OLYMP-Тандем | Фитнес Эксперт | Fitness Expert (отраслевая бизнес-площадка)

Сеть спортивных клубов OLYMP — стабильная, динамично развивающаяся компания, которая за более чем 10 лет существования, зарекомендовала себя на рынке фитнес услуг как качественная, надежная и успешная. Сравнительно недавно, в 2014 году, мы открыли OLYMP Тандем — фитнес-клуб в Казани премиум-класса. Как и другие наши залы, он является воплощением современных технологий и создан для тех, кто ценит атмосферу и комфорт во время занятий. Он расположился на площади в 3100 квадратных метров и сочетает внутри себя все, что необходимо для Вас, Вашего здоровья и совершенной физической формы.

Все фитнес-клубы OLYMP имеют бассейн и оснащены мультибрендовыми тренажерами, просторными залами для групповых фитнес-программ, бокса и единоборств, йоги. Джакузи и сауны помогут снять напряжение и усталость после рабочего дня. Посетителю всегда гарантирован сервиса «Премиум» уровня. Тренерский состав — специалисты высокого класса, имеющие спортивное образование, а также прошедшие обучение в Национальном Университете Фитнеса.

Многие тренеры имеют титулы и международные награды.

Чтобы приступить к занятиям фитнеса уже сегодня, выгодней всего купить абонемент на сайте. Внеся все требуемые данные и оплатив, Вам останется только забрать свою клубную карту во время одного из посещений. Наши клиенты могут рассчитывать на программу персонального тренинга – индивидуально составленную под Вас, учитывающую такие моменты, как состояние здоровья, подготовку, ожидаемые результаты. Регулярно нами приглашаются Мировые звезды фитнеса, которые проводят мастер-классы и тренинги для всех клиентов фитнес-клуба, и это входит в стоимость абонемента. Купив его, Вы получаете доступ ко всем зонам клуба без дополнительной платы. Мы постоянно совершенствуемся, следуем всем новейшим тенденциям, оставаясь при этом в комфортном ценовом сегменте. Занимайтесь спортом вместе с #olympclubs!

адрес на карте, телефон, время работы, отзывы, рейтинги

3.3 cредняя оценка на основе 61 отзыва.

Учреждение специализируется на 5 типах деятельности.

На основе типов деятельности OLYMP-Тандем, мы подобрали максимально близкие, аналогичные организации:

18.09.2015

Анонимный пользователь

Оценка: 1

У меня осталось крайне негативное впечатление об этом клубе. Случайно вк пришло приглашение на бесплатное гостевое посещение. С одним Но — выслано оно было за 3 часа до начала мероприятия. Я как раз выбирала клуб, куда лучше приобрести абонемент, и это приглашение мне показалось очень «кстати», схожу, думаю, присмотрюсь. Однако у меня с собой не было спортивной обуви. Ну не улитка же я, чтоб везде носить с собой весь дом. Звоню в клуб, уточняю, можно ли прийти в шлепанцах. Менеджер Роман сначала долго нахваливал клуб,какой он «хороший комфортный замечательный», затем выяснял, в каких клубах я занималась ранее, и сказал, что я могу прийти без кроссовок. Что оказалось обманом! оно и понятно, менеджер надеялся под шумок протулить мне абонемент, и сам получить комиссию, и не в его интересах было отказывать мне в посещении.

Когда я приехала в клуб и прошла в зал, инструкторша меня за мою обувь просто выгнала из зала! Причем это было сделано в достаточно хамской форме с ссылкой на какие то выдуманные правила безопасности. Хотя в моей обуви прекрасно можно было позаниматься без проблем! Даже менеджер Роман ничего не смог сделать, только растерянно пожал плечами. Уважаемое руководство клуба!!!! если вы проводите подобные мероприятия, то предупреждать людей надо заранее, хотя бы за день, чтоб дать возможность захватить с собой из дома с утра спортивную обувь, а не за 2 часа! Дезинформировать и обманывать посетителей тоже не есть хорошо!!!! если нельзя заниматься в шлепанцах — значит и надо сразу об этом говорить по телефону, а не заманивать обманом в надежде»авось разрешать»! Я ведь зря потратила свое время,сказали бы честно- не приезжала бы вообще! Менеджер не слышит клиентов- стал мне рассказывать про мобильное приложение, которое не было разработано для моего телефона Нокиа Люмия, и намекать на то, чтоб я приобрела телефон на базе андроид! С моим возражением, что раз не хотят разрабатывать приложение для всех видов мобильных устройств, не оставалось ничего другого, как согласиться, однако это не помешало ему продолжить нахваливать бесполезное для меня мобильное приложение. За время короткого пребывания, я успела познакомиться с раздевалкой.Очень неудобные шкафчики, узкие, еле помещается сумка. Раздевалка напоминает лабиринт с множеством шкафчиков и задумкой игры «найдите, где здесь душ и туалет». Последний явно не рассчитан на такое количество посетителей, всего 3 кабинки, в которые даже при небольшом наплыве посетителей уже выстроилась очередь. Заниматься в таком клубе желания у меня не возникло. Очень сожалею о зря потраченном времени на посещение.

21.02.2018

Анонимный пользователь

Оценка: 1

Немного странное расположение тренажеров. Ровным рядом стоят тренажёры на ноги.На все остальные группы все в кучу. Гантельный рад всегда в хаосе. Персонал не следит за тем,чтобы за собой разбирали снаряды и ставили на место те же гантели. Сами же тренеры ходят о них спотыкаются. В раздевалке и душевой явно темновато. Света не достаточно.Сервис на уровне. Был днём в понедельник. Народу для этого времени было явно многовато.

10. 12.2017

Анонимный пользователь

Оценка: 1

Клуб по выходным работает до 22-00 , но верхнюю одежду в гардеробе надо забрать исключительно до 21-45. Так гардеробщица решила. Замечу , что таблички о режиме работе гардероба нет. Если вы подойдёте на минуту позже , то гардеробщица в ультимативной и хамской форме вам скажет , что вещи в следующий раз оставит без присмотра и даст вам массу «рекомендаций» стоя подбоченясь в середине холла по поводу вашего времени посещения клуба. Клуб позиционирует себя как премиум

08.06.2015

Анонимный пользователь

Оценка: 1

Судя по тому ,что все отличные отзывы написаны людьми ,у которых всего один единственный отзыв на этот Олимп, я делаю вывод, что это пишут сами сотрудники. Какой бы рейтинг вы не имели на флампе суровую правду это не изменит!

26.10.2015

Анонимный пользователь

Оценка: 1

Обещали в 2013 году открыться, на год задержали. За это всем сделали подарок 4+ 2 месяца в подарок. 2 месяца если ходить не будешь в другие бюджетные клубы АЛекс фитнес. Состоялось открытие в 2014 году аж в декабре, но БЕЗ бассейна, т к забыли построить. Пообещали бесплатно посещение клуба, пока бассейн не откроют. По сей день не открывают, каждый раз на месяц сдвигают сроки. Вот уже скоро год как пройдет. Все обещают!!! Я лично покупал из за бассейна! Но это еще не все!!! Этот свой абонемент другу ни продать , ни подарить не могу! Это такая ерунда только в этом клубе!

Т е если решили ходить надо знать , если что что-то не понравится, то избавиться можно за смешную сумму, с учетом комиссий возврата, если еще сам не доплатишь.
Советую смотреть в сторону Планеты Фитнес ак барс Х Fit это спортзалы премиум класса, пока что Олимпу далеко, это не только мой вывод, но и вывод тот, кто ходит достаточно давно. Единственный плюс это цена, не более.

23.06.2015

Анонимный пользователь

Оценка: 5

Купил абонемент!
Очень нравится оборудование в зале. Отдельная функциональная зона. Ремонт хороший, раздевалки просторные никакого столпотворения даже по вечерам)

Особенно радует тренерский состав. Работают мастера своего дела, всегда помогут и ответят на интересующий вопрос.
До этого занимался в других залах, цена не соответствовала качеству. В Олимпе все с точностью наоборот! За 3 месяца скинул 20 кг. стал сильнее на 50%. За это отдельное огромное спасибо личному тренеру Руслану

04.11.2015

Анонимный пользователь

Оценка: 5

Уютная, теплая атмосфера. Дружелюбный персонал, всегда на позитиве! К любому тренеру можно подойти с вопросом (и ни один не откажет в ответе! ).
Тренажеры супер! Со счетом повторений ( очень удобно! ).
Множество беговых дорожек и прочих кардио-тренажеров!
Системы вентиляции ОТЛИЧНАЯ!
В отличии от других залов Казани ( где постоянно открывали окна, чтобы не задохнуться!)

Групповых программ очень много! На любой вкус и цвет! Девчонки большие молодцы! Зажигалки! Всегда в форме и хочется им соответствовать★
Про раздевалку не могу не сказать! !!!!! Потрясающий лабиринт женского рая♥♥♥
Отдельная комната с зеркалами, стульями и фенами, где можно привести себя в порядок и подкрасится после спорта. солярий, сауна. Множество душевых кабинок!
Все очень чисто! Постоянная уборка! Сама наблюдала!

Очень рекомендую!

05.01.2017

Анонимный пользователь

Оценка: 5

Мой любимый клуб!! Где я только не занималась, столько клубов сменила.. В Олимпе уже полгода и ни на что его не променяю. Здесь все на высоте, персонал, тренажеры, бассейн, раздевалки. Именно здесь я начала заниматься с тренером и результат не заставил себя ждать, похудела на 15 кг!!! и это еще не предел!! сейчас уже занимаюсь самостоятельно и хожу на групповые программы. Прихожу с утра перед работой, заряд хорошего настроения на весь день!

