол представляет собой 17α-алкилированное производное тестостерона с анаболическими и высокими андрогенными свойствами (1,2), и его использование в спорте запрещено Всемирным антидопинговым агентством (WADA) (3).

В прошлом ААС использовались только элитными спортсменами и бодибилдерами для целей допинга. Однако в настоящее время даже молодые люди злоупотребляют ААС в супрафизиологических дозах для улучшения внешнего вида (4,5).Сообщается, что станозолол является одним из наиболее часто используемых ААС (6), и он отвечает за несколько медицинских и поведенческих побочных эффектов, являясь признанным фактором риска заболеваний печени как у экспериментальных животных, так и у людей (7-13). . Станозолол широко биотрансформируется ферментативными путями в печени. Сообщалось, что основными метаболитами станозолола являются 3′-гидроксистанозолол, 4-β-гидроксистанозолол и 16-β-гидроксистанозолол (14,15). В целом, ААС проявляют свои эффекты посредством нескольких различных механизмов, таких как модуляция экспрессии рецепторов андрогенов (16).Неблагоприятные эффекты, связанные с печенью, чаще связаны с 17α-алкильными производными ААС и, как сообщается, не связаны с путем введения. Однако точные механизмы еще полностью не изучены (17).

Теломеры представляют собой гетерохроматиновые нуклеопротеидные комплексы на концах хромосом, участвующие в ряде основных биологических функций (). Известно, что теломеры играют ключевую роль в формировании и прогрессировании до 90% злокачественных новообразований. Теломеразная активность играет ключевую роль в клеточном старении и онкогенезе (18).Повышенная активность теломеразы обнаруживается в большинстве случаев рака человека (19). Теломераза — это рибонуклеопротеин, отвечающий за поддержание длины теломер. Ядро теломеразы состоит из двух компонентов: каталитической обратной транскриптазы теломеразы (TERT) и компонента теломеразной РНК (TERC) ().

Теломеры — это защитные колпачки хромосом (59) (адаптировано с разрешения Shutterstock).

Теломераза добавляет теломерные повторы (TTAGGG) к 3′-гидроксильному концу ведущей цепи теломеры.Компонент РНК служит шаблоном для добавления нуклеотидов. Это теломеразный комплекс, который состоит из компонента обратной транскриптазы (TERT), компонента РНК (TERC), белка дискерина и других связанных белков (NHP2, NOP10 и GAR1).

Уровень экспрессии мРНК TERT был изучен в качестве биомаркера, поскольку было продемонстрировано, что он является лимитирующим детерминантом активности теломеразы при различных злокачественных новообразованиях (20). Ген фосфатазы и белка-гомолога тензина (PTEN) кодирует белок-супрессор опухоли с фосфатазной активностью.Сообщалось, что частота гетерозиготности PTEN при гепатоцеллюлярной карциноме человека (ГЦК) человека снижается до 33% (21). PTEN участвует в подавлении активности теломеразы посредством регуляции активности TERT (22). PTEN является негативным регуляторным белком сигнального пути фосфоинозитид-3-киназы / AKT механизма регуляции выживания клеток и индуцирует клеточный апоптоз (23). PTEN предотвращает активацию AKT посредством дефосфорилирования фосфатидилинозитол (3,4,5) -трисфосфата (PIP3) до фосфатидилинозитол-4,5-бисфосфата (PIP2).Подавление PTEN связано с онкогенной активностью в клетке (24).

Целью этого исследования было изучить, по крайней мере, насколько нам известно, роль теломеразы в вызванной станозололом гепатотоксичности путем изучения корреляции между активностью теломеразы и уровнями экспрессии гена PTEN-TERT. Также была исследована биоаккумуляция станозолола и двух его основных метаболитов (3′-гидроксистанозолол и 16-β-гидроксистанозолол) в ткани печени, а также его связь с активностью теломеразы.

Материалы и методы

Эксперименты на животных

Всего было получено 34 крысы-самца Sprague-Dawley в возрасте 8 недель, которые разместили в помещениях для лабораторных животных Департамента лабораторных наук о животных Института экспериментальной медицины Стамбульского университета. (Стамбул, Турция) в соответствии с Комитетом по этике экспериментов на животных Стамбульского университета, HADYEK (номер утверждения 2013/100). Крысы были разделены на 5 групп следующим образом: i) контрольная (C) группа; ii) группу обработки пропилена (PG); iii) группу обработки станозололом (ST); iv) группа лечения и упражнений с пропиленом (PGE); и v) группа лечения станозололом и физических упражнений (STE).Животных размещали по 4 животных в одной металлической клетке и содержали в 12-часовом цикле темнота / свет при температуре 20–23 ° C. Количество крыс в экспериментальной группе, уход за крысами, обращение и используемые экспериментальные процедуры соответствовали руководящим принципам HADYEK. Вес крыс при покупке регистрировали и использовали для корректировки дозы (). Гуманными конечными точками, определенными в нашем исследовании, были боль, дистресс, неправильная осанка и судороги в соответствии с Руководящим документом ОЭСР (25). Ни у одного животного не было клинических признаков гуманных конечных точек, которые оправдывали бы их жертвоприношение до окончания эксперимента.Экспериментальный план исследования представлен в.

Таблица I

Вес крыс при покупке.

902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 3 264 902 группа 902 902 902 902 902 902 902 902
Количество крыс Вес крыс при покупке (г)
Контроль
1 259
2
4 264
5 282
Пропиленгликоль
1 255
2
2 261
5 272
Пропиленгликоль и упражнение
1 262
2 276 2 276
5 278
6 263 902 75
7 260
8 277
Стероидная группа
1 280
2 2902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 4 272
5 277
6 272
7 263
8 902 902 275
2 277
3 290
4 263
5 280
280
8 273

Таблица II

Experi мысленный дизайн исследования.

мл / кг пропиленгликоля в день
Группы Количество крыс Подкожные инъекции Упражнение
Контроль 5 Без инъекций Без упражнений
Без упражнений
Лечение станозололом 8 5 мг / кг станозолола в день Без упражнений
Лечение пропиленгликолем и упражнения 8 1 8 8 90 мл кг пропиленгликоля в день Плавание: 20 мин / день, 5 дней в неделю
Лечение станозололом и упражнения 8 5 мг / кг станозолола в день Плавание: 20 мин / день, 5 дней / неделя

Плавание было выбрано в качестве модели упражнений (26, 27) и началось за 1 неделю до схемы лечения, чтобы мальчики адаптироваться.Крыс плавали в прямоугольном полиэтиленовом резервуаре (длина 120 см × глубина 50 см × ширина 43 см), наполненном водой при температуре 29 ± 1 ° C. Во время экспериментов в течение 20 минут в день, 5 дней в неделю крыс подвергали плаванию после периода адаптации в течение 1 недели. Животных адаптировали к процессу плаванием в воде в течение 5 минут в течение первых 2 дней, а затем время плавания постепенно увеличивали до 5 минут в день до конечной продолжительности 20 минут на 5 день.

Пропиленгликоль (PG ) (Tekkim, Стамбул, Турция) использовался в качестве носителя для станозолола (Sigma, Schnelldorf, Германия).Известно, что PG является хорошим проводником для экспериментальных исследований in vivo (28,29). Однако сообщалось, что высокие концентрации PG могут вызывать повреждение ДНК в эукариотических клетках и ооцитах мышей (30,31). Подкожное введение было выбрано, а дозы были выбраны в соответствии с предыдущими исследованиями (32–34). Группы, подвергшиеся воздействию, получали однократную дозу PG (1 мл / кг) и ST (5 мл / кг) подкожно в течение 5 дней в неделю.

После 28 дней лечения животным была проведена легкая анестезия с использованием процента 1.9% диэтиловый эфир в анестезиологической камере и эвтаназия путем шейного вывиха, проводимая обученным персоналом. Были собраны образцы ткани печени и разделены на 2 секции. Один срез немедленно замораживали в жидком азоте и хранили при -80 ° C, а другой фиксировали 10% забуференным формалином и залитым парафином для гистохимического анализа.

Анализ жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии (ЖХ-МС)

Стандарты станозолола, 3′-гидроксистанозолола и 16-β-гидроксистанозолола в концентрациях 0,0.1, 0,25, 0,5 и 1 частей на миллион были приготовлены из стандартных исходных растворов с концентрацией 20 частей на миллион. Туринабол (LGC, Лидс, Великобритания) использовали в качестве внутреннего стандарта (IS) с целевыми ионами m / z 317,25 и m / z 335,25. Калибровочные кривые были получены путем измерения отношения площадей пиков целевых ионов к IS следующим образом: для станозолола m / z 370,4 , 352,3 и 329,35, для 3′-гидроксистанозолола m / z 386,4 , 345,35, для 16-β- гидроксистанозолол m / z 386,4 , 366,3 и 345,35 для IS туринабол () (ион m / z, используемый для количественной оценки, выделен жирным шрифтом).Образцы печени необработанных животных, которые дали отрицательные результаты (

Таблица III

Параметры анализа ЖХ-МС.

Агент Rt m / z target m / z m / z Mw
4α-гидроксистанозолол 9 9 902.4 345,35
4β-hydroxystanozolol 9,3 386,4 345,35
3-hydroxystanozolol 10,15 386,4 345,35 344,49
16-β-гидроксистанозолол 10,45 386,4 366,3 345,35 344,49
Станозолол 12.95 370,4 352,3 329,35 328,49
Туринабол (IS) 13,9 317,25 335,25 33470 каждый образец печени 0,1% механическая гомогенизация на высокой скорости в течение 2 мин с 1,0 мл воды. Гомогенаты сильно встряхивали и затем инкубировали в ультразвуковой бане в течение 10 мин. Затем добавляли 1,5 мл этилацетата и проводили экстракцию аналитов в течение 10 мин.Образцы центрифугировали при 1820 × g в течение 2 мин при 4 ° C. Супернатанты переносили в пустую пробирку и упаривали досуха в атмосфере азота при 30 ° C. После выпаривания добавляли 100 мкл л ацетонитрила и сильно встряхивали. Супернатанты переносили во флаконы, и 10 мкл мкл из них вводили в систему ЖХ-МС для анализа.

Система ЖХ-МС состоит из бинарного насоса ЖХ (Shimadzu Prominence, Киото, Япония), вакуумного дегазатора, автоматического пробоотборника и термостата для колонок.В качестве подвижной фазы был выбран градиент 0,1% муравьиной кислоты в воде (растворитель A) и ацетонитриле (растворитель B). Разделение аналитов было достигнуто на колонке для ВЭЖХ Discovery C18 (250 × 4,6 мм, 5 мкм, м), термостатированной при 30 ° C. Масс-спектрометр (LCMS-2010 EV; Shimadzu Prominence) в сочетании с интерфейсом химической ионизации при атмосферном давлении (APCI) и одиночным квадрупольным масс-фильтром использовался в выбранном положительном режиме ионного мониторинга (SIM). Температура интерфейса, CDL и теплового блока составляла 400, 200 и 200 ° C соответственно.Напряжение детектора составляло 1,5 кВ, поток распыляющего газа составлял 2,5 л / мин, а осушающий газ составлял 0,02 МПа.

Анализ активности теломеразы

Определение активности теломеразы в образцах ткани печени крысы выполняли количественно с использованием набора teloTAGGG telomerase PCR ELISA PLUS (Roche Diagnostic GmbH, Mannheim, Germany). Протокол набора следовал для оценки активности теломеразы, как описано ранее (35,36).

Оценка экспрессии гена

Выделение

РНК проводили из залитых парафином срезов ткани печени крысы с использованием выделения РНК High Pure FFPET (Roche Diagnostic GmbH) в соответствии с инструкциями производителя.Для синтеза кДНК использовали фиксированное количество РНК из каждого образца. кДНК получали с использованием набора Transcriptor First Strand cDNA Synthesis (Roche Diagnostic GmbH) в соответствии с инструкциями производителя. Уровни экспрессии генов TERT и PTEN анализировали с помощью количественной (в реальном времени) полимеразной цепной реакции (кПЦР) с использованием аппарата Light Cycler 480 (Roche Diagnostic GmbH) с анализом каталога Real Time Ready (Roche Diagnostic GmbH) в соответствии с инструкциями производителя. Последовательности праймеров были следующими: PTEN прямой, 5′-AGAACAAGATGCTCAAAAAGGACAA-3 ‘и обратный, 5′-TGTCAGGGTGAGCACAAGAT-3′; TERT вперед, 5’-GACATGGAGAACAAGCTGTTTGC-3 ‘; и обратный, 5’-ACAGGGAAGTTCACCACTGTC-3 ‘; и GAPDH прямой, 5’-TTCAACGGCACAGTCAAGG-3 ‘и обратный, 5′-CTCAGCACCAGCATCACC-3’.ПЦР-амплификации выполняли в соответствии с инструкциями производителя в трех экземплярах. Реакционную смесь без матрицы кДНК использовали в качестве отрицательного контроля. Уровни экспрессии (2 -ΔΔCt ) рассчитывали, как описано ранее (37,38).

Иммуногистохимический (ИГХ) анализ

ИГХ-анализы были выполнены с использованием наборов для определения Ultra Streptavidin HRP [BioLegend Sig-32248, набор для определения Ultra Streptavidin HRP (Multi-Specation, DAB)] и BioLegend Sig-32250, набор для обнаружения Ultra Streptavidin (Multi-views, AEC) (BioLegend, San Diego, CA, USA) для уровней экспрессии PTEN и TERT соответственно.Залитые парафином срезы помещали на предметные стекла Superfrost (Menzel-Gläser, Брауншвейг, Германия). После сушки в течение ночи был проведен ИГХ-анализ PTEN и TERT с использованием метода меченой стрептавидин-биотин-пероксидазы. Предметные стекла обрабатывали ксилолом и регидратировали в растворах этанола возрастающих классов. Извлечение антигена осуществляли путем кипячения предметных стекол в течение 5 мин / 3 раза в цитратном буфере (0,01 М). Для подавления активности эндогенной пероксидазы срезы ткани обрабатывали блокирующим реагентом 1 в течение 15 минут и промывали PBS.Все срезы инкубировали с блокирующим реагентом 2 в течение 5 минут при комнатной температуре, чтобы избежать неспецифического связывания. Инкубации поликлональных антител PTEN (251264) и TERT (250509) (оба от Abbiotec, Aachen, Germany) проводили в течение ночи при 4 ° C с разведениями 1/100. Слайды инкубировали со связывающим реагентом 4, а затем с реагентом для маркировки 5 в течение 20 минут при комнатной температуре. Слайды визуализировали хромогенами DAB и AEC, контрастировали гематоксилином Майера и, наконец, монтировали.Уровни экспрессии PTEN и TERT оценивали под световым микроскопом (Olympus BX40F4; Olympus, Токио, Япония). Анализы TERT и PTEN IHC были классифицированы невооруженным глазом на 4 категории на основе интенсивности окрашивания следующим образом: 0, нет окрашивания; +, слабое окрашивание; ++, умеренное окрашивание; и +++, сильное окрашивание). Анализ проводился с использованием считывающего устройства для одного слайда для минимизации вариабельности из-за субъективной оценки.