28.11.2017

Анонимный пользователь

Оценка: 1

Позвонил 1 раз чтобы узнать стоимость абонементов и какие варианты у них есть. Далее начались еженедельные смс сообщения от данного клуба с предложениями и акциями. Согласия на получение смс рекламного характера я не давал.

01.06.2016

Анонимный пользователь

Оценка: 5

Доброго дня ! Меня поражают негативные отзывы в адрес моего клуба =(( Занимаюсь уже не один год, никаких вопросов к клубу , персоналу и менеджерам нет)
Была на первых парах задержка по бассейну, но сейчас все гуд ) Если выбираете зал чтоб тренироваться и видеть результаты — го в Олимп )

13. 04.2015

Анонимный пользователь

Оценка: 5

Отличный клуб. Клуб очень большой и просторный. Персонал на рецепции приветлив, отдел продаж работает на отлично, предлагает всевозможные акции, тренерский состав великолепен, всегда придут на помощь, подскажут, чувствуется профессионализм. Отличная атмосфера. Новая «фишка» Mywellnesscloud, прикольная программа, для тренировок. Мне все нравится. Побольше таких клубов!!!

07.12.2015

Анонимный пользователь

Оценка: 5

Хожу в Олимп уже полтора месяца, и пока что довольна абсолютно всем. Перво-наперво тем, что он находится в минуте ходьбы от моей работы)).Да, есть свои маленькие недочеты: в случае с Олимпом — это проблема с бассейном, но при покупке абонемента мне его показали, и он действительно есть, ребята, просто там что-то делали с потолком, то ли шпаклевали, то ли еще что-то…Сейчас Олимп вышел на финишную прямую — бассейн залили и даже поставили на рецепшн телевизор с прямой трансляцией оттуда).
Но я шла в Олимп не за бассейном, а за качественными силовыми тренировками, и их получаю в полном объеме с одним из тренеров клуба. По поводу очередей на тренажеры всё же выскажусь: уважаемые фламперы, абсолютно в ЛЮБОМ спортивном клубе такого масштаба как Олимп (расчитанные на большое количество клиентов) по вечерам бывают очереди! Я занималась раньше в Максимусе, и вот там совершенно нереально было пробиться по вечерам к дорожке или к эллипсу, приходилось минут по 10, а то и по 20 ждать. Здесь же беговых дорожек тьма, эллипсов тоже. Максимальное время ожидания в моем случае составило около 3-5 минут, в это время можно разогреться, поболтать с местными и т.д
Очень нравится раздевалка, она действительно большая. Так же наличие специальной «макияжной» комнаты не может не радовать.
Ни разу не сталкивалась с отсутствием фенов или с их нерабочим состоянием, хотя сушусь при каждом посещении.
Хороший солярий! Ну или хороший мой новый крем для загара, пока не поняла :)))
Еще при Олимпе есть кафетерий со специальным диетическим питанием и вполне демократичными ценами.
Вспомнила про один маленький минус: отсутствие пластиковых стаканчиков возле кулера с водой. Подразумевается, что клиенты будут приходить со своими бутылками или шейкерами и набирать в них воду. Мне, привыкшей к максимусовским стаканчикам, было первое время напряжно всё время бегать в раздевалку и пить из фонтанчика, поэтому я всё же приобрела себе шейкер. Надеюсь, руководство клуба этот момент примет во внимание! Стаканчики ведь копеечные, а клиентам приятно будет).
Общаяя оценка: 5).

02.06.2015

Анонимный пользователь

Оценка: 5

Всем привет.в Олимп хожу с открытия. Тут своя атмосфера. Успешных, знающих цену времени людей. Оборудование новое, зал просторный, раздевалки приличные, чистые. Улыбчивый и отзывчивый персонал. Приятные администраторы. Тренерский состав достойный. Те кто судятся с компанией, видимо, покупали абонемент не ради спортивных достижений. Иначе, занимались бы в отличном клубе на ультросовременном оборудовании, а не тратили силы и время на какие то заявления.
Если желаете результатов, красивого тела и отличного настроения, то Вам в Олимп

18.12.2015

Анонимный пользователь

Оценка: 3

Добрый день! Спортивному клубу Олимп порекомендовала бы, более конструктивно отвечать на отзывы клиентов. Не нужно копировать одно и то же сообщение для каждого, и фраза » к сожалению мы вам не подходим » является не корректной. Ведь люди здесь пишут о проблеме возникшей в вашем клубе, которую вы не смогли решить, когда они к вам обратились, что является вашим упущением. И обращайте внимание так же на хорошие отзывы(если они являются реальными). Людям важно получать ответную реакцию на написанный отзыв (не по шаблонным репликам) Спасибо!

18.05.2016

Анонимный пользователь

Оценка: 5

нравится клуб, пришел-позанимался, все для этого есть-отзывчивый коллектив, хорошая музыка, тренажеры хорошие, приятная атмосфера, чисто всегда в клубе, все новое.

19.06.2015

Анонимный пользователь

Оценка: 5

На вкус и цвет товарищей нет. Хожу в Олимп почти с открытия , есть с чем сравнить! Цена ниже качества! Тренажеры они и в Африке тренажеры.

30.09.2015

Анонимный пользователь

Оценка: 5

Могу сказать, что я воробей стреляный. И залов я в Казани повидала достаточно, начиная от подвальных качалок до фитнес-клубов. Совершенно неслучайно увидела рекламу в директе, ибо занималась поиском нового клуба для себя. Позвонила в клуб, пообщалась с Романом. Кстати, профессионал своего дела — он, пообещал, что я буду в восторге и не обманул! 🙂 Клуб меня влюбил в себя с первого взгляда. Какой простор! Не только масштабный, но и для деятельности. По-порядку, пожалуй:
1. Достаточно большая кардио-зона. Здесь точно не придется ждать очереди на тренажер.
2. Зал единоборств приятный. Тут и по боксировать можно и по растягиваться, да просто полежать — мягкий пол. 🙂
3. Меня очень порадовало наличие зоны кросс фита. это вообще кайф! То что я искала.
4. Огромная зона тренажеров, хороших, высокотехнологичных. Все, что необходимо, все нашла.
5. Зона свободных весов тоже обширна, и в очередь на присед тут стоять явно не придется тоже.
6. Два зала групповых занятий. Тоже огромные, просторные. Я не фанат групповых, но выбор настолько велик, что я уже составила себе план чередования силовых и групповых.
7. Очень стильная и уютная раздевалка и мягкими диванчиками. Отдельная зона с фенами, где можно сделать макияж.
8.Нормальные душевые. Не понимаю предыдущего оратора, ничего там не 3 кабинки. Есть и закрытые и открытые.
9. Сауна по мне маловата. Но она есть! И это кайф.
10. Скоро открытие бассейна.
Я не хожу заниматься в зал в часы-пик. Я хожу утром рано или поздно вечером. Поэтому я знаю, что мне хватит места и в сауне. А то, что народу много, ну это так везде в часы-пик. Тут нечему удивляться и сетовать. Это нормальное явление. Просто здравый смысл включить не мешало бы некоторым, вечно недовольным, гражданам.
Я просто приехала первый раз познакомиться с залом, меня сопроводили, все показали, все рассказали. Очень разнообразная и гибкая система оплаты. Выбирай на любой вкус, кошелек и возможность.
Первое мое знакомство не оставило ни малейшего сомнения, что это именно то, что я хочу. Это мой зал, здесь есть все, что мне необходимо!
Еще раз повторюсь, я видела много залов в Казани. Подобного я не видела нигде. Это совершенно иной уровень, это другие стандарты. Это не похоже на российский клуб, я почувствовала себя в Европе, или более, наверное, в Америке. Именно подобные залы я вижу в американских роликах. Я очень довольна. И я все рекомендую. Друзьям все уши прожужжала уже, мужчину своего переманила. Он, кстати, тоже был приятно удивлен. Всем спорта! И больше положительных эмоций!

19.06.2015

Анонимный пользователь

Оценка: 5

Лично мне Олимп пришелся по душе. Нравится там всё. Дизайн, атмосфера, персонал, тренажерный зал, многообразие групповых программ. Я не отношусь к людям которые регулярно занимаются спортом, занимаюсь в свое удовольствие. И приходя туда, я расслабляюсь. Не приходится ждать очереди чтоб позаниматься на тренажере. И месторасположение конечно для меня очень удобное.

27.10.2015

Анонимный пользователь

Оценка: 1

Отвратительный клуб. С самого открытия продажи абонементов (2013 г.) как начали лгать, так это и продолжается до сих пор. Бассейна нет. все подаренные бонусы клуб забрал. Компенсации за обман нет, вместо этого менеджеры говорят: «смените клуб!» Единственный здесь плюс — это просторная раздевалка.
Душевые очень грязные и там совсем нехорошо пахнет. Сауна рассчитана на 4х человек от силы. Залы групповых занятий душные, система вентиляции не справляется в часы пик. При этом, сам клуб позиционирует себя как премиум класса!!! Детской комнаты нет, занятия для беременных не предусмотрены. Инструкторы групповых программ молодые неопытные девочки. Сами занятия скучные: танцевальные направления, например, в течении 3х месяцев идут в одном и том же формате: те же ритмы, те же связки. ..

09.03.2018

Анонимный пользователь

Оценка: 1

Ужасный клуб якобы премиум класса. Заботятся лишь о том как бы продать побольше клубных карт. Народа очень много, частенько очереди на тренажёр. Я плачу немалую сумму, чтобы иметь возможность спокойно позаниматься, но вдруг у них горит план, скидывают цену на абонементы вдвое и вот уже гора новых клиентов и ОЧЕРЕДИ. Полотенца постоянно пахнут непотребно, причём администрация в курсе проблемы, но за полгода так и не смогли (или не сочли нужным) решить её. Нередко случалось, что уличная малолетняя «шпана» заходит погреться, при этом ведут себя шумно и развязно, что вызывает у меня опасения за мою безопасность. Мы платим десятками тысяч за клубную карту, а охранника нанять хотя бы одного денег нет, зато на телефоне на обзвоне целая толпа сидит втюхивает абонементы… На рецепции тоже проблемы, стоит бедная девушка зашивается постоянно, неужто так сложно второго администратора нанять? Раньше хоть иногда по двое стояли, сейчас всегда одна. До этого ходила в клуб «непремиум» уровня, даже там могли себе позволить двух администраторов, копейки же стоит относительно расценок клуба. Не советую клуб, постепенно скатился ниже некуда. Буду сдавать клубную карту и подыскивать новый клуб. Благо проблем с их количеством и качеством нет.
Чтобы понять готовы ли платить за такой посредственный сервис, придите на день открытых дверей прежде чем выкидывать деньги на ветер.

Мнений показано: 20 из 61 суждения.

8 посещений страниц фирмы.

адрес на карте, телефон, режим работы, отзывы, рейтинг

3.6 cредняя оценка на основе 34 отзывов.

Юридическое лицо имеет 2 филиала в пределах города.

Учреждение специализируется на 4 типах деятельности.

На основе типов деятельности FITNESS HOUSE, мы подобрали максимально близкие, аналогичные организации:

13.02.2018

Анонимный пользователь

Оценка: 1

Самый ужасный фитнес клуб из всех, где мне приходилось бывать, сервис на 0. Перед покупкой абонемента решили начать с разового посещения, вся процедура оформления разового посещения на 2-их заняла у нас 40 мин, стоит 700 руб на одного. +100 руб обязательная консультация врача(?!?!?!). Даже милая девушка Алсу в отделе продаж не смогла сгладить эти бюрократические мучения. Чертовски неудобные резинки на ключиках, вода без стаканчиков… предпоследней каплей стали платные полотенца, каждое за 50 руб, настолько маленькие, что мы бы и за 10 руб их не взяли. А последней — грубость Юлии на ресепшене. Больше в это место ни ногой. Соответственно, и в планируемый на спартаковской тоже.

22.12.2017

Анонимный пользователь

Оценка: 2

Для тех кто занимается в тренажерном зале-если будут поддерживать оборудование. То все хорошо. Ходила в Панду с 2015 года. После 11 января возьму тайм аут. Попробую походить в другое место. Попав под другое руководство-наш любимый зал потерял душу и домашнюю уютную обстановку. ( На мой взгляд) Пишу, чтобы исправить неточность. По выходным теперь работают до 22-х часов. Из того что не нравится-не гибкость руководства. Брелок можно повесить на старый браслет( остался после спортивного мероприятия летом. Для меня большие полотенца были комфортнее. из сильных групповиков осталась только Гуля. Сама еще не попала-но говорят, что теперь требуют посещения сауны в купальниках ( интересно, как контролируют) Знакомый жаловался, что в мужской сауне часто бывает мягко скажем, не жарко. Похоже, на горках будет еще один зал типа Максимуса или Акимбо. ОЧЕНЬ ЖАЛЬ!!!!

04.01.2015

Анонимный пользователь

Оценка: 5

Расскажу Вам про своё впечатление после первого посещения Panda Gym. На входе вас встречает приветливый и вежливый ресепшн, который поможет и подскажет. Следующий этап — отдел продаж. Здесь мне помог Тимур. Очень доступно объяснил про цены и условия, а после провёл по залу и подробно рассказал про тренажеры и оборудование, ответил на все мои вопросы, чем приятно порадовал. В зале и раздевалке все достаточно чисто, придраться не к чему. Хочется отметить то, что оборудование здесь совершенно новое. Если сравнивать, даже не побоюсь написать, со всеми фитнес клубами Казани, считаю Panda Gym лучшим залом на данный момент. Ближайшие клубы рядом не стояли. Выводы. Вежливый, профессиональный и компетентный персонал, чистота, небольшая наполненость клуба (скорее потому как недавно открылся), функциональная зона, большие залы групповых занятий и сайкл студия порадовали, очень свежий воздух в зале (будто находишься на берегу моря). Если вы в поиске клуба, не ошибетесь если заедете сюда. Мой выбор остановился на Panda Gym. Это шикарный фитнес клуб!!!

22.12.2017

Анонимный пользователь

Оценка: 5

Посещаю fitness house с сентября этого года, не заметила никаких минусов этого клуба. Очень доброжелательный и вежливый персонал. Особую благодарность хочется выразить команде тренеров. Настоящие профессионалы своего дела, которым полностью можно доверять. В зале отличные тренажеры, каждая тренировка в удовольствие.

31.01.2016

Анонимный пользователь

Оценка: 4

Отличный зал. Приветственный персонал, был у вас сегодня. Благодарю за отличную экскурсию. Единственный минус — для тех кто не на своем личном авто, до вас добираться это уже целая разминка, не говоря об обратном пути.

21.12.2017

Анонимный пользователь

Оценка: 5

Все отзывы написанные раннее неоправданны. Просто люди всегда боятся чего то нового . Вся их суть в этом. .
Тренажёрный зал в отличном состоянии.
Всегда идеальная чистота.
Полотенца маленькие для тренажеров, что очень очень удобно.
Брелки безумно удобны .
Очень много новых и приятных фишек.
Блестящий тренерский состав.
Очень приятные девочки с ресепции.
Панда не прожила и трёх лет, в свою же очередь Фитнесс Хаус очень крупная федеральная сеть и не просто так продолжают расцветать и открывать все новые и новые клубы.
Хожу в клуб с открытия и ни за что его не поменяю . Сейчас он стал только лучше, чувствуется что его очень любят.

21.12.2017

Анонимный пользователь

Оценка: 5

Много прочитала отзывов о данном клубе перед тем как придти. Были некие опасения. Однако, как оказалось, на деле все это домыслы людей, которые больше говорят, чем реально ходят. Занимаюсь я у Альбины. Альбина прекрасный тренер. Благодаря ее советам, индивидуально подобраной программе занятий и расписанному правильному питанию появились желаемые результаты. Кроме того, самое приятное в работе с ней- отсутствие малейшего дискомфорта. Благодаря Альбине лично для меня, занятия превращаются в отдых от будничной суеты и завалов. Также, всегда выхожу из зала в отличном настроении и с хорошими результами после занятия. А за то, что она всегда моментально отвечает на все мои вопросы и даёт советы в нерабочее время- отдельная безграничная благодарность.

30.09.2017

Анонимный пользователь

Оценка: 3

Мало грамотных и профессиональных тренеров. Хорошие не задерживаются. Групповые очень слабые. Из сильных осталась только Гуля. За год поменялся практически весь состав. Очень жаль ушли Ольга и Вероника. Только из-за них купила абонемент. Уже не хочется ходить. Пришла новая Оля, которая намного уступает по мастерству. И еще ко всем обращается на ты. К взрослым тетям говорит » Давай, давай. Делай». Очень неприятно.

13.04.2015

Анонимный пользователь

Оценка: 5

Персонал приветлив. Очень понравилась зумба (чт, сб). Не понравилась йога. Обстановка ок. Все новое, чистое.

17.06.2015

Анонимный пользователь

Оценка: 5

Отличное место! Новые тренажеты, очень мало народа. Есть где развернуться! На одного человека приходиться штук 10 свободных тренажеров. Раздевалка и душевая тоже класс. Все новое!

21.12.2017

Анонимный пользователь

Оценка: 5

Хочется выразить огромную благодарность всей команде FITNESS HOUSE за их внимательное отношение и профессиональный подход к клиентам. Сюда хочется приходить, несмотря на непогоду, пробки или усталость после работы. Впечатления только положительные. Удобство расположения, оснащенность оборудованием, постоянная чистота во всем клубе, а также доброжелательность работников – на пять баллов из пяти для меня! Все тренеры внимательны и отзывчивы. Особенно хочу отметить своего персонального тренера Альбину. Это прекраснейший человек, знающий своё дело. Находит подход к каждому, очень внимательна, всегда может поделиться советом, т.е. очень отзывчивая и искренняя. Поэтому ходить на её тренировки — одно удовольствие, не только из-за редкостного профессионализма, но так же и из-за личностных качеств. Все тренировки всегда проходят очень интересно и с огромной пользой, как для тела, так и для души. Побольше бы таких тренеров) Для меня каждая тренировка приносит не только заметные результаты, но и проходит в очень дружественной атмосфере. Это тот тренер смотря на которого хочется заниматься спортом. Ее тренировки всегда разнообразны, на них забываешь о всех проблемах, получаешь заряд бодрости и позитива. Спасибо большое за ее профессионализм и чуткое отношение к людям!

28.10.2016

Анонимный пользователь

Оценка: 5

В фитнес зал Панда Джим хожу уже почти год, доволен всем. Раздевалки удобные, в зале народу не много, тренажеры все новые и их много всяких разных.
Раньше ходил в Планету фитнеса на Парина там тренажеры все старые и все заняты. Душевые чистые, в сауне приятно сидеть, ни когда нет толпы.
Очень доволен данным залом буду продлевать абонемент.