Статистический анализ

Средние значения ± стандартное отклонение и медиана были использованы для экспрессии уровней станозолола и его метаболитов, а также для PTEN, TERT и относительной теломеразной активности в процентах.Изменения между двумя значениями были выражены в виде относительных изменений в процентах или иным образом на основе следующей формулы: (фактическое изменение / контрольное значение) * 100%.

Тест Колмогорова-Смирнова с поправкой Лилиэфорса применялся для проверки нормальности непрерывных переменных. R Спирмена применяли для измерения двумерных корреляций между двумя непрерывными переменными (например, относительная активность теломеразы в процентах по сравнению с уровнями экспрессии гена 3′-гидроксистанозолола TERT). Непараметрический тест Краскела-Уоллиса и параметрический односторонний дисперсионный анализ ANOVA применялись для сравнения различий в уровнях станозолола и его метаболитов между исследуемыми группами (контрольная, станозолол, PG и группы упражнений).Непараметрические апостериорные сравнения оценивали с использованием тестов Данна (непараметрические) и HSD Тьюки для параметрических тестов. Для статистического анализа использовалось программное обеспечение IBM SPSS Statistics 21.0 (IBM Corp., Армонк, Нью-Йорк, США). Уровень 0,05 был установлен для принятия или отклонения нулевой гипотезы (статистическая значимость). Размеры выборок для отдельных анализов незначительно различались из-за того, что некоторые недостающие значения возникли из-за условий эксперимента.

Результаты

Тесты на нормальность

Тесты на нормальность показали, что только процентная относительная активность теломеразы сохранила нулевую гипотезу, предполагая нормальное распределение данных (P = 0.137). Все другие протестированные непрерывные переменные, такие как TERT, PTEN и 3′-гидроксистанозолол, не следовали нормальному распределению (P <0,01) (данные не показаны).

Биоаккумуляция станозолола и его метаболитов в тканях печени

Результаты обобщены в. Уровни станозолола и его метаболитов были незначительно выше в группе STE по сравнению с группой ST (P> 0,05).

Таблица IV

Уровни концентрации (нг / мг) станозолола и его метаболитов в группах станозолола (ST) и станозолола в сочетании с упражнениями (STE).

Относительное изменение 0,480
Агент Группа ST (средние значения ± стандартное отклонение) Группа ST (среднее ± стандартное отклонение) Манна-Уитни (значение P) %
Станозолол (нг / мг) ) 2,98 ± 1,01 3,89 ± 1,09 0,240 30,5
3′-гидроксистанозолол (нг / мг) 0,34 ± 0,06 0,44 ± 0,18 0,44 ± 0,18 0,480 0,480 16-β-гидроксистанозолол (нг / мг) 0.25 ± 0,11 0,32 ± 0,15 0,485 28,0

Оценка теломеразной активности и экспрессии генов

Уровни экспрессии генов PTEN и TERT и процент относительной теломеразной активности в исследуемых группах представлены в. Значительная разница наблюдалась для экспрессии гена TERT в различных группах (χ 2 = 17,585, df = 4, P <0,001). Основываясь на тесте Данна, упражнения снижали экспрессию TERT на (71,0%; P = 0,001), а введение ST увеличивало экспрессию TERT на (160%; P <0.001) по сравнению с группой PG. Следует отметить, что вызванное станозололом увеличение экспрессии TERT по сравнению с группой станозолола было ограничено (68,0%; P = 0,042) у животных, подвергшихся физической нагрузке. Аналогичная картина наблюдалась и для процентной активности теломеразы. На экспрессию гена PTEN практически не влияли ни упражнения, ни прием станозолола. Следует отметить, что не все значения, представленные выше, показаны в из-за большого количества попарных сравнений.

Таблица V

Уровни экспрессии генов PTEN и TERT (2 -ΔΔCt ) и% относительной активности теломеразы на группу.

Контроль 902 0,83 лечение пропиленгликоль 6
Параметры Группы N Среднее SD Сравнение групп
Экспрессия гена PTEN (2 −ΔΔCt2 ) Kruskal-Wallis
Обработка пропиленгликолем 5 0,37 0,25 χ 2 = 3,643,
Обработка станозололом 640 0,42 df = 4, P = 0,456
Лечение пропиленгликолем и упражнения 5 0,98 1,62
Станозолол 1,13
Экспрессия гена TERT (2 −ΔΔCt ) Контроль 5 0,40 0,41 Kruskal-Wallis
Обработка пропиленгликолем 2 5 78 2,66 χ 2 = 17,585,
Лечение станозололом 6 7,25 1,40 df = 4, P = 0,001
и пропиленгликоль 0,81 0,96
Лечение станозололом и физические упражнения 6 2,29 0,97
% относительная активность теломеразы 1 1 Контроль.30 0,58 ANOVA:
Обработка пропиленгликолем 5 1,92 0,96 F = 3,015, df = 4,
Обработка станозололом P = 0,040
Лечение пропиленгликолем и упражнения 5 0,76 0,61
Лечение станозололом и упражнения 6 1.33 0,96

Умеренная корреляция между относительной процентной активностью теломеразы и уровнями экспрессии гена TERT наблюдалась с использованием коэффициента корреляции Спирмена (r = 0,424, P = 0,028) (). Уровни 3′-гидроксистанозолола, измеренные в группах ST и STE, имели тенденцию отрицательно коррелировать с относительной процентной активностью теломеразы (r Спирмена r = -0,566, P = 0,055) (). Не наблюдали корреляции между любыми параметрами, контролируемыми с помощью станозолола и 16-β-гидроксистанозолола (данные не показаны).

Диаграмма разброса экспрессии гена TERT и относительной активности теломеразы в процентах. TERT, обратная транскриптаза теломеразы.

Диаграмма рассеяния 3′-гидроксистанозолола и относительная активность теломеразы в процентах.

Анализы ИГХ

Изображения окрашивания ИГХ показаны в, а результаты суммированы в. Уровни экспрессии гена PTEN наблюдались вокруг центральной вены и паренхимы. В группе STE окрашивание гепатоцитов, окружающих эти области, было умеренным.Анализ TERT IHC выявил сильное окрашивание в группе ST вокруг портального поля, центральной вены и паренхимы, в то время как упражнения ослабляли увеличение экспрессии гена TERT (умеренное окрашивание в группе STE). Таким образом, наши результаты показали, что упражнения оказывают положительное влияние на экспрессию гена PTEN, как показано на рис.

Иммуногистохимическое окрашивание белков PTEN и TERT во всех экспериментальных группах (шкала, 50 мкм мкм). Группы крыс были следующими: i) контрольная (C) группа; ii) группу обработки пропилена (PG); iii) группу обработки станозололом (ST); iv) группа лечения и упражнений с пропиленом (PGE); и v) группа лечения станозололом и физических упражнений (STE).PTEN, белок-гомолог фосфатазы и тензина, TERT, обратная транскриптаза теломеразы.

Таблица VI

Результаты подсчета для иммуногистохимических анализов PTEN и TERT.

Обсуждение

Станозолол — широко используемый и наиболее мощный ААС, ответственный за ряд побочных эффектов, включая сердечно-сосудистые, репродуктивные, поведенческие эффекты и гепатотоксичность (17).Насколько нам известно, это первое исследование, посвященное изучению вызванных станозололом молекулярных путей активности теломеразы в печени крыс и любых соответствующих эффектов физических упражнений. Станозолол вызывает внутрипеченочные структурные изменения с холестазом и увеличивает риск ГЦК (37). Кроме того, было обнаружено, что злоупотребление ААС в целом является причиной гепатоцеллюлярных аденом (12,39). Несмотря на то, что механизмы, ответственные за гепатотоксичность, вызванную станозололом, еще четко не идентифицированы, пролиферативные эффекты на клетки печени могут играть центральную роль в наблюдаемой гепатотоксичности (12,40,41).В нашем предыдущем исследовании мы продемонстрировали, что станозолол оказывает повреждающее действие на ДНК в лимфоцитах периферической крови, что, вероятно, связано с изменениями активности теломеразы (35). Хотя известно, что различные факторы окружающей среды повышают и понижают активность теломеразы, влияние физических упражнений на активность теломеразы еще не было четко идентифицировано (42). Было показано, что на длину теломер и активность теломеразы влияет несколько факторов, включая оксидативный стресс, психологический стресс и социально-экономический статус.Одним из возможных механизмов укорочения теломер является окислительный стресс из-за продуктов окисления оснований ДНК (8-OHdG) в гуаниновых или белковых аддуктах (43,44). Согласно недавним исследованиям, повышенная активность теломеразы обнаруживается почти в 90% случаев рака человека и в 80% случаев ГЦК. Кроме того, хорошо задокументировано, что большинство здоровых клеток не обладают теломеразной активностью (19,20,45). Результаты этого исследования продемонстрировали повышенные уровни относительной активности теломеразы в тканях печени в группе ST, в соответствии с нандролоном, другим хорошо известным ASS, который продемонстрировал аналогичные эффекты за счет увеличения активности теломеразы в зависимости от дозы как при ткань сердца и моноциты периферической крови (2,46).Это может представлять собой компенсирующий механизм восстановления на тканевом уровне, в то время как повышенные уровни циркулирующей активности теломеразы могут указывать на системное воспаление. Связь повышенной активности и экспрессии теломеразы с пролиферативными эффектами в этом исследовании вряд ли возникла из-за короткого времени воздействия (28 дней). В целом механизмы, лежащие в основе влияния ААС на активность теломеразы, не выяснены и остаются практически неизвестными.

TERT представляет собой каталитическую субъединицу теломеразы, которая играет роль в ее регуляции на уровне транскрипции.Сообщалось, что мутации TERT связаны с переходом от аденомы к карциноме в печени (47). Следовательно, изменения в регуляции и экспрессии TERT играют важную роль при ГЦК (48). Было показано, что ген-супрессор опухолей PTEN отрицательно коррелирует с белком TERT человека в тканях HCC (21). Следовательно, PTEN и TERT играют противоположные роли в канцерогенезе. Сообщалось, что PTEN косвенно регулирует активность TERT через путь PI3K-PKB / Akt при ГЦК человека (21).Согласно результатам настоящего исследования, не наблюдалось значительных изменений в уровнях экспрессии PTEN между группами. Однако экспрессия гена TERT была значительно увеличена при лечении ST. Упражнения обращали вспять увеличение экспрессии TERT, вызванное станозололом, особенно в паренхиме, где сообщается о метаболической зональности: высвобождение глюкозы из гликогена и посредством глюконеогенеза, утилизация аминокислот и детоксикация аммиака, защитный метаболизм, образование желчи и синтез определенных белков плазмы, такие как альбумин и фибриноген, происходят в основном в перивенальной зоне, тогда как утилизация глюкозы, метаболизм ксенобиотиков и образование других белков плазмы, таких как альфа-1-антитрипсин или альфа-фетопротеин, происходят преимущественно в перивенальной зоне (49,50).

В этом исследовании уровни 3′-гидроксистанозолола и 16-β-гидроксистанозолола, основных метаболитов станозолола, были определены в образцах ткани печени животных, получавших станозолол, и была определена доза-реакция между активностью теломеразы и TERT / PTEN. экспрессия генов была определена. Измеренные уровни 3′-гидроксистанозолола в группах ST и STE были связаны с процентной относительной теломеразной активностью, тогда как для уровней станозолола или 16-β-гидроксистанозолола никакой связи не наблюдалось.Это может быть связано с тем, что 3′-гидроксистанозолол является наиболее мощным метаболитом станозолола (2,51).

Несколько исследований показали, что физические упражнения увеличивают активность теломеразы в различных типах клеток (52,53). Однако, насколько нам известно, на сегодняшний день нет доступных исследований, изучающих влияние станозолола на активность теломеразы в присутствии / отсутствии упражнений, за исключением нашего предыдущего исследования, которое было сосредоточено на циркуляции активности теломеразы в мононуклеарных клетках периферической крови (PBMCs). ) (35).Наши результаты показали повышение активности теломеразы и экспрессии TERT в ткани печени, что может быть связано либо с повышенным риском пролиферации из-за лечения станозололом (10), что маловероятно для такого короткого периода воздействия, либо может представлять собой механизм противодействия ( 54). Упражнения обращают вспять вызванное станозололом повышение активности теломеразы. Ряд исследований подтвердил, что упражнения обладают гепатопротекторным действием. Huang и др. продемонстрировали, что 12-недельная программа упражнений по плаванию подавляла маркеры старения и подавляла регуляцию воспалительных медиаторов в тканях печени у крыс, вызванных D-галактозой (55).Yi и др. продемонстрировали, что как острые, так и хронические упражнения оказывают профилактическое действие на печень крыс с диабетом 2 типа (56). С другой стороны, сообщалось, что физические упражнения увеличивают количество печеночных ферментов у людей (57), и существуют опасения относительно влияния физических упражнений на портальную гипертензию у пациентов с циррозом печени (58).

В заключение, станозолол индуцирует активность теломеразы на молекулярном уровне, и упражнения обращают эту индукцию вспять, по крайней мере, в отношении экспрессии TERT.Это может отражать преждевременное старение тканей из-за снижения активности теломеразы. Необходимы будущие исследования, чтобы изучить механизмы, с помощью которых упражнения могут быть использованы для предотвращения неблагоприятного воздействия станазолола на здоровье, и для выяснения молекулярных гепатоцеллюлярных механизмов побочных эффектов, вызванных станозололом.

Благодарности

Авторы хотели бы поблагодарить доктора Алегакиса Афанасиоса за его ценную помощь в статистических советах и ​​комментариях.

Сокращения

Группы Оценка PTEN IHC a Оценка TERT IHC a
Control + +
0
Лечение станозололом + +++
Лечение пропиленгликолем и упражнения + +
Лечение станозололом и упражнения ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++
Агентство HCC

моноклональная кровь

AAS анаболический андрогенный стероид
TERT теломераза обратная транскриптаза
TERC 902
TERC теломераза 902 WRNA компонент теломераза RNA
гепатоцеллюлярная карцинома
PG пропиленгликоль
IS внутренний стандарт
APCI химическая ионизация при атмосферном давлении Финансирование

Это исследование было поддержано Научно-исследовательскими проектами Стамбульского университета (грант №54169-24416).