24.12.2017

Анонимный пользователь

Оценка: 4

Для меня в этом клубе плюсов намного больше, чем минусов. Но обо всем по порядку. Начну с плюсов. Важный для меня момент- это комфорт. Клуб большой и просторный, и на удивление здесь мало народу, нет толпы даже в «часы пик» ( вечером и в выходные). В раздевалках и в зале свободно, нет ощущения «курятника» как в других, более бюджетных клубах. Перед и после занятия можно спокойно переодеться в раздевалке, ни с кем не сталкиваясь, без очередей и толкотни погреться в сауне и принять душ. В душевой есть контейнеры с жидким мылом. Шкафчики в раздевалках закрываются на электронный замок, а для поднятия настроения играет зажигательная музыка. В помещениях везде чисто, своевременно проводится уборка, не мешая посетителям,а уборщицы приветливы и доброжелательны. В тренажерном зале хорошее, современное оборудование, все тренажеры исправны, разделены на несколько зон по уровню подготовки.Всегда есть свободные места, нет необходимости ждать очереди на тренажер, как в других клубах. Для снятия напряжения с суставов есть виброплатформы. Есть несколько залов для групповых занятий. Рядом с куллерами с водой есть одноразовые стаканчики, и нет необходимости каждый раз приносить с собой посуду для воды, как в других клубах, решивших экономить на стаканчиках.П помещение просторное и светлое, с большими панорамными окнами во всю стену с двух сторон.
Персонал клуба в основном приветлив. Как говорится, театр начинается с вешалки, и сотрудница этой самой вешалки ( гардероба) уже задает посетителям хорошее настроение своей улыбкой и доброжелательностью. К сожалению, не запомнила имя, но хочется выразить отдельную благодарность сотруднице, работавшей 23 декабря, которая меня с самого входа зарядила позитив. Еще хочу сказать спасибо сотрудницам ресепшен, всех по именам не запомнила, но особенно приветлива Альбина, всегда готовая помочь и постараться решить любой вопрос с улыбкой. Отдельно хочу выразить благодарность тренеру Ксении Челяковой — очень приветливая, доброжелательная девушка, все мне подсказала и объяснила, что я делала не правильно, и какие тренажеры мне больше подходят. С такими тренерами приятно заниматься. А Гульчехра подбадривала своим чувством юмора, шутила и поднимала настроение. Хорошо меня «помучила» и Юля, в хорошем смысле слова, все подсказывала, объясняла, что я делаю неправильно. Но, к сожалению, лестно отозваться могу не обо всем персонале. Увы, некоторые сотрудники ведут себя не так «любезно» с посетителями клуба, и портят все впечатление. Это касается Хамзиной Анастасии. На ее занятие я опоздала на 5 минут. Да, это конечно же моя вина, но проявить лояльность и пустить меня все таки было бы можно. Ну ладно, пускать или нет опоздавших это ее право, она этого делать не обязана. Но научится более уважительно общаться с посетителями клуба ей бы явно не помешало, не хамить и не фамильярничать, обращаясь высокомерным хамским тоном «дорогая моя». Подобное поведение персонала в клубе такого уровня и ценами на абонементы, на мой взгляд, недопустимо. Еще мне не понравилось поведение тренера Кирилла, когда я его попросила подсказать, как работает один из тренажеров, он ответил мне высокомерно, и постарался поскорее от меня отделаться, ничего толком не объяснив. В отделе продаж сотрудники в рабочее время на личные темы общаются с подругами по видеосвязи на смартфоне. Конечно, пока нет клиентов, в этом нет ничего плохого, но делать это в присутствии посетителей все таки создает определенное впечатление о дисциплине сотрудников и культуре сервиса. В тренажерном зале тренеры не всегда одевают бейджи, и новичку непонятно, к кому обращаться, кто из присутствующих тренер, а кто такой же посетитель. Расписание групповых занятий,на мой взгляд, скудноватое. Маловато интересных направлений, не помешало бы добавить побольше танцевальных занятий. Очень хотелось бы поставить высшую оценку, но не могу с учетом перечисленных замечаний. Надеюсь, руководство клуба обратит внимание на эти моменты, и будет более тщательно относиться с подбору и обучению персонала, чтоб стать еще лучше.

30.05.2018

Анонимный пользователь

Оценка: 1

Занимаюсь на Спартаковской. Клуб отличный. А вот персонал и обслуживание оставляют желать лучшего! Как все хорошо начиналось, когда был приобретен абонемент… Девушка из отдела продаж была очень приятна в общении, в общем общаться было одно удовольствие… Эх… И вот я уже постоянный клиент этого клуба. Отношение резко меняется. Хамское и надменное, на клиентов клуба им всё равно. Видимо сказывается , что головной офис в Питере. Если не обращать внимание на персонал ходить можно. Но на следующий год не пойду однозначно. Выбирать есть из чего.

11.05.2015

Анонимный пользователь

Оценка: 5

я в восторге. увидела рекламу в лифте, дома погуглила и как то сразу поняла что заниматься я буду тут. через неделю на руках была зеленая карта клуба, хотя года три не могла заставить себя записаться хоть куда-то в зал, ничего не нравилось. мне комфортно, свободно. я рада))

31.08.2017

Анонимный пользователь

Оценка: 5

Всем доброго дня в этот фитнес клуб продолжаю ходить 2й год так как очень доволен залом.
Здесь все лучшее собрано. Тот кто ходил в другие клубы, придите и сравните. Вам реально будет жалко те годы которые Вы провели в других клубах. Придите и убедитесь сами.
Тут действительно чистый воздух за счет лучшей фильтрации, чистые раздевалки и душевые.
В зале всегда есть свободные кардио и силовые тренажеры. Дежурный тренер по Вашей просьбе всегда подскажет и научит как правильно делать упражнение.
Такого лучшего сервиса я честно еще не встречал, хоть и занимался уже ранее в 3х разных известных клубах города.

24.12.2017

Анонимный пользователь

Оценка: 5

Много странных отзывов о зале конечно. Для меня не сильно много изменилось, после того как они «переименовались».
Из плюсов: это брелок для входа, по мне так это одно из лучших нововведений, общение с администратором сведено к минимуму. Кабинку можно выбрать любую, оплата солярия очень удобна. То что народу стало возможно меньше для меня тоже плюс ))) Инвентарь теперь в полном порядке, на видном месте.
Из минусов: поднятие цен на индивидуальные тренировки (((, теперь занимаюсь самостоятельно, но это не помешало остаться в хороших отношениях со всеми. И часы!!! где секундная стрелка

06.10.2017

Анонимный пользователь

Оценка: 2

Сам зал отличный, чистый, тренажеры новые. Но все это перечеркивают так называемые тренера. Дело в том, что без денег вы им не интересны. Конечно, возможно есть и нормальные люди среди них, но большинство меркантильны и им на вас наплевать. Купила тренировки у Альбины З. недешевые. Так она наплела мне что у меня куча диагнозов. Занимались мы по дурацкой программе, она очень рассеяна, вначале тренировки говорит что сегодня занимаемся с гантелями, и сразу же об этом забывает)) в итоге договорились что она мне напишет программу тренировок после окончания наших персональных занятий. Написала 1 тренировку наспех, сказала заниматься ей неделю -две, потом напишет новую. Ну и конечно же, через две недели она уже говорит что ничего не напишет, пока я не заплачу.
Также внизу уже есть отзыв о том что возвращают за абонемент намного меньшую сумму, чем должны. Я брала абонемент на полгода за 9900, отходила 3,5 месяца и мне вернули 1000 руб)) удерживают не 30%, а все 60%.

29.11.2017

Анонимный пользователь

Оценка: 3

С того момента как PandaGym стала FH многие пишут комментарии о том как все изменилось и не в лучшую сторону. Мое мнение,к сожалению, не будет исключением.
1) Девочки с ресепшна откровенно хамоватые, вечно сидят с кислыми минами. На элементарное «Здравствуйте» и «До свидания» от клиента даже бровью не поведут, на вопросы нормально ответить не могут. Почему,придя в первый раз 26.11.17 после изменений и еще не понимая как все устроено, на вопросы «как?», «куда?»и «зачем?» прикладывать брелок мне отвечает милая гардеробщица, в то время как две девушки с ресепшна просто игнорируют разговаривая друг с другом, либо молчат? В Панде никогда такого не было. И улыбнутся и хорошей тренировки пожелают и уж точно расскажут что, куда и зачем. Всегда дружелюбная атмосфера, ощущение что тебе рады, а не «Опять кого-то принесло».
2) Новые полотенца очень маленькие, раза в три меньше предыдущих.
3) Веревочка для брелка. Её даже на руку не наденешь. Очень неудобно и постоянно боишься, что оставишь где-то.
Очень понравилось дружелюбие гардеробщицы, мужчины с полотенцами, фитнес-консультанта и работников отдела продаж. А 26.11.17 отдельное спасибо гардеробщице за участие в разрешении возникших вопросов о новой системе с брелком. Другая смена ресепшна 28.11.17 оказалась не лучше.

29.03.2017

Анонимный пользователь

Оценка: 2

После посещения тренировок,появилась сыпь на теле!заалючение дерматовенеролога-разноцветный лишай!!!!(справка прилагается)заразное заболевание,как вам известно!напрашиваетя обращение в соответствующие инстанции(возникает вопрос:На сколько качественная у Вас термическая обработка»???((

Мнений показано: 20 из 34 суждений.