Доступность данных и материалов

Наборы данных, использованные и / или проанализированные в ходе текущего исследования, доступны у соответствующего автора по обоснованному запросу.

Вклад авторов

EO, MK, AMT, BA и DAS задумали и разработали исследование, написали рукопись и внесли ценные предложения при подготовке рукописи. MK, TK, PF и MNT выполнили LC-MS анализ, оценку активности теломеразы и экспрессии генов; CT, PDS и DT выполнили статистический анализ и интерпретацию данных.EO, MK и BA внесли свой вклад в заявку на финансирование. Все авторы читали и одобрили окончательный вариант рукописи.

Одобрение этики и согласие на участие

Эксперименты на животных были одобрены Комитетом по этике экспериментов на животных Стамбульского университета, HADYEK (номер разрешения 2013/100).

Согласие на публикацию

Не применимо.

Конкурирующие интересы

DAS является главным редактором журнала, но не принимал личного участия в процессе рецензирования или какого-либо влияния с точки зрения вынесения окончательного решения по этой статье.

Ссылки

1. Balcells G, Matabosch X, Ventura R. Обнаружение метаболитов O- и N-сульфата станозолола и их оценка в качестве дополнительных маркеров при допинг-контроле. Анальный тест на наркотики. 2017; 9: 1001–1010. DOI: 10.1002 / dta.2107. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 2. Цицимпико Ц., Василаки Ф., Царухас К., Фрагкиадаки П., Царди М., Гутзурелас Н., Непка Ц., Калогераки А., Херетис I, Эпитропаки З. и др. Нефротоксичность у кроликов после длительного приема нандролона деканоата. Toxicol Lett.2016; 259: 21–27. DOI: 10.1016 / j.toxlet.2016.06.1122. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 3. Всемирное антидопинговое агентство Список запрещенных веществ и методов за 2017 год. https://www.wada-ama.org/. Проверено 14 февраля 2018 г. 4. Kioukia-Fougia N, Georgiadis N, Tsarouhas K, Vasilaki F, Fragiadaki P, Meimeti E, Tsitsimpikou C. Синтетические и натуральные пищевые добавки: «союзники» здоровья или риски для общественного здоровья. Недавние открытия Pat Inflamm Allergy Drug. 2017; 10: 72–85. DOI: 10,2174 / 1872213X106661603700.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 5. Цицимпику С., Хрисостому Н., Папалексис П., Царухас К., Цацакис А., Джамуртас А. Использование пищевых добавок спортсменами-любителями в Афинах, Греция. Int J Sport Nutr Exerc Exerc Metab. 2011; 21: 377–384. DOI: 10.1123 / ijsnem.21.5.377. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 6. Саго Д., Мольде Х., Андреассен С.С., Торсхайм Т., Паллесен С. Глобальная эпидемиология использования анаболических андрогенных стероидов: метаанализ и мета-регрессионный анализ. Ann Epidemiol. 2014; 24: 383–398.DOI: 10.1016 / j.annepidem.2014.01.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 7. Ампуэро Дж., Гарсия Э.С., Лоренцо М.М., Калле Р, Ферреро П., Гомес МР. Вызванный станозололом мягкий холестаз. Гастроэнтерол Гепатол. 2014; 37: 71–72. DOI: 10.1016 / j.gastrohep.2013.09.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 8. Баусерман Л.Л., Сарителли А.Л., Герберт П.Н. Влияние кратковременного приема станозолола на липопротеины сыворотки крови при печеночной липазной недостаточности. Обмен веществ. 1997; 46: 992–996. DOI: 10.1016 / S0026-0495 (97) -5. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 9.Эль-Сераг HB, Крамер Дж., Дуан З., Канвал Ф. Расовые различия в прогрессировании цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы у ветеранов, инфицированных ВГС. Am J Gastroenterol. 2014; 109: 1427–1435. DOI: 10.1038 / ajg.2014.214. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 10. Hansma P, Diaz FJ, Njiwaji C. Смертельный разрыв кисты печени из-за использования анаболических стероидов: презентация случая. Am J Forensic Med Pathol. 2016; 37: 21–22. DOI: 10.1097 / PAF.0000000000000218. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 11. Харкин К.Р., Коуэн Л.А., Эндрюс Г.А., Басараба Р.Дж., Фишер Дж.Р., Дебоуз Л.Дж., Руш Дж.К., Гульельмино М.Л., Кирк, Калифорния.Гепатотоксичность станозолола у кошек. J Am Vet Med Assoc. 2000. 217: 681–684. DOI: 10.2460 / javma.2000.217.681. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 12. Сокас Л., Зумбадо М., Перес-Лусардо О., Рамос А., Перес С., Эрнандес Дж. Р., Боада Л. Д.. Гепатоцеллюлярные аденомы, связанные со злоупотреблением анаболическими андрогенными стероидами у бодибилдеров: отчет о двух случаях и обзор литературы. Br J Sports Med. 2005; 39: e27. DOI: 10.1136 / bjsm.2004.013599. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 13. Стимак Д., Милич С., Динтиньяна Р.Д., Ковач Д., Ристич С.Андрогенный / анаболический стероид-индуцированный токсический гепатит. J Clin Gastroenterol. 2002. 35: 350–352. DOI: 10.1097 / 00004836-200210000-00013. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 14. Дешмук Н.И., Захар Г., Петроци А., Секели А.Д., Баркер Дж., Нотон Д.П. Определение станозолола и 3′-гидроксистанозолола в шерсти, моче и сыворотке крыс с использованием тандемной масс-спектрометрии с жидкостной хроматографией. Chem Cent J. 2012; 6: 162. DOI: 10.1186 / 1752-153X-6-162. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 15. Mateus-Avois L, Mangin P, Saugy M.Использование ионной газовой хроматографии-множественной масс-спектрометрии для обнаружения и подтверждения следовых уровней 3′-гидроксистанозолола в моче для допинг-контроля. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2005; 816: 193–201. DOI: 10.1016 / j.jchromb.2004.11.033. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 17. Бюттнер А., Тим Д. Побочные эффекты анаболических андрогенных стероидов: патологические данные и взаимосвязь между структурой и активностью. Handb Exp Pharmacol. 2010; 195: 459–484. DOI: 10.1007 / 978-3-540-79088-4_19.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 18. Рентукас Э., Царухас К., Капланис I, Короу Э, Николау М., Марафонитис G, Коккиноу С., Халиассос А., Мамалаки А., Куретас Д. и др. Связь активности теломеразы в МКПК с маркерами воспаления и эндотелиальной дисфункции у пациентов с метаболическим синдромом. PLoS One. 2012; 7: e35739. DOI: 10.1371 / journal.pone.0035739. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 21. Zhou X, Zhu H, Lu J. Экспрессия генов PTEN и hTERT и корреляция с гепатоцеллюлярной карциномой человека.Pathol Res Pract. 2015; 211: 316–319. DOI: 10.1016 / j.prp.2014.11.016. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 23. Ян Ц., Ли С., Ван М., Чанг А.К., Лю И, Чжао Ф., Сяо Л., Хань Л., Ван Д., Ли С., Ву Х. PTEN подавляет онкогенную функцию AIB1 за счет снижения стабильности его белка с помощью механизма, включающего Fbw7 альфа. . Молочный рак. 2013; 12:21. DOI: 10.1186 / 1476-4598-12-21. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 24. Jung S, Li C, Jeong D, Lee S, Ohk J, Park M, Han S, Duan J, Kim C, Yang Y и др.Онкогенная функция p34SEI-1 через NEDD4 1 опосредована убиквитинизацией / деградацией PTEN и активацией пути PI3K / AKT. Int J Oncol. 2013; 43: 1587–1595. DOI: 10.3892 / ijo.2013.2064. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 25. ОЭСР. Руководящий документ по распознаванию, оценке и использованию клинических признаков в качестве гуманных конечных точек для экспериментальных животных, используемых при оценке безопасности. ОЭСР; Париж: 2000. [Google Scholar] 26. Черичи Камарго IC, Баррейрос де Соуза Р., Фатима Паккола Мескита С., Чуффа Л.Г., Фрей Ф.Гистология яичников и оценка фолликулов у самок крыс, получавших деканоат нандролона и подвергавшихся физическим нагрузкам. Acta Biol Hung. 2009. 60: 253–261. DOI: 10.1556 / ABiol.60.2009.3.2. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 27. de Almeida Chuffa LG, de Souza RB, Frei F, de Fátima Paccola Mesquita S, Camargo IC. Деканоат нандролона и физическое усилие: гистологическая и морфометрическая оценка в матке взрослой крысы. Анат Рек (Хобокен) 2011; 294: 335–341. DOI: 10.1002 / ar.21314. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 28.Gopinathan S, O’Neill E, Rodriguez LA, Champ R, Phillips M, Nouraldeen A, Wendt M, Wilson AGE, Kramer JA. Токсикология наполнителей in vivo, обычно используемых при открытии лекарств на крысах. J Pharmacol Toxicol Methods. 2013; 68: 284–295. DOI: 10.1016 / j.vascn.2013.02.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 29. Healing G, Sulemann T, Cotton P, Harris J, Hargreaves A, Finney R, Kirk S, Schramm C, Garner C, Pivette P, Burdett L.Данные о безопасности 19 транспортных средств для использования в доклинических исследованиях на грызунах в течение 1 месяца: Введение гидроксипропил-β-циклодекстрина вызывает почечную токсичность.J Appl Toxicol. 2016; 36: 140–150. DOI: 10.1002 / jat.3155. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 30. Aye M, Di Giorgio C, De Mo M, Botta A, Perrin J, Courbiere B. Оценка генотоксичности трех криопротекторов, используемых для витрификации человеческих ооцитов: диметилсульфоксида, этиленгликоля и пропиленгликоля. Food Chem Toxicol. 2010; 48: 1905–1912. DOI: 10.1016 / j.fct.2010.04.032. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 31. Бертло-Рику А., Перрин Дж., Ди Джорджио С., де Мео М., Ботта А., Курбьер Б. Оценка генотоксичности 1,2-пропандиола (PrOH) на ооциты мышей с помощью анализа комет.Fertil Steril. 2011; 96: 1002–1007. DOI: 10.1016 / j.fertnstert.2011.07.1106. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 32. Каннингем Р.Л., Макгиннис М.Ю. Физическая провокация самцов крыс, подвергшихся воздействию пубертатных анаболических андрогенных стероидов, вызывает агрессию по отношению к самкам. Horm Behav. 2006; 50: 410–416. DOI: 10.1016 / j.yhbeh.2006.05.002. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 33. Matrisciano F, Modafferi AM, Togna GI, Barone Y, Pinna G, Nicoletti F, Scaccianoce S. Повторное лечение анаболическими андрогенными стероидами вызывает обратимые антидепрессантами изменения гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой оси, уровней BDNF и поведения.Нейрофармакология. 2010. 58: 1078–1084. DOI: 10.1016 / j.neuropharm.2010.01.015. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 34. Tucci P, Morgese MG, Colaianna M, Zotti M, Schiavone S, Cuomo V, Trabace L. Нейрохимические последствия злоупотребления стероидами: моноаминергические изменения, вызванные станозололом. Стероиды. 2012; 77: 269–275. DOI: 10.1016 / j.steroids.2011.12.014. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 35. Кара М., Озкагли Е., Фрагкиадаки П., Котил Т., Стивактакис П. Д., Спандидос Д. А., Цацакис А. М., Альпертунга Б. Определение повреждения ДНК и активности теломеразы у крыс, получавших станозолол.Exp Ther Med. 2017; 13: 614–618. DOI: 10.3892 / etm.2016.3974. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 36. Цицимпико Ц., Цацаракис М., Фрагкиадаки П., Коваци Л., Стивактакис П., Калогераки А., Куретас Д., Цацакис А. М.. Гистопатологические поражения, окислительный стресс и генотоксические эффекты в печени и почках после длительного воздействия диазинона и пропоксура на кроликов. Токсикология. 2013; 307: 109–114. DOI: 10.1016 / j.tox.2012.11.002. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 37. Сольбах П., Поттхофф А., Раатшен Х.Дж., Суда Б., Леманн Ю., Шнайдер А., Гебель М.Дж., Маннс М.П., ​​Фогель А.Гепатоцеллюлярная карцинома с положительным тестостерон-рецептором у 29-летнего бодибилдера с историей злоупотребления анаболическими андрогенными стероидами: отчет о болезни. BMC Gastroenterol. 2015; 15:60. DOI: 10.1186 / s12876-015-0288-0. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 38. Ливак К.Дж., Шмитген Т.Д. Анализ данных относительной экспрессии генов с использованием количественной ПЦР в реальном времени и метода 2 (-4Delta Delta C (T)). Методы. 2001; 25: 402–408. DOI: 10.1006 / meth.2001.1262. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 39.Кеслер Т., Сандху Р.С., Кришнамурти С. Гепатология: гепатоцеллюлярная карцинома у молодого человека, вторичная по отношению к злоупотреблению андрогенными анаболическими стероидами. J Gastroenterol Hepatol. 2014; 29: 1852. DOI: 10.1111 / jgh.12809. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 40. Боада Л. Д., Зумбадо М., Торрес С., Лопес А., Диас-Чико Б. Н., Кабрера Дж. Дж., Лусардо ОП. Оценка острых и хронических гепатотоксических эффектов анаболического андрогенного стероида станозолола у взрослых самцов крыс. Arch Toxicol. 1999. 73: 465–472. DOI: 10.1007 / s002040050636.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 41. Канаяма Дж., Хадсон Дж. И., Поуп Х. Дж., Младший. Долгосрочные психиатрические и медицинские последствия злоупотребления анаболическими андрогенными стероидами: надвигающаяся проблема общественного здравоохранения? Зависимость от наркотиков и алкоголя. 2008; 98: 1–12. DOI: 10.1016 / j.drugalcdep.2008.05.004. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 42. Орниш Д., Лин Дж., Чан Дж. М., Эпель Э, Кемп С., Вайднер Дж., Марлин Р., Френда С. Дж., Магбануа М. Дж. М., Даубенмьер Дж. И др. Влияние всесторонних изменений образа жизни на активность теломеразы и длину теломер у мужчин с подтвержденным биопсией раком простаты низкого риска: 5-летнее наблюдение за описательным пилотным исследованием.Ланцет Онкол. 2013; 14: 1112–1120. DOI: 10.1016 / S1470-2045 (13) 70366-8. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 43. Мишра С., Кумар Р., Малхотра Н., Сингх Н., Дада Р. Мягкий окислительный стресс полезен для поддержания длины теломер сперматозоидов. World J Methodol. 2016; 6: 163–170. DOI: 10.5662 / wjm.v6.i2.163. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 44. Зар Т., Грэбер С., Перацелла М.А. Распознавание, лечение и профилактика токсичности пропиленгликоля. Semin Dial. 2007. 20: 217–219. DOI: 10.1111 / j.1525-139X.2007.00280.x. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 45. Djojosubroto MW, Chin AC, Go N, Schaetzlein S, Manns MP, Gryaznov S, Harley CB, Rudolph KL. Антагонисты теломеразы GRN163 и GRN163L подавляют рост опухоли и повышают химиочувствительность гепатомы человека. Гепатология. 2005; 42: 1127–1136. DOI: 10.1002 / hep.20822. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 46. Василаки Ф., Цицимпико Ц., Цароухас К., Германакис I, Царди М., Каввалакис М., Озкагли Э., Куретас Д., Цацакис А. М.. Кардиотоксичность у кроликов после длительного приема нандролона деканоата.Toxicol Lett. 2016; 241: 143–151. DOI: 10.1016 / j.toxlet.2015.10.026. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 47. Пилати С., Летузе Э., Нолт Дж. К., Имбо С., Булай А., Кальдераро Дж., Пуссен К., Франкони А., Куши Дж., Моркретт Дж. И др. Геномное профилирование гепатоцеллюлярных аденом позволяет выявить повторяющиеся мутации, активирующие FRK, и механизмы злокачественной трансформации. Раковая клетка. 2014; 25: 428–441. DOI: 10.1016 / j.ccr.2014.03.005. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 49. Юнгерманн К., Кицманн Т. Зонирование паренхиматозного и непаренхиматозного метаболизма в печени.Анну Рев Нутр. 1996. 16: 179–203. DOI: 10.1146 / annurev.nu.16.070196.001143. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 50. Юнгерманн К. Метаболическое зонирование паренхимы печени. Semin Liver Dis. 1988. 8: 329–341. DOI: 10,1055 / с-2008-1040554. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 51. Сальвадор Дж. П., Санчес-Баеса Ф, Марко М. П.. Одновременное иммунохимическое определение станозолола и основного метаболита человека, 3′-гидроксистанозолола, в образцах мочи и сыворотки крови. Анальная биохимия. 2008; 376: 221–228. DOI: 10.1016 / j.ab.2008.02.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 52. Чилтон В.Л., Маркес Ф.З., Вест Дж., Канноуракис Дж., Берзиньш С.П., О’Брайен Б.Дж., Чарчар Ф.Дж. Острая физическая нагрузка приводит к регуляции генов, связанных с теломерами, и экспрессии микроРНК в иммунных клетках. PLoS One. 2014; 9: e
. DOI: 10.1371 / journal.pone.00. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 53. Ludlow AT, Gratidão L, Ludlow LW, Spangenburg EE, Roth SM. Острая физическая нагрузка активирует p38 MAPK и увеличивает экспрессию генов, защищающих теломеры, в сердечной мышце.Exp Physiol. 2017; 102: 397–410. DOI: 10.1113 / EP086189. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 54. Вардавас А.И., Стивактакис П.Д., Цацаракис М.Н., Фрагкиадаки П., Василаки Ф., Царди М., Дацери Г., Циаусис Дж., Алегакис А.К., Цицимпику С. и др. Длительное воздействие циперметрина и пиперонилбутоксида вызывает воспаление печени и почек и индуцирует генотоксичность у новозеландских белых кроликов-самцов. Food Chem Toxicol. 2016; 94: 250–259. DOI: 10.1016 / j.fct.2016.06.016. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 55.Хуан С.К., Чианг В.Д., Хуанг В.К., Хуанг С.Й., Сюй М.К., Лин В.Т. Гепатопротекторные эффекты упражнений по плаванию на крысиной модели индуцированного D-галактозой старения. Evid Based Complement Alternat Med. 2013; 2013: 275431. DOI: 10.1155 / 2013/275431. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 56. Yi X, Cao S, Chang B, Zhao D, Gao H, Wan Y, Shi J, Wei W., Guan Y. Влияние острых и хронических упражнений на сигнальный путь лептин-AMPK-ACC в печени у крыс с диабетом 2 типа . J Diabetes Res. 2013; 2013:

2.DOI: 10.1155 / 2013/

2. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 57. Петтерссон Дж., Хиндорф Ю., Перссон П., Бенгтссон Т., Мальмквист Ю., Веркстрём В., Экелунд М. Мышечные упражнения могут вызывать крайне патологические тесты функции печени у здоровых мужчин. Br J Clin Pharmacol. 2008. 65: 253–259. DOI: 10.1111 / j.1365-2125.2007.03001.x. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 58. Brustia R, Savier E, Scatton O. Физические упражнения у пациентов с циррозом: к реабилитации в листе ожидания трансплантации печени.Систематический обзор и метаанализ. Клин Рес Гепатол Гастроэнтерол. 2017 ноябрь 18; Epub впереди печати. [PubMed] [Google Scholar]

Прием станозолола в сочетании с упражнениями приводит к снижению активности теломеразы, возможно, связанному со старением печени

Int J Mol Med. 2018 июл; 42 (1): 405–413.

, # 1, * , # 1, * , 2 , 3 , 3 , 4 , 3 , 3 , 5 , 3 и 1

Эрен Озкагли

1 Кафедра фармацевтической токсикологии фармацевтического факультета

Мехтап Кара

1 Кафедра фармацевтической токсикологии фармацевтического факультета

и

Тугба Котил

2 Кафедра гистологии и эмбриологии медицинского факультета Стамбульского университета, Стамбул 34116, Турция

Персефони Фрагкиадаки

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион

Манолис Н.Цацаракис

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион

Кристина Цицимпику

4 Государственная химическая лаборатория Греции, 11521 Афины

Polychronis D. Stivaktakis

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион

Димитриос Цукалас

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион

Деметриос А.Спандидос

5 Лаборатория клинической вирусологии Медицинского факультета Критского университета, 71003 Ираклион, Греция

Аристидес М. Цацакис

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии Медицинского факультета Критского университета, 71003 Ираклион

Букет Альпертунга

1 Кафедра фармацевтической токсикологии фармацевтического факультета и

1 Кафедра фармацевтической токсикологии фармацевтического факультета и

2 Кафедра гистологии и эмбриологии медицинского факультета Стамбульского университета, Стамбул 34116, Турция

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион

4 Общая химическая государственная лаборатория Греции, 11521 Афины

5 Лаборатория клинической вирусологии Медицинского факультета Критского университета, 71003 Ираклион, Греция

# Внесен равный вклад.

Для корреспонденции: профессору Букету Альпертунга, кафедра фармацевтической токсикологии, фармацевтический факультет, Стамбульский университет, Беязит, Стамбул 34116, Турция, электронная почта: rt.ude.lubnatsi@agnutПрофессору Аристидесу М. Цацакису, Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинская школа, Университет Крита, ПО Box 1393, 71003 Heraklion, Greece, E-mail: [email protected]

* Внесено поровну

Получено 28 февраля 2018 г .; Принято 11 апреля 2018 г.

Эту статью цитировали в других статьях в PMC.
Заявление о доступности данных

Наборы данных, использованные и / или проанализированные в ходе текущего исследования, доступны у соответствующего автора по разумному запросу.

Реферат

Анаболические вещества — это допинговые вещества, которые обычно используются в спорте. Станозолол, 17α-алкилированное производное тестостерона, широко используется спортсменами и бодибилдерами. Некоторые медицинские и поведенческие побочные эффекты связаны со злоупотреблением анаболическими андрогенными стероидами (ААС), в то время как печень остается наиболее узнаваемым органом-мишенью.В настоящем исследовании изучалось влияние на печень введения станозолола крысам в высоких дозах, напоминающих дозы, применяемые для допинга, в присутствии или отсутствии физических упражнений. Станозолол и его метаболиты, 16-β-гидроксистанозолол и 3′-гидроксистанозолол, были обнаружены в печени крыс с помощью жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии (ЖХ-МС). Активность теломеразы, которая участвует в клеточном старении и онкогенезе, была обнаружена путем исследования уровней экспрессии обратной транскриптазы теломеразы (TERT) и фосфатазы и гомолога тензина (PTEN) в печени крыс, получавших станозолол.Станозолол индуцировал теломеразную активность на молекулярном уровне в ткани печени крыс, и упражнения обращали эту индукцию, отражая возможное преждевременное старение ткани печени. На экспрессию гена PTEN в печени крыс практически не влияли ни упражнения, ни введение станозолола.

Ключевые слова: станозолол, гомолог фосфатазы и тензина, обратная транскриптаза теломеразы, теломеразная активность, 16-β-гидроксистанозолол, 3′-гидроксистанозолол

Введение

Станозолол является анаболическим андрогенным стероидом, повышающим эффективность, повышающим эффективность.Среди всех ААС станозолол является одним из наиболее часто используемых стероидов профессиональными спортсменами и молодыми людьми для улучшения внешнего вида и работоспособности. Станозолол представляет собой 17α-алкилированное производное тестостерона с анаболическими и высокими андрогенными свойствами (1,2), и его использование в спорте запрещено Всемирным антидопинговым агентством (WADA) (3).

В прошлом ААС использовались только элитными спортсменами и бодибилдерами для целей допинга. Однако в настоящее время даже молодые люди злоупотребляют ААС в супрафизиологических дозах для улучшения внешнего вида (4,5).Сообщается, что станозолол является одним из наиболее часто используемых ААС (6), и он отвечает за несколько медицинских и поведенческих побочных эффектов, являясь признанным фактором риска заболеваний печени как у экспериментальных животных, так и у людей (7-13). . Станозолол широко биотрансформируется ферментативными путями в печени. Сообщалось, что основными метаболитами станозолола являются 3′-гидроксистанозолол, 4-β-гидроксистанозолол и 16-β-гидроксистанозолол (14,15). В целом, ААС проявляют свои эффекты посредством нескольких различных механизмов, таких как модуляция экспрессии рецепторов андрогенов (16).Неблагоприятные эффекты, связанные с печенью, чаще связаны с 17α-алкильными производными ААС и, как сообщается, не связаны с путем введения. Однако точные механизмы еще полностью не изучены (17).

Теломеры представляют собой гетерохроматиновые нуклеопротеидные комплексы на концах хромосом, участвующие в ряде основных биологических функций (). Известно, что теломеры играют ключевую роль в формировании и прогрессировании до 90% злокачественных новообразований. Теломеразная активность играет ключевую роль в клеточном старении и онкогенезе (18).Повышенная активность теломеразы обнаруживается в большинстве случаев рака человека (19). Теломераза — это рибонуклеопротеин, отвечающий за поддержание длины теломер. Ядро теломеразы состоит из двух компонентов: каталитической обратной транскриптазы теломеразы (TERT) и компонента теломеразной РНК (TERC) ().

Теломеры — это защитные колпачки хромосом (59) (адаптировано с разрешения Shutterstock).

Теломераза добавляет теломерные повторы (TTAGGG) к 3′-гидроксильному концу ведущей цепи теломеры.Компонент РНК служит шаблоном для добавления нуклеотидов. Это теломеразный комплекс, который состоит из компонента обратной транскриптазы (TERT), компонента РНК (TERC), белка дискерина и других связанных белков (NHP2, NOP10 и GAR1).

Уровень экспрессии мРНК TERT был изучен в качестве биомаркера, поскольку было продемонстрировано, что он является лимитирующим детерминантом активности теломеразы при различных злокачественных новообразованиях (20). Ген фосфатазы и белка-гомолога тензина (PTEN) кодирует белок-супрессор опухоли с фосфатазной активностью.Сообщалось, что частота гетерозиготности PTEN при гепатоцеллюлярной карциноме человека (ГЦК) человека снижается до 33% (21). PTEN участвует в подавлении активности теломеразы посредством регуляции активности TERT (22). PTEN является негативным регуляторным белком сигнального пути фосфоинозитид-3-киназы / AKT механизма регуляции выживания клеток и индуцирует клеточный апоптоз (23). PTEN предотвращает активацию AKT посредством дефосфорилирования фосфатидилинозитол (3,4,5) -трисфосфата (PIP3) до фосфатидилинозитол-4,5-бисфосфата (PIP2).Подавление PTEN связано с онкогенной активностью в клетке (24).

Целью этого исследования было изучить, по крайней мере, насколько нам известно, роль теломеразы в вызванной станозололом гепатотоксичности путем изучения корреляции между активностью теломеразы и уровнями экспрессии гена PTEN-TERT. Также была исследована биоаккумуляция станозолола и двух его основных метаболитов (3′-гидроксистанозолол и 16-β-гидроксистанозолол) в ткани печени, а также его связь с активностью теломеразы.

Материалы и методы

Эксперименты на животных

Всего было получено 34 крысы-самца Sprague-Dawley в возрасте 8 недель, которые разместили в помещениях для лабораторных животных Департамента лабораторных наук о животных Института экспериментальной медицины Стамбульского университета. (Стамбул, Турция) в соответствии с Комитетом по этике экспериментов на животных Стамбульского университета, HADYEK (номер утверждения 2013/100). Крысы были разделены на 5 групп следующим образом: i) контрольная (C) группа; ii) группу обработки пропилена (PG); iii) группу обработки станозололом (ST); iv) группа лечения и упражнений с пропиленом (PGE); и v) группа лечения станозололом и физических упражнений (STE).Животных размещали по 4 животных в одной металлической клетке и содержали в 12-часовом цикле темнота / свет при температуре 20–23 ° C. Количество крыс в экспериментальной группе, уход за крысами, обращение и используемые экспериментальные процедуры соответствовали руководящим принципам HADYEK. Вес крыс при покупке регистрировали и использовали для корректировки дозы (). Гуманными конечными точками, определенными в нашем исследовании, были боль, дистресс, неправильная осанка и судороги в соответствии с Руководящим документом ОЭСР (25). Ни у одного животного не было клинических признаков гуманных конечных точек, которые оправдывали бы их жертвоприношение до окончания эксперимента.Экспериментальный план исследования представлен в.

Таблица I

Вес крыс при покупке.

902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 3 264 902 группа 902 902 902 902 902 902 902 902
Количество крыс Вес крыс при покупке (г)
Контроль
1 259
2
4 264
5 282
Пропиленгликоль
1 255
2
2 261
5 272
Пропиленгликоль и упражнение
1 262
2 276 2 276
5 278
6 263 902 75
7 260
8 277
Стероидная группа
1 280
2 2902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 902 4 272
5 277
6 272
7 263
8 902 902 275
2 277
3 290
4 263
5 280
280
8 273

Таблица II

Experi мысленный дизайн исследования.

мл / кг пропиленгликоля в день
Группы Количество крыс Подкожные инъекции Упражнение
Контроль 5 Без инъекций Без упражнений
Без упражнений
Лечение станозололом 8 5 мг / кг станозолола в день Без упражнений
Лечение пропиленгликолем и упражнения 8 1 8 8 90 мл кг пропиленгликоля в день Плавание: 20 мин / день, 5 дней в неделю
Лечение станозололом и упражнения 8 5 мг / кг станозолола в день Плавание: 20 мин / день, 5 дней / неделя

Плавание было выбрано в качестве модели упражнений (26, 27) и началось за 1 неделю до схемы лечения, чтобы мальчики адаптироваться.Крыс плавали в прямоугольном полиэтиленовом резервуаре (длина 120 см × глубина 50 см × ширина 43 см), наполненном водой при температуре 29 ± 1 ° C. Во время экспериментов в течение 20 минут в день, 5 дней в неделю крыс подвергали плаванию после периода адаптации в течение 1 недели. Животных адаптировали к процессу плаванием в воде в течение 5 минут в течение первых 2 дней, а затем время плавания постепенно увеличивали до 5 минут в день до конечной продолжительности 20 минут на 5 день.

Пропиленгликоль (PG ) (Tekkim, Стамбул, Турция) использовался в качестве носителя для станозолола (Sigma, Schnelldorf, Германия).Известно, что PG является хорошим проводником для экспериментальных исследований in vivo (28,29). Однако сообщалось, что высокие концентрации PG могут вызывать повреждение ДНК в эукариотических клетках и ооцитах мышей (30,31). Подкожное введение было выбрано, а дозы были выбраны в соответствии с предыдущими исследованиями (32–34). Группы, подвергшиеся воздействию, получали однократную дозу PG (1 мл / кг) и ST (5 мл / кг) подкожно в течение 5 дней в неделю.

После 28 дней лечения животным была проведена легкая анестезия с использованием процента 1.9% диэтиловый эфир в анестезиологической камере и эвтаназия путем шейного вывиха, проводимая обученным персоналом. Были собраны образцы ткани печени и разделены на 2 секции. Один срез немедленно замораживали в жидком азоте и хранили при -80 ° C, а другой фиксировали 10% забуференным формалином и залитым парафином для гистохимического анализа.

Анализ жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии (ЖХ-МС)

Стандарты станозолола, 3′-гидроксистанозолола и 16-β-гидроксистанозолола в концентрациях 0,0.1, 0,25, 0,5 и 1 частей на миллион были приготовлены из стандартных исходных растворов с концентрацией 20 частей на миллион. Туринабол (LGC, Лидс, Великобритания) использовали в качестве внутреннего стандарта (IS) с целевыми ионами m / z 317,25 и m / z 335,25. Калибровочные кривые были получены путем измерения отношения площадей пиков целевых ионов к IS следующим образом: для станозолола m / z 370,4 , 352,3 и 329,35, для 3′-гидроксистанозолола m / z 386,4 , 345,35, для 16-β- гидроксистанозолол m / z 386,4 , 366,3 и 345,35 для IS туринабол () (ион m / z, используемый для количественной оценки, выделен жирным шрифтом).Образцы печени необработанных животных, которые дали отрицательные результаты (

Таблица III

Параметры анализа ЖХ-МС.

Агент Rt m / z target m / z m / z Mw
4α-гидроксистанозолол 9 9 902.4 345,35
4β-hydroxystanozolol 9,3 386,4 345,35
3-hydroxystanozolol 10,15 386,4 345,35 344,49
16-β-гидроксистанозолол 10,45 386,4 366,3 345,35 344,49
Станозолол 12.95 370,4 352,3 329,35 328,49
Туринабол (IS) 13,9 317,25 335,25 33470 каждый образец печени 0,1% механическая гомогенизация на высокой скорости в течение 2 мин с 1,0 мл воды. Гомогенаты сильно встряхивали и затем инкубировали в ультразвуковой бане в течение 10 мин. Затем добавляли 1,5 мл этилацетата и проводили экстракцию аналитов в течение 10 мин.Образцы центрифугировали при 1820 × g в течение 2 мин при 4 ° C. Супернатанты переносили в пустую пробирку и упаривали досуха в атмосфере азота при 30 ° C. После выпаривания добавляли 100 мкл л ацетонитрила и сильно встряхивали. Супернатанты переносили во флаконы, и 10 мкл мкл из них вводили в систему ЖХ-МС для анализа.

Система ЖХ-МС состоит из бинарного насоса ЖХ (Shimadzu Prominence, Киото, Япония), вакуумного дегазатора, автоматического пробоотборника и термостата для колонок.В качестве подвижной фазы был выбран градиент 0,1% муравьиной кислоты в воде (растворитель A) и ацетонитриле (растворитель B). Разделение аналитов было достигнуто на колонке для ВЭЖХ Discovery C18 (250 × 4,6 мм, 5 мкм, м), термостатированной при 30 ° C. Масс-спектрометр (LCMS-2010 EV; Shimadzu Prominence) в сочетании с интерфейсом химической ионизации при атмосферном давлении (APCI) и одиночным квадрупольным масс-фильтром использовался в выбранном положительном режиме ионного мониторинга (SIM). Температура интерфейса, CDL и теплового блока составляла 400, 200 и 200 ° C соответственно.Напряжение детектора составляло 1,5 кВ, поток распыляющего газа составлял 2,5 л / мин, а осушающий газ составлял 0,02 МПа.

Анализ активности теломеразы

Определение активности теломеразы в образцах ткани печени крысы выполняли количественно с использованием набора teloTAGGG telomerase PCR ELISA PLUS (Roche Diagnostic GmbH, Mannheim, Germany). Протокол набора следовал для оценки активности теломеразы, как описано ранее (35,36).

Оценка экспрессии гена

Выделение

РНК проводили из залитых парафином срезов ткани печени крысы с использованием выделения РНК High Pure FFPET (Roche Diagnostic GmbH) в соответствии с инструкциями производителя.Для синтеза кДНК использовали фиксированное количество РНК из каждого образца. кДНК получали с использованием набора Transcriptor First Strand cDNA Synthesis (Roche Diagnostic GmbH) в соответствии с инструкциями производителя. Уровни экспрессии генов TERT и PTEN анализировали с помощью количественной (в реальном времени) полимеразной цепной реакции (кПЦР) с использованием аппарата Light Cycler 480 (Roche Diagnostic GmbH) с анализом каталога Real Time Ready (Roche Diagnostic GmbH) в соответствии с инструкциями производителя. Последовательности праймеров были следующими: PTEN прямой, 5′-AGAACAAGATGCTCAAAAAGGACAA-3 ‘и обратный, 5′-TGTCAGGGTGAGCACAAGAT-3′; TERT вперед, 5’-GACATGGAGAACAAGCTGTTTGC-3 ‘; и обратный, 5’-ACAGGGAAGTTCACCACTGTC-3 ‘; и GAPDH прямой, 5’-TTCAACGGCACAGTCAAGG-3 ‘и обратный, 5′-CTCAGCACCAGCATCACC-3’.ПЦР-амплификации выполняли в соответствии с инструкциями производителя в трех экземплярах. Реакционную смесь без матрицы кДНК использовали в качестве отрицательного контроля. Уровни экспрессии (2 -ΔΔCt ) рассчитывали, как описано ранее (37,38).

Иммуногистохимический (ИГХ) анализ

ИГХ-анализы были выполнены с использованием наборов для определения Ultra Streptavidin HRP [BioLegend Sig-32248, набор для определения Ultra Streptavidin HRP (Multi-Specation, DAB)] и BioLegend Sig-32250, набор для обнаружения Ultra Streptavidin (Multi-views, AEC) (BioLegend, San Diego, CA, USA) для уровней экспрессии PTEN и TERT соответственно.Залитые парафином срезы помещали на предметные стекла Superfrost (Menzel-Gläser, Брауншвейг, Германия). После сушки в течение ночи был проведен ИГХ-анализ PTEN и TERT с использованием метода меченой стрептавидин-биотин-пероксидазы. Предметные стекла обрабатывали ксилолом и регидратировали в растворах этанола возрастающих классов. Извлечение антигена осуществляли путем кипячения предметных стекол в течение 5 мин / 3 раза в цитратном буфере (0,01 М). Для подавления активности эндогенной пероксидазы срезы ткани обрабатывали блокирующим реагентом 1 в течение 15 минут и промывали PBS.Все срезы инкубировали с блокирующим реагентом 2 в течение 5 минут при комнатной температуре, чтобы избежать неспецифического связывания. Инкубации поликлональных антител PTEN (251264) и TERT (250509) (оба от Abbiotec, Aachen, Germany) проводили в течение ночи при 4 ° C с разведениями 1/100. Слайды инкубировали со связывающим реагентом 4, а затем с реагентом для маркировки 5 в течение 20 минут при комнатной температуре. Слайды визуализировали хромогенами DAB и AEC, контрастировали гематоксилином Майера и, наконец, монтировали.Уровни экспрессии PTEN и TERT оценивали под световым микроскопом (Olympus BX40F4; Olympus, Токио, Япония). Анализы TERT и PTEN IHC были классифицированы невооруженным глазом на 4 категории на основе интенсивности окрашивания следующим образом: 0, нет окрашивания; +, слабое окрашивание; ++, умеренное окрашивание; и +++, сильное окрашивание). Анализ проводился с использованием считывающего устройства для одного слайда для минимизации вариабельности из-за субъективной оценки.

Статистический анализ

Средние значения ± стандартное отклонение и медиана были использованы для экспрессии уровней станозолола и его метаболитов, а также для PTEN, TERT и относительной теломеразной активности в процентах.Изменения между двумя значениями были выражены в виде относительных изменений в процентах или иным образом на основе следующей формулы: (фактическое изменение / контрольное значение) * 100%.

Тест Колмогорова-Смирнова с поправкой Лилиэфорса применялся для проверки нормальности непрерывных переменных. R Спирмена применяли для измерения двумерных корреляций между двумя непрерывными переменными (например, относительная активность теломеразы в процентах по сравнению с уровнями экспрессии гена 3′-гидроксистанозолола TERT). Непараметрический тест Краскела-Уоллиса и параметрический односторонний дисперсионный анализ ANOVA применялись для сравнения различий в уровнях станозолола и его метаболитов между исследуемыми группами (контрольная, станозолол, PG и группы упражнений).Непараметрические апостериорные сравнения оценивали с использованием тестов Данна (непараметрические) и HSD Тьюки для параметрических тестов. Для статистического анализа использовалось программное обеспечение IBM SPSS Statistics 21.0 (IBM Corp., Армонк, Нью-Йорк, США). Уровень 0,05 был установлен для принятия или отклонения нулевой гипотезы (статистическая значимость). Размеры выборок для отдельных анализов незначительно различались из-за того, что некоторые недостающие значения возникли из-за условий эксперимента.

Результаты

Тесты на нормальность

Тесты на нормальность показали, что только процентная относительная активность теломеразы сохранила нулевую гипотезу, предполагая нормальное распределение данных (P = 0.137). Все другие протестированные непрерывные переменные, такие как TERT, PTEN и 3′-гидроксистанозолол, не следовали нормальному распределению (P <0,01) (данные не показаны).

Биоаккумуляция станозолола и его метаболитов в тканях печени

Результаты обобщены в. Уровни станозолола и его метаболитов были незначительно выше в группе STE по сравнению с группой ST (P> 0,05).

Таблица IV

Уровни концентрации (нг / мг) станозолола и его метаболитов в группах станозолола (ST) и станозолола в сочетании с упражнениями (STE).

Относительное изменение 0,480
Агент Группа ST (средние значения ± стандартное отклонение) Группа ST (среднее ± стандартное отклонение) Манна-Уитни (значение P) %
Станозолол (нг / мг) ) 2,98 ± 1,01 3,89 ± 1,09 0,240 30,5
3′-гидроксистанозолол (нг / мг) 0,34 ± 0,06 0,44 ± 0,18 0,44 ± 0,18 0,480 0,480 16-β-гидроксистанозолол (нг / мг) 0.25 ± 0,11 0,32 ± 0,15 0,485 28,0

Оценка теломеразной активности и экспрессии генов

Уровни экспрессии генов PTEN и TERT и процент относительной теломеразной активности в исследуемых группах представлены в. Значительная разница наблюдалась для экспрессии гена TERT в различных группах (χ 2 = 17,585, df = 4, P <0,001). Основываясь на тесте Данна, упражнения снижали экспрессию TERT на (71,0%; P = 0,001), а введение ST увеличивало экспрессию TERT на (160%; P <0.001) по сравнению с группой PG. Следует отметить, что вызванное станозололом увеличение экспрессии TERT по сравнению с группой станозолола было ограничено (68,0%; P = 0,042) у животных, подвергшихся физической нагрузке. Аналогичная картина наблюдалась и для процентной активности теломеразы. На экспрессию гена PTEN практически не влияли ни упражнения, ни прием станозолола. Следует отметить, что не все значения, представленные выше, показаны в из-за большого количества попарных сравнений.

Таблица V

Уровни экспрессии генов PTEN и TERT (2 -ΔΔCt ) и% относительной активности теломеразы на группу.

Контроль 902 0,83 лечение пропиленгликоль 6
Параметры Группы N Среднее SD Сравнение групп
Экспрессия гена PTEN (2 −ΔΔCt2 ) Kruskal-Wallis
Обработка пропиленгликолем 5 0,37 0,25 χ 2 = 3,643,
Обработка станозололом 640 0,42 df = 4, P = 0,456
Лечение пропиленгликолем и упражнения 5 0,98 1,62
Станозолол 1,13
Экспрессия гена TERT (2 −ΔΔCt ) Контроль 5 0,40 0,41 Kruskal-Wallis
Обработка пропиленгликолем 2 5 78 2,66 χ 2 = 17,585,
Лечение станозололом 6 7,25 1,40 df = 4, P = 0,001
и пропиленгликоль 0,81 0,96
Лечение станозололом и физические упражнения 6 2,29 0,97
% относительная активность теломеразы 1 1 Контроль.30 0,58 ANOVA:
Обработка пропиленгликолем 5 1,92 0,96 F = 3,015, df = 4,
Обработка станозололом P = 0,040
Лечение пропиленгликолем и упражнения 5 0,76 0,61
Лечение станозололом и упражнения 6 1.33 0,96

Умеренная корреляция между относительной процентной активностью теломеразы и уровнями экспрессии гена TERT наблюдалась с использованием коэффициента корреляции Спирмена (r = 0,424, P = 0,028) (). Уровни 3′-гидроксистанозолола, измеренные в группах ST и STE, имели тенденцию отрицательно коррелировать с относительной процентной активностью теломеразы (r Спирмена r = -0,566, P = 0,055) (). Не наблюдали корреляции между любыми параметрами, контролируемыми с помощью станозолола и 16-β-гидроксистанозолола (данные не показаны).