Фитнес-центр FITNESS HOUSE: разбор 20 отзывов покупателей, сотрудников на сайте kzn.rubri.co. Рейтинг: 3.6 из 5.

6118 посещений страниц фирмы.

Эволюция специфического для человека тандемного повтора, связанного с БАС

Am J Hum Genet. 3 сентября 2020 г .; 107(3): 445–460.

, ¹ , ¹ , ¹ , ¹ , ¹ , ^{2, 3} , ⁴ , ^{2, 5} , ^{2, 5} , ⁶ , ⁷ , ⁷ , ^{1, 8} , ⁸ , ^{6, 9} , ⁶ , ¹⁰ , ^{4, 11} , ^{2, 5} , ^{2, 3, 5} и ^{1, 4, ∗}

Мередит М.

Курс

¹ Отделение медицинской генетики Медицинской школы Вашингтонского университета, Сиэтл, Вашингтон 98195, США

Кэтрин Гудснюк

¹ Отделение медицинской генетики Медицинской школы Вашингтонского университета, Сиэтл, Вашингтон 98195, США

Samuel N. Smukowski

¹ Отделение медицинской генетики, Медицинская школа Вашингтонского университета, Сиэтл, Вашингтон 98195, США

Косуке Уинстон

¹ Отделение медицинской генетики, Школа медицины Вашингтонского университета , Сиэтл, Вашингтон 98195, США

Нитин Десаи

¹ Отделение медицинской генетики Медицинской школы Вашингтонского университета, Сиэтл, Вашингтон 98195, США

Джей П.Ross

² Монреальский неврологический институт и больница Университета Макгилла, Монреаль, QC h4A 2B4, Канада

³ Факультет генетики человека, Университет Макгилла, Монреаль, QC h4A 0C7, Канада

6 Арвис Суловари 90

Отделение геномных наук, Вашингтонский университет, Сиэтл, Вашингтон, 98195, США

Синтия В.

Бурасса

² Монреальский неврологический институт и больница, Университет Макгилла, Монреаль, QC h4A 2B4, Канада

^{5 Департамент 9 Неврология и нейрохирургия, Университет Макгилла, Монреаль, КК h4A 2B4, Канада}

Дэн Шпигельман

² Монреальский неврологический институт и больница, Университет Макгилла, Монреаль, КК h4A 2B4, Канада

⁵ Университет Макгилла, Монреаль, QC h4A 2B4, Канада

Жюльен Кутуи

⁶ Факультет генетики, Стэнфорд University, Stanford, CA 94305, USA

Chang-En Yu

⁷ Гериатрический исследовательский, образовательный и клинический центр, VA Puget Sound Health Care System, Seattle, WA 98108, USA

Debby W.Tsuang

⁷ Гериатрический исследовательский, образовательный и клинический центр, VA Puget Sound Health Care System, Seattle, WA 98108, USA

Suman Jayadev

¹ Отделение медицинской генетики, Медицинская школа Вашингтонского университета, Сиэтл

Марк А.

Кей США

⁹ Кафедра педиатрии Стэнфордского университета, Стэнфорд, Калифорния 94305, США

Аарон Д.Gitler

⁶ Факультет генетики Стэнфордского университета, Стэнфорд, Калифорния 94305, США

Николя Дюпре

¹⁰ Ось нейробиологии, CHU de Québec-Université Laval & Department of Medicine, Q1J City Laval 1Z4, Canada

Evan E. Eichler

⁴ Факультет геномных наук, Вашингтонский университет, Сиэтл, Вашингтон, 98195, США

¹¹ Медицинский институт Говарда Хьюза, Вашингтонский университет, Сиэтл, Вашингтон, 998195, США

Патрик А.Дион

² Монреальский неврологический институт и больница Университета Макгилла, Монреаль, QC h4A 2B4, Канада

⁵ Кафедра неврологии и нейрохирургии Университета Макгилла, Монреаль, QC h4A 2B4, Канада

Guy A.0769 Guy A.07

² Монреальский неврологический институт и больница Университета Макгилла, Монреаль, QC h4A 2B4, Канада

³ Департамент генетики человека, Университет Макгилла, Монреаль, QC h4A 0C7, Канада

⁵ Департамент неврологии и неврологии , Университет Макгилла, Монреаль, QC h4A 2B4, Канада

Пол Н.

Valdmanis

¹ Отделение медицинской генетики, Медицинская школа Вашингтонского университета, Сиэтл, Вашингтон 98195, США

⁴ Отделение геномных наук, Вашингтонский университет, Сиэтл, Вашингтон 98195, США

^{5 Отделение Медицинской генетики, Медицинский факультет Вашингтонского университета, Сиэтл, Вашингтон, 98195, США}

² Монреальский неврологический институт и больница, Университет Макгилла, Монреаль, QC h4A 2B4, Канада

³ Факультет генетики человека, Университет Макгилла , Montreal, QC h4A 0C7, Канада

⁴ Кафедра геномных наук, Вашингтонский университет, Сиэтл, Вашингтон 98195, США

⁵ Кафедра неврологии и нейрохирургии, Университет Макгилла, Монреаль, QC h4A 2B4, Канада

⁶ Факультет генетики Стэнфордского университета, Стэнфорд, Калифорния 94305, США

⁷ Гериатрический исследовательский, образовательный и клинический центр, VA Puget Sound Health Care System, Сиэтл, Вашингтон 98108, США

⁸ Кафедра неврологии, Медицинская школа Вашингтонского университета, Сиэтл, Вашингтон 98195, США

⁹ Кафедра педиатрии, Стэнфордский университет, Стэнфорд, Калифорния 94305, USA

¹⁰ Neuroscience Axis, CHU de Québec-Université Laval & Department of Medicine, Université Laval, Quebec City, QC G1J 1Z4, Canada

¹¹ Howard Hughes Medical Institute, WA Washington, Seattle 98195, USA

Поступила в редакцию 23 апреля 2020 г. ; Принято 8 июля 2020 г.

Авторские права © Американское общество генетики человека, 2020 г. Эта статья цитировалась в других статьях PMC.

Дополнительные материалы

Документ S1. Рисунки S1–S10

GUID: E9524F82-539E-40A7-B606-013B85423585

Таблица S1. Список специфичных для человека Intronic Ab Initio Переменное количество тандемных повторов

GUID: DF47A55F-75A4-41CE-B14B-9749EE1B61A2

Таблица S2. Список предполагаемых мишеней наиболее распространенных микроРНК, полученных из повтора WDR7

GUID: 5E20D599-766C-45C5-871C-E7CF8F4D4998

Документ S2.Статья плюс дополнительная информация

GUID: 3ED4A9CC-B2D3-4F72-A8DC-52527D27445B

902B-52527D27445B

Считывания последовательности РНК для расчета редактирования РНК доступны на сайте synapse.org под регистрационным номером syn7416949. Данные о приматах, отличных от человека, доступны от Zenodo под регистрационным номером 10. 5281/zenodo.3401477. Остальные данные не являются общедоступными из-за институциональных этических ограничений.

Abstract

Предполагается, что тандемные повторы вносят вклад в специфические черты человека, и известно, что более 40 тандемных повторов вызывают неврологические заболевания. Здесь мы характеризуем специфичный для человека тандемный повтор с переменным числом нуклеотидов (VNTR) длиной 69 п.н. в последнем интроне WDR7 , который демонстрирует поразительную изменчивость как по количеству копий, так и по составу нуклеотидов, как было выявлено с помощью секвенирования с длительным чтением. Кроме того, большее количество копий повторов значительно обогащено в трех независимых когортах людей со спорадическим боковым амиотрофическим склерозом (БАС).Каждая единица повтора образует структуру «стебель-петля», способную продуцировать микроРНК, а повторная РНК может агрегировать при экспрессии в клетках. Мы использовали его замечательную изменчивость последовательности, чтобы выровнять повтор в 288 образцах и раскрыть механизм его расширения. Мы обнаружили, что повтор расширяется в направлении 3′-5′ в группах повторяющихся единиц, кратных двум. Паттерны расширения, которые мы наблюдали, соответствовали событиям дублирования и ошибке репликации, называемой переключением шаблона.Мы также заметили, что VNTR расширяется как в геномах денисовца, так и в геноме неандертальца, но фиксируется на уровне одной копии или меньше у нечеловеческих приматов. Оценка повторов в образцах проекта «1000 геномов» показывает, что некоторые сегменты повторов присутствуют или отсутствуют исключительно в определенных географических популяциях. Большой размер повторяющейся единицы в этом VNTR, наряду с нашей стратегией мультиплексного секвенирования, предоставляет беспрецедентную возможность для изучения механизмов повторной экспансии и основу для оценки роли VNTR в эволюции человека и заболеваниях.

Ключевые слова: боковой амиотрофический склероз, БАС; тандемный повтор с переменным числом повторов, VNTR; последовательность длительного чтения; нейродегенеративное заболевание; некодирующая РНК; тандемное повторное расширение; ген-модификатор; эволюционная генетика; WD-повторный домен 7, WDR7; древние геномы

Введение

Известно, что более 40 экспансий тандемных повторов в геноме человека вызывают неврологические заболевания. ^{1 , 2 , 3} Это число продолжает увеличиваться с растущим внедрением технологии секвенирования с длинным считыванием, которая может секвенировать более длинные повторы, такие как тандемные повторы с переменным числом повторов (VNTR; повторы с единицей повторения семи и более нуклеотидов).До сих пор большинство тандемных повторов, связанных с заболеванием, были короткими тандемными повторами (STR; повторы с повторяющейся единицей из шести или менее нуклеотидов), и механизм, посредством которого повторы, связанные с заболеванием, расширяются, было трудно изучить, поскольку их повторение тракты, как правило, непрерывны, и поэтому их точное местонахождение неясно. Технология секвенирования с длинным чтением показывает, что многие VNTR гораздо более полиморфны, чем предполагает эталонный геном человека. Их длина и изменчивость дают нам беспрецедентную возможность наблюдать механизм их расширения.