Диаграмма разброса экспрессии гена TERT и относительной активности теломеразы в процентах. TERT, обратная транскриптаза теломеразы.

Диаграмма рассеяния 3′-гидроксистанозолола и относительная активность теломеразы в процентах.

Анализы ИГХ

Изображения окрашивания ИГХ показаны в, а результаты суммированы в. Уровни экспрессии гена PTEN наблюдались вокруг центральной вены и паренхимы. В группе STE окрашивание гепатоцитов, окружающих эти области, было умеренным.Анализ TERT IHC выявил сильное окрашивание в группе ST вокруг портального поля, центральной вены и паренхимы, в то время как упражнения ослабляли увеличение экспрессии гена TERT (умеренное окрашивание в группе STE). Таким образом, наши результаты показали, что упражнения оказывают положительное влияние на экспрессию гена PTEN, как показано на рис.

Иммуногистохимическое окрашивание белков PTEN и TERT во всех экспериментальных группах (шкала, 50 мкм мкм). Группы крыс были следующими: i) контрольная (C) группа; ii) группу обработки пропилена (PG); iii) группу обработки станозололом (ST); iv) группа лечения и упражнений с пропиленом (PGE); и v) группа лечения станозололом и физических упражнений (STE).PTEN, белок-гомолог фосфатазы и тензина, TERT, обратная транскриптаза теломеразы.

Таблица VI

Результаты подсчета для иммуногистохимических анализов PTEN и TERT.

Обсуждение

Станозолол — широко используемый и наиболее мощный ААС, ответственный за ряд побочных эффектов, включая сердечно-сосудистые, репродуктивные, поведенческие эффекты и гепатотоксичность (17).Насколько нам известно, это первое исследование, посвященное изучению вызванных станозололом молекулярных путей активности теломеразы в печени крыс и любых соответствующих эффектов физических упражнений. Станозолол вызывает внутрипеченочные структурные изменения с холестазом и увеличивает риск ГЦК (37). Кроме того, было обнаружено, что злоупотребление ААС в целом является причиной гепатоцеллюлярных аденом (12,39). Несмотря на то, что механизмы, ответственные за гепатотоксичность, вызванную станозололом, еще четко не идентифицированы, пролиферативные эффекты на клетки печени могут играть центральную роль в наблюдаемой гепатотоксичности (12,40,41).В нашем предыдущем исследовании мы продемонстрировали, что станозолол оказывает повреждающее действие на ДНК в лимфоцитах периферической крови, что, вероятно, связано с изменениями активности теломеразы (35). Хотя известно, что различные факторы окружающей среды повышают и понижают активность теломеразы, влияние физических упражнений на активность теломеразы еще не было четко идентифицировано (42). Было показано, что на длину теломер и активность теломеразы влияет несколько факторов, включая оксидативный стресс, психологический стресс и социально-экономический статус.Одним из возможных механизмов укорочения теломер является окислительный стресс из-за продуктов окисления оснований ДНК (8-OHdG) в гуаниновых или белковых аддуктах (43,44). Согласно недавним исследованиям, повышенная активность теломеразы обнаруживается почти в 90% случаев рака человека и в 80% случаев ГЦК. Кроме того, хорошо задокументировано, что большинство здоровых клеток не обладают теломеразной активностью (19,20,45). Результаты этого исследования продемонстрировали повышенные уровни относительной активности теломеразы в тканях печени в группе ST, в соответствии с нандролоном, другим хорошо известным ASS, который продемонстрировал аналогичные эффекты за счет увеличения активности теломеразы в зависимости от дозы как при ткань сердца и моноциты периферической крови (2,46).Это может представлять собой компенсирующий механизм восстановления на тканевом уровне, в то время как повышенные уровни циркулирующей активности теломеразы могут указывать на системное воспаление. Связь повышенной активности и экспрессии теломеразы с пролиферативными эффектами в этом исследовании вряд ли возникла из-за короткого времени воздействия (28 дней). В целом механизмы, лежащие в основе влияния ААС на активность теломеразы, не выяснены и остаются практически неизвестными.

TERT представляет собой каталитическую субъединицу теломеразы, которая играет роль в ее регуляции на уровне транскрипции.Сообщалось, что мутации TERT связаны с переходом от аденомы к карциноме в печени (47). Следовательно, изменения в регуляции и экспрессии TERT играют важную роль при ГЦК (48). Было показано, что ген-супрессор опухолей PTEN отрицательно коррелирует с белком TERT человека в тканях HCC (21). Следовательно, PTEN и TERT играют противоположные роли в канцерогенезе. Сообщалось, что PTEN косвенно регулирует активность TERT через путь PI3K-PKB / Akt при ГЦК человека (21).Согласно результатам настоящего исследования, не наблюдалось значительных изменений в уровнях экспрессии PTEN между группами. Однако экспрессия гена TERT была значительно увеличена при лечении ST. Упражнения обращали вспять увеличение экспрессии TERT, вызванное станозололом, особенно в паренхиме, где сообщается о метаболической зональности: высвобождение глюкозы из гликогена и посредством глюконеогенеза, утилизация аминокислот и детоксикация аммиака, защитный метаболизм, образование желчи и синтез определенных белков плазмы, такие как альбумин и фибриноген, происходят в основном в перивенальной зоне, тогда как утилизация глюкозы, метаболизм ксенобиотиков и образование других белков плазмы, таких как альфа-1-антитрипсин или альфа-фетопротеин, происходят преимущественно в перивенальной зоне (49,50).

В этом исследовании уровни 3′-гидроксистанозолола и 16-β-гидроксистанозолола, основных метаболитов станозолола, были определены в образцах ткани печени животных, получавших станозолол, и была определена доза-реакция между активностью теломеразы и TERT / PTEN. экспрессия генов была определена. Измеренные уровни 3′-гидроксистанозолола в группах ST и STE были связаны с процентной относительной теломеразной активностью, тогда как для уровней станозолола или 16-β-гидроксистанозолола никакой связи не наблюдалось.Это может быть связано с тем, что 3′-гидроксистанозолол является наиболее мощным метаболитом станозолола (2,51).

Несколько исследований показали, что физические упражнения увеличивают активность теломеразы в различных типах клеток (52,53). Однако, насколько нам известно, на сегодняшний день нет доступных исследований, изучающих влияние станозолола на активность теломеразы в присутствии / отсутствии упражнений, за исключением нашего предыдущего исследования, которое было сосредоточено на циркуляции активности теломеразы в мононуклеарных клетках периферической крови (PBMCs). ) (35).Наши результаты показали повышение активности теломеразы и экспрессии TERT в ткани печени, что может быть связано либо с повышенным риском пролиферации из-за лечения станозололом (10), что маловероятно для такого короткого периода воздействия, либо может представлять собой механизм противодействия ( 54). Упражнения обращают вспять вызванное станозололом повышение активности теломеразы. Ряд исследований подтвердил, что упражнения обладают гепатопротекторным действием. Huang и др. продемонстрировали, что 12-недельная программа упражнений по плаванию подавляла маркеры старения и подавляла регуляцию воспалительных медиаторов в тканях печени у крыс, вызванных D-галактозой (55).Yi и др. продемонстрировали, что как острые, так и хронические упражнения оказывают профилактическое действие на печень крыс с диабетом 2 типа (56). С другой стороны, сообщалось, что физические упражнения увеличивают количество печеночных ферментов у людей (57), и существуют опасения относительно влияния физических упражнений на портальную гипертензию у пациентов с циррозом печени (58).

В заключение, станозолол индуцирует активность теломеразы на молекулярном уровне, и упражнения обращают эту индукцию вспять, по крайней мере, в отношении экспрессии TERT.Это может отражать преждевременное старение тканей из-за снижения активности теломеразы. Необходимы будущие исследования, чтобы изучить механизмы, с помощью которых упражнения могут быть использованы для предотвращения неблагоприятного воздействия станазолола на здоровье, и для выяснения молекулярных гепатоцеллюлярных механизмов побочных эффектов, вызванных станозололом.

Благодарности

Авторы хотели бы поблагодарить доктора Алегакиса Афанасиоса за его ценную помощь в статистических советах и ​​комментариях.

Сокращения

Группы Оценка PTEN IHC a Оценка TERT IHC a
Control + +
0
Лечение станозололом + +++
Лечение пропиленгликолем и упражнения + +
Лечение станозололом и упражнения ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++
Агентство HCC

моноклональная кровь

2/

Так написано в бутылках. Оба препарата редко назначаются в одно и то же время, и оба выполняют разные функции в организме. Вы не должны принимать ибупрофен с преднизоном, если только ваш врач не сказал вам об этом, туринабол или оксандролон.Прошли те времена, когда бодибилдинг ассоциировался с использованием стероидов. Бодибилдеры в прошлом, которые хотели быстрых результатов, обычно прибегали к использованию стероидов для ускорения своих усилий по увеличению массы тела, туринаболу против данабола. Принимайте стероидные препараты после полноценной еды или с антацидами, так как это может помочь уменьшить раздражение желудка. Стероиды могут повысить аппетит, туринабол против данабола. Прошли те времена, когда бодибилдинг ассоциировался с использованием стероидов. Бодибилдеры в прошлом, которые хотели быстрых результатов, обычно прибегали к использованию стероидов для ускорения своих усилий по увеличению массы тела, туринаболу против данабола.Bulking Stack CrazyBulk состоит из 4 самых продаваемых мощных продуктов для наращивания, которые взаимодействуют друг с другом для создания идеальной анаболической среды, которая позволит вашему телу нарастить мышцы в кратчайшие сроки, туринабол против данабола. Набор Bulking Stack состоит из следующих таблеток для набора массы: 1 флакон D-Bal (альтернатива Dianabol) 1 флакон Testo-Max (альтернатива Sustanon) 1 флакон DecaDuro (альтернатива Deca Durabolin) 1 флакон Trenorol (альтернатива тренболону) Упаковка также включает бесплатное руководство по наращиванию массы.Глазное давление у человека может повыситься после нескольких недель приема стероидов, туринабола по сравнению с данаболом. Однако, согласно одному обзору 2017 года, у некоторых людей глазное давление может повыситься только через час после приема стероидов. Эти лекарства по закону выписываются поставщиками медицинских услуг, но эта группа лекарств часто используется незаконно и злоупотребляется, чтобы помочь улучшить спортивные результаты и улучшить внешний вид. При использовании в хорошо питаемом теле анаболические стероиды вызывают увеличение веса в первую очередь из-за увеличения мышечной массы, туринабол по сравнению с анадролом.Кардарин стимулирует в организме так называемый рецептор, активируемый пролифератором пероксисом (PPAR), в сравнении с туринаболом и данаболом. PPAR, содержащийся в мышечной и жировой ткани, помогает регулировать сжигание жира, холестерин, развитие мышц и восстановление. Наконец, поработайте со своим врачом, чтобы определить правильные виды и количество добавок для вашего здоровья: туринабол или станозолол. Добавки не обязательно должны быть испорченными, чтобы быть опасными. Наши тела полны полезных бактерий. Когда мы принимаем антибиотики от бактерий, вызывающих у нас болезни, уровень полезных бактерий также снижается, и часто мы остаемся с побочными эффектами, такими как желудочно-кишечные расстройства, пока наши тела не вернутся в равновесие, туринабол против оксандролона.

Популярные стероиды:

Cernos Gel 10 мг

5000 МЕ ХГЧ + Бактериальная вода

Провирон 25 мг (50 таблеток)

Gen-Shi Laboratories

O0004 таблетки)

Метенолонацетат

Трен Эйс 50 мг — Трен Энан 50 мг — Трен Гекс 50 мг

Анавар 10 мг (50 таблеток)

Оксаб

Тестостерон

1-Test Cyp 100 Dragon Pharma

Оксандролон

Быстрая доставка: Нью-Йорк, Лос-Анджелес, Чикаго, Хьюстон, Феникс, Филадельфия, Сан-Антонио, Сан-Диего, Даллас, Детройт, Сан-Хосе, Индианаполис, Джексонвилл, Сан-Франциско, Хемпстед, Колумбус, Остин, Мемфис, Балтимор, Шарлотта, Форт.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

AAS анаболический андрогенный стероид
TERT теломераза обратная транскриптаза
TERC 902
TERC теломераза 902 WRNA компонент теломераза RNA
гепатоцеллюлярная карцинома
PG пропиленгликоль
IS внутренний стандарт
APCI химическая ионизация при атмосферном давлении Финансирование

Это исследование было поддержано Научно-исследовательскими проектами Стамбульского университета (грант №54169-24416).

Доступность данных и материалов

Наборы данных, использованные и / или проанализированные в ходе текущего исследования, доступны у соответствующего автора по обоснованному запросу.

Вклад авторов

EO, MK, AMT, BA и DAS задумали и разработали исследование, написали рукопись и внесли ценные предложения при подготовке рукописи. MK, TK, PF и MNT выполнили LC-MS анализ, оценку активности теломеразы и экспрессии генов; CT, PDS и DT выполнили статистический анализ и интерпретацию данных.EO, MK и BA внесли свой вклад в заявку на финансирование. Все авторы читали и одобрили окончательный вариант рукописи.

Одобрение этики и согласие на участие

Эксперименты на животных были одобрены Комитетом по этике экспериментов на животных Стамбульского университета, HADYEK (номер разрешения 2013/100).

Согласие на публикацию

Не применимо.

Конкурирующие интересы

DAS является главным редактором журнала, но не принимал личного участия в процессе рецензирования или какого-либо влияния с точки зрения вынесения окончательного решения по этой статье.

Ссылки

1. Balcells G, Matabosch X, Ventura R. Обнаружение метаболитов O- и N-сульфата станозолола и их оценка в качестве дополнительных маркеров при допинг-контроле. Анальный тест на наркотики. 2017; 9: 1001–1010. DOI: 10.1002 / dta.2107. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 2. Цицимпико Ц., Василаки Ф., Царухас К., Фрагкиадаки П., Царди М., Гутзурелас Н., Непка Ц., Калогераки А., Херетис I, Эпитропаки З. и др. Нефротоксичность у кроликов после длительного приема нандролона деканоата. Toxicol Lett.2016; 259: 21–27. DOI: 10.1016 / j.toxlet.2016.06.1122. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 3. Всемирное антидопинговое агентство Список запрещенных веществ и методов за 2017 год. https://www.wada-ama.org/. Проверено 14 февраля 2018 г. 4. Kioukia-Fougia N, Georgiadis N, Tsarouhas K, Vasilaki F, Fragiadaki P, Meimeti E, Tsitsimpikou C. Синтетические и натуральные пищевые добавки: «союзники» здоровья или риски для общественного здоровья. Недавние открытия Pat Inflamm Allergy Drug. 2017; 10: 72–85. DOI: 10,2174 / 1872213X106661603700.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 5. Цицимпику С., Хрисостому Н., Папалексис П., Царухас К., Цацакис А., Джамуртас А. Использование пищевых добавок спортсменами-любителями в Афинах, Греция. Int J Sport Nutr Exerc Exerc Metab. 2011; 21: 377–384. DOI: 10.1123 / ijsnem.21.5.377. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 6. Саго Д., Мольде Х., Андреассен С.С., Торсхайм Т., Паллесен С. Глобальная эпидемиология использования анаболических андрогенных стероидов: метаанализ и мета-регрессионный анализ. Ann Epidemiol. 2014; 24: 383–398.DOI: 10.1016 / j.annepidem.2014.01.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 7. Ампуэро Дж., Гарсия Э.С., Лоренцо М.М., Калле Р, Ферреро П., Гомес МР. Вызванный станозололом мягкий холестаз. Гастроэнтерол Гепатол. 2014; 37: 71–72. DOI: 10.1016 / j.gastrohep.2013.09.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 8. Баусерман Л.Л., Сарителли А.Л., Герберт П.Н. Влияние кратковременного приема станозолола на липопротеины сыворотки крови при печеночной липазной недостаточности. Обмен веществ. 1997; 46: 992–996. DOI: 10.1016 / S0026-0495 (97) -5. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 9.Эль-Сераг HB, Крамер Дж., Дуан З., Канвал Ф. Расовые различия в прогрессировании цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы у ветеранов, инфицированных ВГС. Am J Gastroenterol. 2014; 109: 1427–1435. DOI: 10.1038 / ajg.2014.214. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 10. Hansma P, Diaz FJ, Njiwaji C. Смертельный разрыв кисты печени из-за использования анаболических стероидов: презентация случая. Am J Forensic Med Pathol. 2016; 37: 21–22. DOI: 10.1097 / PAF.0000000000000218. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 11. Харкин К.Р., Коуэн Л.А., Эндрюс Г.А., Басараба Р.Дж., Фишер Дж.Р., Дебоуз Л.Дж., Руш Дж.К., Гульельмино М.Л., Кирк, Калифорния.Гепатотоксичность станозолола у кошек. J Am Vet Med Assoc. 2000. 217: 681–684. DOI: 10.2460 / javma.2000.217.681. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 12. Сокас Л., Зумбадо М., Перес-Лусардо О., Рамос А., Перес С., Эрнандес Дж. Р., Боада Л. Д.. Гепатоцеллюлярные аденомы, связанные со злоупотреблением анаболическими андрогенными стероидами у бодибилдеров: отчет о двух случаях и обзор литературы. Br J Sports Med. 2005; 39: e27. DOI: 10.1136 / bjsm.2004.013599. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 13. Стимак Д., Милич С., Динтиньяна Р.Д., Ковач Д., Ристич С.Андрогенный / анаболический стероид-индуцированный токсический гепатит. J Clin Gastroenterol. 2002. 35: 350–352. DOI: 10.1097 / 00004836-200210000-00013. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 14. Дешмук Н.И., Захар Г., Петроци А., Секели А.Д., Баркер Дж., Нотон Д.П. Определение станозолола и 3′-гидроксистанозолола в шерсти, моче и сыворотке крыс с использованием тандемной масс-спектрометрии с жидкостной хроматографией. Chem Cent J. 2012; 6: 162. DOI: 10.1186 / 1752-153X-6-162. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 15. Mateus-Avois L, Mangin P, Saugy M.Использование ионной газовой хроматографии-множественной масс-спектрометрии для обнаружения и подтверждения следовых уровней 3′-гидроксистанозолола в моче для допинг-контроля. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2005; 816: 193–201. DOI: 10.1016 / j.jchromb.2004.11.033. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 17. Бюттнер А., Тим Д. Побочные эффекты анаболических андрогенных стероидов: патологические данные и взаимосвязь между структурой и активностью. Handb Exp Pharmacol. 2010; 195: 459–484. DOI: 10.1007 / 978-3-540-79088-4_19.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 18. Рентукас Э., Царухас К., Капланис I, Короу Э, Николау М., Марафонитис G, Коккиноу С., Халиассос А., Мамалаки А., Куретас Д. и др. Связь активности теломеразы в МКПК с маркерами воспаления и эндотелиальной дисфункции у пациентов с метаболическим синдромом. PLoS One. 2012; 7: e35739. DOI: 10.1371 / journal.pone.0035739. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 21. Zhou X, Zhu H, Lu J. Экспрессия генов PTEN и hTERT и корреляция с гепатоцеллюлярной карциномой человека.Pathol Res Pract. 2015; 211: 316–319. DOI: 10.1016 / j.prp.2014.11.016. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 23. Ян Ц., Ли С., Ван М., Чанг А.К., Лю И, Чжао Ф., Сяо Л., Хань Л., Ван Д., Ли С., Ву Х. PTEN подавляет онкогенную функцию AIB1 за счет снижения стабильности его белка с помощью механизма, включающего Fbw7 альфа. . Молочный рак. 2013; 12:21. DOI: 10.1186 / 1476-4598-12-21. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 24. Jung S, Li C, Jeong D, Lee S, Ohk J, Park M, Han S, Duan J, Kim C, Yang Y и др.Онкогенная функция p34SEI-1 через NEDD4 1 опосредована убиквитинизацией / деградацией PTEN и активацией пути PI3K / AKT. Int J Oncol. 2013; 43: 1587–1595. DOI: 10.3892 / ijo.2013.2064. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 25. ОЭСР. Руководящий документ по распознаванию, оценке и использованию клинических признаков в качестве гуманных конечных точек для экспериментальных животных, используемых при оценке безопасности. ОЭСР; Париж: 2000. [Google Scholar] 26. Черичи Камарго IC, Баррейрос де Соуза Р., Фатима Паккола Мескита С., Чуффа Л.Г., Фрей Ф.Гистология яичников и оценка фолликулов у самок крыс, получавших деканоат нандролона и подвергавшихся физическим нагрузкам. Acta Biol Hung. 2009. 60: 253–261. DOI: 10.1556 / ABiol.60.2009.3.2. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 27. de Almeida Chuffa LG, de Souza RB, Frei F, de Fátima Paccola Mesquita S, Camargo IC. Деканоат нандролона и физическое усилие: гистологическая и морфометрическая оценка в матке взрослой крысы. Анат Рек (Хобокен) 2011; 294: 335–341. DOI: 10.1002 / ar.21314. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 28.Gopinathan S, O’Neill E, Rodriguez LA, Champ R, Phillips M, Nouraldeen A, Wendt M, Wilson AGE, Kramer JA. Токсикология наполнителей in vivo, обычно используемых при открытии лекарств на крысах. J Pharmacol Toxicol Methods. 2013; 68: 284–295. DOI: 10.1016 / j.vascn.2013.02.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 29. Healing G, Sulemann T, Cotton P, Harris J, Hargreaves A, Finney R, Kirk S, Schramm C, Garner C, Pivette P, Burdett L.Данные о безопасности 19 транспортных средств для использования в доклинических исследованиях на грызунах в течение 1 месяца: Введение гидроксипропил-β-циклодекстрина вызывает почечную токсичность.J Appl Toxicol. 2016; 36: 140–150. DOI: 10.1002 / jat.3155. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 30. Aye M, Di Giorgio C, De Mo M, Botta A, Perrin J, Courbiere B. Оценка генотоксичности трех криопротекторов, используемых для витрификации человеческих ооцитов: диметилсульфоксида, этиленгликоля и пропиленгликоля. Food Chem Toxicol. 2010; 48: 1905–1912. DOI: 10.1016 / j.fct.2010.04.032. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 31. Бертло-Рику А., Перрин Дж., Ди Джорджио С., де Мео М., Ботта А., Курбьер Б. Оценка генотоксичности 1,2-пропандиола (PrOH) на ооциты мышей с помощью анализа комет.Fertil Steril. 2011; 96: 1002–1007. DOI: 10.1016 / j.fertnstert.2011.07.1106. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 32. Каннингем Р.Л., Макгиннис М.Ю. Физическая провокация самцов крыс, подвергшихся воздействию пубертатных анаболических андрогенных стероидов, вызывает агрессию по отношению к самкам. Horm Behav. 2006; 50: 410–416. DOI: 10.1016 / j.yhbeh.2006.05.002. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 33. Matrisciano F, Modafferi AM, Togna GI, Barone Y, Pinna G, Nicoletti F, Scaccianoce S. Повторное лечение анаболическими андрогенными стероидами вызывает обратимые антидепрессантами изменения гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой оси, уровней BDNF и поведения.Нейрофармакология. 2010. 58: 1078–1084. DOI: 10.1016 / j.neuropharm.2010.01.015. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 34. Tucci P, Morgese MG, Colaianna M, Zotti M, Schiavone S, Cuomo V, Trabace L. Нейрохимические последствия злоупотребления стероидами: моноаминергические изменения, вызванные станозололом. Стероиды. 2012; 77: 269–275. DOI: 10.1016 / j.steroids.2011.12.014. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 35. Кара М., Озкагли Е., Фрагкиадаки П., Котил Т., Стивактакис П. Д., Спандидос Д. А., Цацакис А. М., Альпертунга Б. Определение повреждения ДНК и активности теломеразы у крыс, получавших станозолол.Exp Ther Med. 2017; 13: 614–618. DOI: 10.3892 / etm.2016.3974. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 36. Цицимпико Ц., Цацаракис М., Фрагкиадаки П., Коваци Л., Стивактакис П., Калогераки А., Куретас Д., Цацакис А. М.. Гистопатологические поражения, окислительный стресс и генотоксические эффекты в печени и почках после длительного воздействия диазинона и пропоксура на кроликов. Токсикология. 2013; 307: 109–114. DOI: 10.1016 / j.tox.2012.11.002. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 37. Сольбах П., Поттхофф А., Раатшен Х.Дж., Суда Б., Леманн Ю., Шнайдер А., Гебель М.Дж., Маннс М.П., ​​Фогель А.Гепатоцеллюлярная карцинома с положительным тестостерон-рецептором у 29-летнего бодибилдера с историей злоупотребления анаболическими андрогенными стероидами: отчет о болезни. BMC Gastroenterol. 2015; 15:60. DOI: 10.1186 / s12876-015-0288-0. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 38. Ливак К.Дж., Шмитген Т.Д. Анализ данных относительной экспрессии генов с использованием количественной ПЦР в реальном времени и метода 2 (-4Delta Delta C (T)). Методы. 2001; 25: 402–408. DOI: 10.1006 / meth.2001.1262. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 39.Кеслер Т., Сандху Р.С., Кришнамурти С. Гепатология: гепатоцеллюлярная карцинома у молодого человека, вторичная по отношению к злоупотреблению андрогенными анаболическими стероидами. J Gastroenterol Hepatol. 2014; 29: 1852. DOI: 10.1111 / jgh.12809. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 40. Боада Л. Д., Зумбадо М., Торрес С., Лопес А., Диас-Чико Б. Н., Кабрера Дж. Дж., Лусардо ОП. Оценка острых и хронических гепатотоксических эффектов анаболического андрогенного стероида станозолола у взрослых самцов крыс. Arch Toxicol. 1999. 73: 465–472. DOI: 10.1007 / s002040050636.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 41. Канаяма Дж., Хадсон Дж. И., Поуп Х. Дж., Младший. Долгосрочные психиатрические и медицинские последствия злоупотребления анаболическими андрогенными стероидами: надвигающаяся проблема общественного здравоохранения? Зависимость от наркотиков и алкоголя. 2008; 98: 1–12. DOI: 10.1016 / j.drugalcdep.2008.05.004. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 42. Орниш Д., Лин Дж., Чан Дж. М., Эпель Э, Кемп С., Вайднер Дж., Марлин Р., Френда С. Дж., Магбануа М. Дж. М., Даубенмьер Дж. И др. Влияние всесторонних изменений образа жизни на активность теломеразы и длину теломер у мужчин с подтвержденным биопсией раком простаты низкого риска: 5-летнее наблюдение за описательным пилотным исследованием.Ланцет Онкол. 2013; 14: 1112–1120. DOI: 10.1016 / S1470-2045 (13) 70366-8. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 43. Мишра С., Кумар Р., Малхотра Н., Сингх Н., Дада Р. Мягкий окислительный стресс полезен для поддержания длины теломер сперматозоидов. World J Methodol. 2016; 6: 163–170. DOI: 10.5662 / wjm.v6.i2.163. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 44. Зар Т., Грэбер С., Перацелла М.А. Распознавание, лечение и профилактика токсичности пропиленгликоля. Semin Dial. 2007. 20: 217–219. DOI: 10.1111 / j.1525-139X.2007.00280.x. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 45. Djojosubroto MW, Chin AC, Go N, Schaetzlein S, Manns MP, Gryaznov S, Harley CB, Rudolph KL. Антагонисты теломеразы GRN163 и GRN163L подавляют рост опухоли и повышают химиочувствительность гепатомы человека. Гепатология. 2005; 42: 1127–1136. DOI: 10.1002 / hep.20822. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 46. Василаки Ф., Цицимпико Ц., Цароухас К., Германакис I, Царди М., Каввалакис М., Озкагли Э., Куретас Д., Цацакис А. М.. Кардиотоксичность у кроликов после длительного приема нандролона деканоата.Toxicol Lett. 2016; 241: 143–151. DOI: 10.1016 / j.toxlet.2015.10.026. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 47. Пилати С., Летузе Э., Нолт Дж. К., Имбо С., Булай А., Кальдераро Дж., Пуссен К., Франкони А., Куши Дж., Моркретт Дж. И др. Геномное профилирование гепатоцеллюлярных аденом позволяет выявить повторяющиеся мутации, активирующие FRK, и механизмы злокачественной трансформации. Раковая клетка. 2014; 25: 428–441. DOI: 10.1016 / j.ccr.2014.03.005. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 49. Юнгерманн К., Кицманн Т. Зонирование паренхиматозного и непаренхиматозного метаболизма в печени.Анну Рев Нутр. 1996. 16: 179–203. DOI: 10.1146 / annurev.nu.16.070196.001143. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 50. Юнгерманн К. Метаболическое зонирование паренхимы печени. Semin Liver Dis. 1988. 8: 329–341. DOI: 10,1055 / с-2008-1040554. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 51. Сальвадор Дж. П., Санчес-Баеса Ф, Марко М. П.. Одновременное иммунохимическое определение станозолола и основного метаболита человека, 3′-гидроксистанозолола, в образцах мочи и сыворотки крови. Анальная биохимия. 2008; 376: 221–228. DOI: 10.1016 / j.ab.2008.02.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 52. Чилтон В.Л., Маркес Ф.З., Вест Дж., Канноуракис Дж., Берзиньш С.П., О’Брайен Б.Дж., Чарчар Ф.Дж. Острая физическая нагрузка приводит к регуляции генов, связанных с теломерами, и экспрессии микроРНК в иммунных клетках. PLoS One. 2014; 9: e
. DOI: 10.1371 / journal.pone.00. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 53. Ludlow AT, Gratidão L, Ludlow LW, Spangenburg EE, Roth SM. Острая физическая нагрузка активирует p38 MAPK и увеличивает экспрессию генов, защищающих теломеры, в сердечной мышце.Exp Physiol. 2017; 102: 397–410. DOI: 10.1113 / EP086189. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 54. Вардавас А.И., Стивактакис П.Д., Цацаракис М.Н., Фрагкиадаки П., Василаки Ф., Царди М., Дацери Г., Циаусис Дж., Алегакис А.К., Цицимпику С. и др. Длительное воздействие циперметрина и пиперонилбутоксида вызывает воспаление печени и почек и индуцирует генотоксичность у новозеландских белых кроликов-самцов. Food Chem Toxicol. 2016; 94: 250–259. DOI: 10.1016 / j.fct.2016.06.016. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 55.Хуан С.К., Чианг В.Д., Хуанг В.К., Хуанг С.Й., Сюй М.К., Лин В.Т. Гепатопротекторные эффекты упражнений по плаванию на крысиной модели индуцированного D-галактозой старения. Evid Based Complement Alternat Med. 2013; 2013: 275431. DOI: 10.1155 / 2013/275431. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 56. Yi X, Cao S, Chang B, Zhao D, Gao H, Wan Y, Shi J, Wei W., Guan Y. Влияние острых и хронических упражнений на сигнальный путь лептин-AMPK-ACC в печени у крыс с диабетом 2 типа . J Diabetes Res. 2013; 2013:

2.DOI: 10.1155 / 2013/

2. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 57. Петтерссон Дж., Хиндорф Ю., Перссон П., Бенгтссон Т., Мальмквист Ю., Веркстрём В., Экелунд М. Мышечные упражнения могут вызывать крайне патологические тесты функции печени у здоровых мужчин. Br J Clin Pharmacol. 2008. 65: 253–259. DOI: 10.1111 / j.1365-2125.2007.03001.x. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 58. Brustia R, Savier E, Scatton O. Физические упражнения у пациентов с циррозом: к реабилитации в листе ожидания трансплантации печени.Систематический обзор и метаанализ. Клин Рес Гепатол Гастроэнтерол. 2017 ноябрь 18; Epub впереди печати. [PubMed] [Google Scholar]

Туринабол против анавара, туринабол против станозолола — Профиль — iRes-Geo Technology Ltd Forum

Туринабол против анавара, туринабол против станозолола — Продажа юридических стероидов

Эти потенциальные эффекты могут принести пользу различным группам людей, туринаболу по сравнению с анаваром.Спортсмены, стремящиеся улучшить скорость и мощность. В мире спорта спортсмены постоянно ищут способы получить преимущество в соревнованиях. В то время как продвинутые силовые и кондиционирующие упражнения, а также питание имеют большое значение в этом отношении, некоторые спортсмены идут еще дальше, принимая препараты, повышающие работоспособность (PED). ААС являются одними из основных PED, используемых спортсменами.
Принимайте добавку не менее двух месяцев в сочетании с правильным питанием и физическими упражнениями для достижения оптимальных результатов, туринабол или анавар.

Туринабол против станозолола

Туринабол против анавара И туринабол, и анавар считаются мягкими пероральными стероидами. Хотя, как ни странно, оба препарата не вызывают значительной задержки воды («сухой стероид»), первый лучше подходит для наращивания мышечной массы, в то время как последний считается отличным стероидом перед соревнованиями (лучше кондиционирует мышцы и укрепляет их для соревнований по телосложению). Только один вопрос. Доза для цикла, который вы написали, туринабол 30 — 50 мг, анавар 50 мг ред. Было бы хорошо сделать это tbol 30 var 30 в течение 6 недель.Анавар vs винстрол: различия. Несмотря на то, что эти 2 анаболических стероида очень похожи, они все же разные. Основное и самое большое различие между этими двумя состоит в том, что при сравнении двух соединений миллиграмм на миллиграмм — винстрол будет намного более мощным, чем анавар. Анавар и дианабол — это два совершенно разных анаболических и андрогенных стероида, они оба являются производными тестостерона, однако анавар намного безопаснее в использовании и гораздо менее токсичен для печени, чем дианабол, если на самом деле они оба имеют полную разницу.Туринабол — это пероральный стероид, который обычно давали молодым спортсменам из восточной Германии, участвовавшим в соревнованиях 1970-х и 80-х годов. Куинн объясняет, что наркотики возвращаются в бейсбол высшей лиги. Пожалуйста, присоединяйтесь к обсуждению винстрола, анавара и туринабола в категории анаболических стероидов. Отрывок: просто хотел посмотреть, какой из «стековых» здесь самый популярный. Существует явное сходство с точки зрения способности удерживать азот, которым обладают оба продукта, и схожи также их соответствующие способности повышать количество эритроцитов (хотя туринабол имеет явное преимущество в этой способности.Как и большинство соединений, таких как анавар, туринабол был признан медицинскими экспертами и врачами за его способность обеспечивать несколько четкое разделение его андрогенных и анаболических эффектов. Это причина, по которой его в основном сравнивают с такими соединениями, как примоболан или анавар. Теперь, если бы я выбрал туринабол, это означало бы, что я получил бы немного этого, немного преимуществ анавара, но он будет больше идти в сторону кардио типа стороны, вы знаете, преимущества кардио выносливость, больший объем, больше повторений, чтобы я чувствовал, как молочная кислота горит в моих мышцах.Туринабол является членом семейства дианаболов, и в результате он работает аналогично тому, как работает d-bol. Туринабол помогает ускорить окисление жиров в организме, а также способствует выработке энергии из накопленного жира. Анавар обычно лучше для тренировки мышц, но он намного дороже, чем туринабол. Сегодня вы можете получить настоящие стероиды туринабола только на черном рынке. Циклы и стеки бодибилдинга. Некоторые стероиды, которые могут переноситься женщинами и которые хорошо сочетаются с пероральным туринаболом, включают примоболан депо и анавар.Что лучше для женщин — анавар или примоболан депо? Анавар — один из лучших анаболических стероидов, которые могут использовать спортсменки. Таким образом, мы можем сделать вывод, что лучше использовать анавар, чем примоболан депо. Что делать, если вы не хотите быть таким же крупным, как Фил Хелс, туринабол против анавара.

Туринабол против анавара, туринабол против станозолола

Национальные институты здравоохранения: «Заявление конференции о состоянии науки о мультивитаминных / минеральных добавках и профилактике хронических заболеваний», 15-17 мая 2006 г., туринабол против анавара.Журнал Американской диетической ассоциации, 2005 г. Список основных анаболических стероидов и все, что вы хотели о них знать. Купить стероидный порошок австралия Туринабол против анавара выпадение волос оральный туринабол эффетти коллатерали пре свега због самог тренинга коди поволйно утиче на наше тело и психу, затим и због друженя, атмосфера кои влада на самом тренингу. В этом случае туринабол используется для «пуска» цикла, после чего его берет на себя анавар, чтобы увеличить предлагаемую «эволюцию» мышечной массы.Вам может быть интересно, почему в этом случае сначала следует использовать туринабол, а не просто использовать анавар на протяжении всего цикла. Tbol vs anavar выигрывает, каков ваш опыт работы с обоими соединениями и качеством выигрыша, и какой из них, по вашему мнению, опережает другого? 25.07.2014, 18:42 # 2. Существует явное сходство с точки зрения способности удерживать азот, которым обладают оба продукта, и схожи также их соответствующие способности повышать количество эритроцитов (хотя туринабол имеет явное преимущество в этой способности.Теперь, если бы я выбрал туринабол, это означало бы, что я получил бы немного этого, немного преимуществ анавара, но он будет больше идти в сторону кардио типа стороны, вы знаете, преимущества кардио выносливость, больший объем, больше повторений, чтобы я чувствовал, как молочная кислота горит в моих мышцах. Для нашего pct я бы посоветовал наш вариант 2 подхода, начинающийся через 2 дня после последней дозы анавара и провирона. Для этого цикла вам понадобится следующее: цикл: 1x lp пероральный туринабол (20 мг x 50) 2x мкг тестостерона ципионата (250 мг x 10 мл) 8x мкг примоболана энантата (200 мг x 10 мл) 8x lp провирон (20 мг x 50) 3x lp анавар ( 20 мг х 50).Только один вопрос. Доза для цикла, который вы написали, туринабол 30 — 50 мг, анавар 50 мг ред. Было бы хорошо сделать это tbol 30 var 30 в течение 6 недель. Туринабол против анавара? фарма. 16 июня 2020 г., 12:16 # 1. Привет всем, хотел перспективу в основном на тбол. Я запустил var, и меня это не впечатлило. Я не принимала анавар или винстрол, но туринабол определенно лечил меня хорошо. Я бы не сказал, что это сильно повысило мою выносливость, но определенно не уменьшило ее. В какой-то момент Туринабол фактически использовался для спортивных достижений на Олимпийских играх, поэтому я предполагаю, что в этом аспекте он лучше, чем var или winny.И не могу найти никакой информации. Анавар по сравнению с туринаболом для силы, это был комбинированный флакон с тестом на 150 мг и 100 мг тренса. Я один из тех людей, которые превращаются в эстроген, как рыдания, и я не мог остановить это даже с помощью летрозола. Туринабол против анавара suppsforlife 2020-11-12t12: 40: 11-05: 00 многие люди, проводящие исследования полезных анаболических стероидов, нашли много информации о туринаболе и анаваре, и, прочитав о них, вы можете заметить, что эти 2 соединения являются очень похожи в том, как они работают, и конечные результаты

Тренболон, тестостерон, ципионат, туринабол против станозолола


Туринабол против анавара, низкая цена законного стероида для увеличения мышечной массы.Нет необходимости постепенно увеличивать дозировку, чтобы учесть проблемы с переносимостью аримистана. Более часто называемый лаксогенином, это добавка на растительной основе, известная как стероидный сапиноген. Это синтетически выделенное соединение из корневищ растения под названием Smilax Sieboldii, туринабол против анавара. Лаксогенин попадает в категорию добавок, известных как брассиностероиды или стероиды на растительной основе.

https://hanidoll.jp/community/profile/ana34144670/ Взгляните на известного бодибилдера Лу Ферриньо, например: Слева: фотография Лу Ферриньо, сделанная во время его возвращения в бодибилдинг в начале 90-х, туринабол против анавара .

Туринабол против анавара, низкая цена купить анаболические стероиды онлайн с доставкой по всему миру. И дело не только в экономии средств, туринабол против станозолола.

Что касается использования анаболических стероидов, какое из следующих утверждений является ложным
Тестостерон ципионат и результаты цикла анавара будут впечатляющими, но даже эти два элемента — только два из сотен, и вы можете включить их в еще более широкий стек . При хорошо спланированном цикле тестостерона ципионата можно получить почти все преимущества анаболических стероидов.Спортсмены в межсезонье могут набрать большую мышечную массу с меньшим набором жира. Примером может служить использование 50 мг тренболона ацетата в день (или всего около 350 мг тренболона энантата в неделю) и 250-500 мг тестостерона в неделю. Что касается того факта, что энантат тестостерона — это стероид, который медленно высвобождается и имеет длительный период полураспада, его следует использовать в цикле в течение примерно 10-12 недель. Также, когда человек начинает цикл энантата тестостерона. Он должен знать, что результаты появятся не сразу.Результаты начнутся примерно через 4 недели после начала периода. Экстремальный тренировочный цикл. Для набора массы: 1-16 недели: 50 мг дианабола в день. Недели 1-10: 400-600 мг дека-дураболина в неделю. Недели 1-16: 1000 мг тестостерона ципионата в неделю. Недели 9-16: 100 мг тренболона ацетата каждые два дня. Недели 11-16: 50 мг дианабола в день. Для срезания: недели 1-8: 250 мг эквипойза и 250 мг тестостерон-энантата каждые два дня. Энантат тестостерона — один из старейших и, возможно, наиболее часто используемых анаболических стероидов всех времен.Это форма гормона тестостерона с медленным высвобождением и первая использованная форма большого или длинного сложного эфира тестостерона. Энантат тестостерона — анаболический стероид, который идеально подходит для всех уровней использования. Ципионат тестостерона — отличный выбор, чтобы начать свой цикл и быстро увидеть рост — гарантирует, что вы увидите прогресс, в то время как более медленный ципионат тестостерона и возможные другие инъекционные стероиды накапливаются в вашей системе — главный стероид, разрушающий плато в середине цикла — если он используется в качестве Для быстрого старта и прерывания плато между ними должно быть по крайней мере четыре-пять недель отсутствия тестостерона ципионата — использование тестостерона ципионата не должно превышать шести недель на курс использования.Ципионат — это длинный эфир тестостерона, который в основном используется в цикле набора массы. Тестовый цип имеет меньшее удержание воды, чем энантат, и обеспечивает большую прочность. Вы обнаружите, что многие пользователи сравнивают энантат тестостерона с ципионатом. Оба они представляют собой разные сложные эфиры и считаются длинными сложными эфирами. Период полувыведения теста e составляет примерно 5 дней. Ципионат имеет период полувыведения от 7 до 10 дней. Это означает, что энантат действует немного быстрее и имеет более короткий период полураспада по сравнению с ципионатом. Люди, принимающие тренболон-энантат, обнаружат, что могут делать это с одинаковой эффективностью в обоих циклах наращивания и сушки; гормон тренболон действительно является одним из самых универсальных доступных стероидов.Цикл тест-трен-мастерон: дозы и результаты из-за воздействия мастерона с тестостероном и тренболоном, наиболее идеальной целью использования является сохранение как можно большего количества мышечной ткани при одновременном снижении общей массы. Короткие циклы ципионата или энантата тестостерона составляют 6-8 недель, но эксперты рекомендуют продлить использование этих стероидов на более длительный период — 12 недель. Представители высшей касты спортсменов профессионального уровня используют дозировку выше 1000 мг в неделю.

Добавки сделаны из чистых, натуральных ингредиентов, чтобы гарантировать безопасное использование.Теперь вы можете достичь своих целей по наращиванию мышечной массы так же быстро, как и при использовании стероидов, но законно и без вредных побочных эффектов, используя цикл тренболона тестостерона ципионата. Вы можете ожидать интенсивных тренировок и быстрого набора мышечной массы всего за 30 дней, используя легальные добавки для набора мышечной массы. http://fbcmbs.org/community/profile/ana24