До сих пор два VNTR были тщательно изучены при неврологических заболеваниях: один в АТФ-связывающей кассете подсемейства A, член 7 ( ABCA7 [MIM: 605414]), связанный с болезнью Альцгеймера (MIM: 104300) ⁴ , и один в кальции субъединица потенциалзависимого канала альфа1 C ( CACNA1C [MIM: 114205]), связанная с шизофренией (MIM: 181500) и биполярным расстройством (MIM: 125480). ⁵ Оба этих VNTR были изучены, потому что они были обнаружены в непосредственной близости от сигнала полногеномного исследования ассоциации для ассоциированного заболевания.Высокая заболеваемость неврологическими заболеваниями у людей частично связана с быстрыми изменениями в генах, участвующих в функционировании мозга, ^{6 , 7 , 8} и тандемные повторы, которые, как предполагается, вносят свой вклад в эти специфические для человека черты. ⁹ Чтобы лучше понять роль, которую тандемные повторы могут играть в здоровье и заболеваниях мозга человека, мы использовали полногеномный подход, ища VNTR, которые размножались только у людей и демонстрировали гораздо большую изменчивость в популяции неврологических заболеваний, как по сравнению с эталонным геномом.

Одним из нейродегенеративных заболеваний, при котором повторные экспансии являются причиной значительного числа случаев, является боковой амиотрофический склероз (БАС [MIM: 105400]). БАС является быстро прогрессирующим заболеванием двигательных нейронов с летальным исходом. В настоящее время наиболее распространенным вариантом, обнаруживаемым как в семейных, так и в спорадических случаях, является экспансия интронного тандемного повтора гексануклеотидов в субъединице комплекса C9orf72-SMCR8 ( C9orf72 [MIM: 614260]). ^{10 , 11} Еще одна повторная экспансия в атаксине 2 ( ATXN2 [MIM: 601517]) модифицирует заболевание при БАС, когда число повторных копий составляет от 27 до 33 (но не > 34, что вызывает спиноцеребеллярную атаксию 2 [SCA2 (MIM: 183090)]). ^{12 , 13} Другие ключевые гены с патогенными изменениями кодирования включают супероксиддисмутазу 1 ( SOD1 [MIM: 147450]), ¹⁴ TAR-ДНК-связывающий белок ( MMIBP, который кодирует TARDMIBP : 605078]), ^{15 , 16} и FUS РНК-связывающий белок ( FUS [MIM: 137070]). ^{17 , 18} Тем не менее, на эти и другие генетические варианты приходится только ∼50–60% случаев БАС с сильным семейным анамнезом БАС (fALS) и 10–20% случаев со спорадическими формами БАС. БАС (сБАЛС). ¹⁹ Отсутствующая наследуемость для этого сложного заболевания может быть частично объяснена другими неидентифицированными расширениями тандемных повторов, которые могут действовать как причины или модификаторы заболевания. ²⁰ Действительно, две или более мутации, которые по отдельности имеют низкую вероятность вызвать заболевание, но действуют синергетически, вызывая заболевание, уже были идентифицированы в небольшом количестве (1–4%) случаев fALS и sALS. ²¹

В дополнение к выявлению вариантов, вызывающих заболевание, описание полноразмерной последовательности VNTR может улучшить наше понимание механизмов, лежащих в основе экспансии тандемных повторов.Механизм, с помощью которого тандемные повторы расширяются, до сих пор трудно точно определить, поскольку однородность большинства STR (например, тринуклеотидных повторов CAG) скрывает точное место, где происходит расширение. В этих случаях трудно узнать, на сколько копий повтора расширяется повтор, и происходят ли расширения с 3′-конца, 5′-конца или даже в середине последовательности повторов. Напротив, глядя на полноразмерную последовательность VNTR, которая демонстрирует значительно большую внутреннюю изменчивость нуклеотидов, мы можем отследить точные точки разрыва расширения.

Здесь мы впервые определили возможные VNTR, связанные с заболеванием, путем определения длин специфичных для человека тандемных повторов в базе данных всего генома случаев sALS. Из них мы обнаружили повтор длиной 69 п.н. в домене 7 повторов WD ( WDR7 [MIM: 613473]) — гене, участвующем в синаптической передаче ^{22 , 23} , — который заметно отличался по сравнению с эталонным геномом человека. . В этом повторе также отсутствовали какие-либо соседние области, которые могли бы способствовать его расширению (например, ретроэлементы).Последующее длинное секвенирование подтвердило изменчивость длины, которую мы наблюдали, и выявило уникальный паттерн внутренней изменчивости, который предоставил нам беспрецедентную возможность визуализировать и проанализировать его паттерн расширения. Мы обнаружили, что более высокое число копий VNTR было обогащено в случаях sALS и что VNTR может образовывать производные от повторов микроРНК и агрегаты РНК in vitro . В дополнение к его связи с болезнью, изменчивость этого повтора также предоставила уникальную возможность наблюдать время и место его распространения, а также его состояние в древних геномах и различных современных популяциях.

Материалы и методы.

Образцы ДНК.

²⁴ Образцы крови были собраны и преобразованы в клеточные линии лимфобластов. ДНК экстрагировали из клеточных линий с использованием набора DNeasy (QIAGEN 69504). Дополнительные 96-луночные планшеты с образцами ДНК были получены из Института Кориелла. Всего была получена ДНК от 376 человек с БАС, 531 человека с болезнью Паркинсона и 639 контрольных субъектов.ДНК 64 человек с болезнью Альцгеймера и 32 контрольных субъектов того же возраста и пола была получена из Исследовательского центра болезни Альцгеймера (ADRC) Вашингтонского университета (UW).

ПЦР

Для ПЦР-амплификации повтора WDR7 использовали стандартную ДНК-полимеразу Taq (New England BioLabs M0273) в соответствии с протоколом производителя для подготовки образцов с примерно 25 нг ДНК. Температуру отжига термоциклера снижали с 60°C до 55°C в течение 10 циклов, а затем 25 циклов при 55°C, а время удлинения устанавливали равным 3 минутам на цикл.Этот метод успешно охватывал оба аллеля каждого образца примерно в 70% случаев. Для тех образцов, в которых один или оба аллеля не амплифицируются, ПЦР повторяли с использованием ДНК-полимеразы LongAmp Taq (New England BioLabs M0323). Образцы были подготовлены аналогичным образом в соответствии с протоколом производителя. Температура отжига была установлена ​​на уровне 55°C, а время удлинения было установлено на уровне 4 минут на цикл. Затем весь образец объемом 25 мкл наносили с красителем на 1% агарозный гель. Количество повторяющихся копий в каждом аллеле рассчитывали по размеру полосы на геле. Праймеры, использованные для повтора, располагались на расстоянии 82 п.н. до и 84 п.н. после местоположения повтора: 5′-GCCGAATTTGAAGAGGTCATAG-3′ (прямой) и 5′-TAGAAAAGGCCATTACAACTGG-3′ (обратный).

Секвенирование PacBio SMRT

Сначала мы амплифицировали повтор WDR7 с помощью ПЦР с использованием тех же праймеров, перечисленных выше, в течение 10 циклов, используя 100 нг ДНК. Затем для амплификации в течение еще 25 циклов использовали праймеры со штрих-кодами из 12 нуклеотидов. Мы использовали комбинации 12 прямых и 12 обратных праймеров, чтобы получить 144 различных ампликона.Образцы объединяли, очищали и измеряли их концентрацию. Затем свободные праймеры удаляли шариками Ampur. Библиотека секвенирования была подготовлена, и адаптеры колокола SMRT были лигированы службой секвенирования UW PacBio. Образцы запускали в системе PacBio Sequel System с использованием химии версии 2.1 в первом раунде и в системе Sequel II с использованием химии версии 3.0 во втором раунде.

Демультиплексирование и анализ образцов

Образцы были отсортированы по сочетанию прямых и обратных штрих-кодов, в результате чего было получено ~132 различных файла (например, 92% образцов были успешно амплифицированы в первом цикле).Затем каждый образец, сгруппированный по его штрих-коду, был объединен для идентификации нескольких экземпляров одной и той же идентичной последовательности с помощью команды свернутого инструментария FASTX, которую мы приняли за пример истинной последовательности. В случаях, когда мы идентифицировали только одноэлементные чтения, мы выполнили выравнивание ClustalW этих чтений. Затем мы взяли консенсусную последовательность от каждого в качестве репрезентативной последовательности от этого человека. Сопоставив и определив количество повторяющихся единиц во всех образцах, мы получили логотип последовательности с помощью WebLogo. ²⁵

Создание графика выравнивания последовательностей

Чтобы выровнять два консенсусных аллеля из каждого образца после демультиплексирования, мы сначала обрезали все последовательности до и после повтора. Каждой повторяющейся единице был присвоен однобуквенный код. Мы не использовали буквы A, C, G или T, чтобы избежать двусмысленности, связанной с использованием нуклеотидов ДНК. Если последовательность не соответствовала первым 18 полученным буквам/повторяющимся единицам, ей присваивался «X». Затем мы использовали инструменты выравнивания белков ClustalW, чтобы выровнять каждую строку букв из каждого аллеля, как если бы они были аминокислотами.При визуализации полученной последовательности мы заметили, что большая часть консервативности последовательности приходится на 3′-конец, который был гораздо менее изменчив, чем 5′-участок. Поэтому мы выровняли по правому краю каждое чтение, сохранив при этом несколько коротких промежутков, где сокращения были наиболее экономными при выравнивании. Затем мы вручную поменяли местами последовательности, чтобы они больше всего походили на своих соседей. Затем каждая буква была преобразована в свой уникальный цвет для улучшения визуализации. Наконец, образцы были расшифрованы, чтобы выявить их клинический статус.

Оценка длины повтора

Мы использовали ранее опубликованный метод ⁵ для оценки глубины считывания с использованием данных полногеномного секвенирования. Были подсчитаны чтения, которые сопоставлены с повтором, по сравнению с окном геномной последовательности размером 100 т.п.о. вокруг повтора WDR7 . Фракция обогащения или истощения прочтений использовалась для расчета предполагаемой длины по сравнению с эталонным геномом человека (hg38, который показывает шесть копий повтора). Используемые наборы данных полногеномного секвенирования включали данные Национального института генетики старения сайта хранения данных о болезни Альцгеймера (NIAGADS) и Answer ALS.Образцы Квебека поступают от канадцев преимущественно французского происхождения, живущих в Квебеке. Все проанализированные образцы были выровнены по hg38. Образцы были европейского происхождения (по самоотчетам).

Расчет расстояния между повторами

Чтобы рассчитать расстояние между отдельными повторяющимися единицами, мы подсчитали расстояние между одной повторяющейся единицей и всеми последующими повторяющимися единицами в этом образце. Например, если одна повторяющаяся единица появляется на позициях 2, 6 и 12 в повторении, будут подсчитаны числа 4 (6 – 2), 10 (12 – 2) и 6 (12 – 6).Этот процесс повторялся итеративно для всех повторяющихся единиц из каждого образца, который подвергался длительному секвенированию.

Расчеты древней ДНК

Исходные данные для расчетов древней ДНК были получены из опубликованных геномов алтайского неандертальца ²⁶ и денисовца ²⁷ образцов. Области, соответствующие повтору WDR7 , были преобразованы в файлы SAM, и отдельные чтения были запрошены на наличие полной повторяющейся единицы из 69 п.н., содержащейся в прочтении последовательности из 100 п.н.

Анализ образцов проекта «1000 геномов»

Прочтения, сопоставленные с повтором WDR7 (координаты hg19 chr18:54 691 726–54 692 180), были извлечены из файлов BAM для каждого человека из проекта «1000 геномов». ²⁸ Наличие каждой повторяющейся единицы учитывалось в каждом образце. Чтобы идентифицировать новые повторяющиеся единицы, не идентифицированные в нашем первоначальном скрининге PacBio, мы искали последовательности, которые соответствовали последовательностям из 12 нуклеотидов в начале или в конце повтора и имели длину 67–70 нуклеотидов.

Construct Generation

Для клонирования использовали те же праймеры для ПЦР, которые использовались для амплификации повтора WDR7 , с добавлением выступающих частей для клонирования продукта в вектор pIRES-NEO с использованием набора In-Fusion HD Cloning Plus (Takara 638910). ). Повторы длиной 1, 4, 6, 10, 15, 27 и 36 копий были амплифицированы из контрольных и контрольных образцов ДНК из Института Кориелла.

Культура клеток и трансфекция

Клетки HEK293 были получены из Американской коллекции типовых культур (ATCC).Их выращивали в 10% DMEM и трансфицировали с использованием трансфекционного реагента Lipofectamine 3000 (Invitrogen L3000015) в соответствии с инструкциями производителя. Через 48 ч РНК экстрагировали с использованием реагента для лизиса QIAzol (QIAGEN 79306). Клетки MEF также получали из ATCC и выращивали в 15% DMEM. Их трансфицировали таким же образом, как и клетки HEK293. Лимфобласты культивировали в 10% IMDM.

Локализация РНК

Пользовательские флуоресцентные зонды Stellaris Гибридизация in situ (FISH), меченные красителем Quasar 570, были заказаны в компании LGC Biosearch Technologies.Клетки HEK293 и MEF обрабатывали зондом в соответствии с инструкциями производителя, а затем визуализировали на конфокальном микроскопе Olympus FluoView FV1000. Изображения анализировали в CellProfiler, ²⁹ , используя конвейер подсчета спеклов.

Секвенирование малых РНК

Секвенирование малых РНК проводили, как описано ранее. ^{30 , 31} Вкратце, 3 мкг РНК из клеток HEK293 лигировали с 3′-универсальным линкером для клонирования микроРНК (New England Biosciences S1315) с использованием РНК-лигазы T4 1 (New England Biosciences M0204) без АТФ, затем запускали на 15% мочевино-полиакриламидный гель. Фрагменты длиной 17–28 нуклеотидов вырезали и лигировали с 5′-штрих-кодами, снова используя РНК-лигазу T4, затем мультиплексировали и секвенировали на машине Illumina 50 bp miSeq в Центре точной медицины UW. Адаптеры и штрих-коды были обрезаны, сохранив малые РНК длиной > 18 нуклеотидов, а затем последовательности были выровнены с человеческими микроРНК на miRBase (версия 15) ³² с использованием Bowtie v.0.12.7 с учетом 2 несоответствий. ³³

Прогнозирование мишеней микроРНК

Для оценки предсказанных мишеней для микроРНК, полученных из повтора WDR7 , мы использовали исходную последовательность наиболее распространенной последовательности микроРНК, обнаруженную с помощью секвенирования малых РНК (UCACAUA), в качестве входных данных для TargetScan v7. .2 программа. ³⁴ Принимая во внимание специфический для человека характер повтора, мы не учитывали сохранение видов в качестве соображения при сообщении мРНК-мишеней.

Свертывание РНК

РНК от нечеловеческих приматов, эталонного генома человека (GRCh48) и одного больного человека из семьи, пораженной ALS3 , была включена в программу РНК-укладки — часть пакета ViennaRNA Package 2. 0. ³⁵ Здесь представлены графики центроидов, демонстрирующие вероятности пар оснований.

Филогенетический древовидный анализ

В общей сложности 28 образцов из 5 различных популяций ^{28 проекта 1000 геномов (ASW, CEU, CHB, JPT и YRI) были включены в наш давно читаемый конвейер секвенирования.Мы использовали программу VCFtoTree 36 для извлечения данных последовательности до и после повтора WDR7 и создания выравниваний образцов. Мы включили 10 kb последовательности непосредственно перед повтором (hg19 chr18: 54677408–54687408). Последовательность сразу после повтора имела несколько однонуклеотидных полиморфизмов (SNP), что препятствовало разрешению различных популяций на дереве; в результате мы использовали последовательность, начинающуюся с 10 кб после повтора и заканчивая 20 кб после повтора (hg19 chr18: 54 694 892–54 704 892).Мы использовали FastTree 2 37 для создания филогенетических деревьев приблизительно с максимальным правдоподобием полученных выравниваний. Затем мы наложили два аллеля, полученные в результате секвенирования с длительным считыванием для каждого индивидуума, и сохранили аллель, который наиболее точно соответствовал соседнему. В то время как выравнивание VCFtoTree поэтапно для каждого человека, SNP не присутствовали в той части повтора, которая была амплифицирована, поэтому мы не могли сопоставить каждый аллель повтора с сегментами поэтапного дерева.}

Анализ редактирования РНК

Мы извлекли считывания последовательностей РНК, которые соответствуют повтору WDR7 , из образцов мозга из банка мозга Mount Sinai, которые были депонированы в базе данных Accelerating Medicines Partnership — болезнь Альцгеймера (AMP-AD). ³⁸ Прочтения были объединены по всем образцам. В случаях, когда изменение A-G было выявлено в считываниях секвенирования РНК, но не в нашем комбинированном анализе последовательности ДНК, мы рассчитывали процентную частоту каждого несоответствия A-G от общего числа чтений.

Статистический анализ

Статистический анализ был выполнен с использованием Prism 8. 0.1 (программное обеспечение GraphPad). Сводный тест Д’Агостино-Пирсона K2 использовался для проверки нормального распределения данных. Двусторонний критерий Манна-Уитни использовался для сравнения групп из двух человек с непараметрическим распределением, для которых даны медиана и межквартильный размах (IQR), а также среднее значение и стандартное отклонение (SD).Однофакторный критерий Крускала-Уоллиса использовался для сравнения групп более двух с непараметрическим распределением, за которым следовал критерий множественных сравнений Данна, если Крускал-Уоллис давал p < 0,05. Значения R ² на диаграммах рассеяния были получены с использованием простой линейной регрессии.

Результаты

Чтобы идентифицировать VNTR, которые могут действовать как модификаторы заболевания при БАС, мы оценили VNTR, специфичные для человека, расположенные в интронах и сильно вариабельные, согласно анализу 15 человек, чьи геномы были полностью секвенированы и фазированы с использованием длинных последовательность чтения. ³⁹ Мы сосредоточились на интронных областях (в отличие от межгенных областей), чтобы идентифицировать транскрибируемые области, наиболее вероятно влияющие на заболевание, подобно гексануклеотидному повтору в C9orf72 . ^{10 , 11} Мы также исключили повторы, которые были частью повторяющихся элементов, особенно повторы SINE-VNTR-Alu, которые имеют переменную длину, но картируются во многих местах генома человека. В общей сложности 20 повторов соответствовали этому критерию с длиной единицы повтора VNTR> 25 нуклеотидов, которая однозначно картировалась в одном месте в геноме человека (таблица S1).Затем их геномные координаты использовались для получения расчетной длины чтения относительно эталонного генома человека в наборе данных из 97 геномов из Answer ALS (A). Один VNTR размером 69 п.н. в последнем интроне WDR7 особенно поразителен своим большим размером и переменной длиной (A). WDR7 кодирует β-субъединицу рабконнектина-3, которая участвует в Ca ²⁺ -зависимом экзоцитозе нейромедиатора и в высокой степени экспрессируется в головном мозге. ⁴⁰ Кроме того, WDR7 привлекателен, учитывая, что его геномное расположение находится в пределах локуса ALS3 (MIM: 606640) на chr18q21. ²⁴ Хотя впоследствии было обнаружено, что семейство, использованное для картирования локуса, имеет вариант в FUS , ¹⁷ 14 из 15 пораженных индивидуумов, тем не менее, все еще картируют область chr18q21, что указывает на то, что может присутствовать модифицирующий ген.

VNTR в WDR7 Сильно варьирует у людей

(A) Расчетная длина считывания нескольких специфичных для человека и интронных VNTR, которые не являются производными от повторяющихся элементов. Длина считывания дана относительно эталонного генома, чтобы оценить, насколько переменной может быть длина считывания каждого VNTR.Длина чтения была получена из базы данных Answer ALS (n = 97 образцов). Черные линии показывают среднее значение и стандартное отклонение. VNTR в WDR7 демонстрирует большую изменчивость, чем другие VNTR.

(B) Положение VNTR в интроне 27 WDR7 , рядом с сайтом гиперчувствительности к ДНКазе I и областями многовидовой консервации. Сам повтор не сохраняется у разных видов. На нижней схеме показана область, которая была включена в последующую амплификацию ПЦР.

(C) Филогенетическое древо, показывающее события эволюции повторяющихся областей у человека и нечеловеческих приматов (красные штриховые метки).Рядом приведены предсказанные структуры РНК для каждой итерации.

Повторная последовательность

WDR7 специфична для приматов и увеличивается только у людей

С помощью филогенетического анализа мы определили, что интересующая область WDR7 присутствует только у приматов (B). Анализируя эталонные геномы приматов, не являющихся человеком, и поэтапные геномы нескольких человекообразных человекообразных обезьян, мы обнаружили, что у беличьих обезьян, мартышек, зеленых мартышек, бабуинов, макак-резусов и гиббонов есть общая область из 47 п. н., что соответствует примерно двум -трети повторяющейся единицы из 69 п.н. (B и 1C).Сохранение этой последовательности из 47 п.н. у мышиных лемуров падает до 74%. Орангутаны, шимпанзе, гориллы и бонобо имеют ровно одну копию полной последовательности из 69 п.н. в дополнение к 47 п.н., а сама последовательность идентична у разных видов (рис. S1). Эталонный геном человека, напротив, показывает 6 копий последовательности 69 п.н. в дополнение к последовательности 47 п.н. Интересно, что последовательность из 69 п.н., обнаруженная у человекообразных обезьян, по прогнозам, образует уникальную вторичную структуру с комплементарными областями, образующими шпильку (C).Расширение повтора у людей появляется ab initio , что означает отсутствие каких-либо смежных или внутренних последовательностей повторов, которые могли бы способствовать его расширению, что делает его уникальным среди VNTR. ³⁹ В целом, этот анализ показывает, что экспансия повтора специфична для человеческой линии.

Повтор

WDR7 сильно различается по длине и длиннее у пациентов с сБАС

Учитывая его уникальные свойства, мы дополнительно охарактеризовали распределение длины VNTR с помощью ПЦР-амплификации с последующим секвенированием SMRT у 376 человек с сБАС, 531 человек со спорадической болезнью Паркинсона (sPD [MIM: 168600]) и 639 контрольных образцов, полученных из Института Кориелла.Распределение более длинного амплифицированного аллеля на человека колебалось от 1 до 86 копий (А). Среднее и медианное количество копий самого длинного аллеля на человека также было значительно выше у людей с БАС, чем у контрольных субъектов (p = 0,0003; критерий Манна-Уитни), что позволяет предположить, что повторение может изменить восприимчивость к БАС. Примечательно, что наибольшая наблюдаемая нами длина повтора (86 копий) была обнаружена у человека, у которого развился сБАС в возрасте 72 лет.

Распределение количества копий VNTR в самых длинных амплифицированных аллелях у людей с сБАС и сПД и контрольных субъектов, полученных из Института Кориелла. Количество повторных копий значительно выше у пациентов с БАС (медиана [IQR] = 17,5 [9–24], среднее ± SD = 17,7 ± 10,4) по сравнению с контрольными субъектами (медиана [IQR] = 15 [8–21], среднее ± SD = 15,2 ± 9,66; p = 0,0003; критерий Манна-Уитни).

(B) Сравнение числа копий WDR7 VNTR, оцененного по полногеномному секвенированию. Длина считывания была получена из баз данных NIAGADS (n = 917 субъектов с БА и 675 контрольных субъектов), Quebec (n = 159 субъектов с БАС и 311 контрольных субъектов) и Answer ALS (n = 307 субъектов с БА и 53 контрольных субъекта). .Черные линии показывают среднее значение и стандартное отклонение. Значения p были определены с помощью теста Крускала-Уоллиса (который дал p <0,0001) с последующими множественными сравнениями Данна. ^∗ p < 0,05, ^∗∗∗ p < 0,001, ^∗∗∗∗ p < 0,0001, «нс» означает «незначительно».

(C) Вторичная структура шпильки одной повторяющейся копии с выделенными 6 из 69 позиций вариабельной пары оснований.

(D) Повтор логотипа WDR7 VNTR, что указывает на относительную консервативность или изменчивость в каждом положении нуклеотида.

(E) 18 «родительских» последовательностей повторяющихся единиц, которые составляют >99% идентифицированных повторяющихся единиц. Вариабельные нуклеотиды выделены. Каждой родительской последовательности был присвоен цвет, показанный слева, используемый для выравнивания и визуализации в .

(F) Частота каждой повторяющейся единицы среди всех людей (n = 144 человека, всего 6041 отдельная повторяющаяся единица).

Чтобы подтвердить этот вывод, мы оценили число повторных копий WDR7 в данных полногеномного секвенирования из NIAGADS (n = 917 пациентов с болезнью Альцгеймера и 675 контрольных субъектов), Квебек (n = 159 пациентов с сБАС и 311 контрольных пациентов). субъекты) и базы данных Answer ALS (n = 307 испытуемых и 53 контрольных субъекта).Образцы SALS из когорты Квебека и когорты Answer ALS демонстрировали значительно более высокое количество повторных копий, чем контрольные субъекты Quebec, а также контрольные субъекты NIAGADS (B; p <0,0001; критерий Крускала-Уоллиса с последующими множественными сравнениями Данна). Для сравнения, количество повторных копий в образцах со спорадической болезнью Альцгеймера (БА), доступных через NIAGADS, не отличалось от контрольных субъектов (B). В то время как во всех когортах мы наблюдали взаимосвязь между более длинной длиной повтора и риском развития БАС, мы не наблюдали взаимосвязи между более длинной длиной повтора и возрастом начала заболевания, подобно тому, что было сообщено для промежуточной длины в расширении тринуклеотидных повторов ATXN2 при БАС. (Рисунок S2). ⁴¹

Повтор

WDR7 сильно варьирует в последовательности внутреннего повтора

Затем мы охарактеризовали различия в последовательности внутреннего повтора, поскольку ранее было показано, что проскальзывание последовательности или внутренние нуклеотидные вариации в самом повторе приводят к заболеванию. ^{42 , 43 , 44} Чтобы определить точный нуклеотидный состав последовательностей, повторяющихся в наших образцах, мы использовали технологию секвенирования одной молекулы PacBio в реальном времени (SMRT). Мы провели ПЦР-амплификацию области повторов WDR7 и мультиплексировали 144 образца с длиной повтора 20 или более в одну дорожку секвенирования SMRT. Образцы были европейского происхождения (по самоотчетам) и включали 40 контрольных субъектов, 35 образцов sALS, 22 образца sPD и 43 больных и здоровых членов семьи с ALS, которые сопоставляются с локусом ALS3 . Мы захватили последовательности 288 аллелей для> 90% образцов.

Интересно, что мы определили, что ровно 6 из 69 п.н. в повторяющейся единице были вариабельными (С).Ни одно из наблюдаемых изменений не было компенсаторным изменением (т. е. когда один нуклеотид самокомплементарной области модифицирован для восстановления спаривания оснований с нуклеотидом на другой стороне дуплекса). Выровняв повторяющиеся единицы во всех образцах, мы получили логотип последовательности (D). Мы также оценили соответствие между длиной длинной последовательности SMRT и длиной, оцененной с помощью ПЦР (рис. S3; R ² = 0,479). Наша высокая глубина охвата устранила любые проблемы, связанные с вариантами одиночных нуклеотидов, особенно с короткими вставками или делециями при секвенировании с длинным считыванием.Более 99% повторяющихся единиц расщеплены на 18 исходных последовательностей, без промежуточных нуклеотидов между повторами и без вставок, делеций или нуклеотидных изменений в любом из 63 из 69 фиксированных положений.

Эти 18 исходных последовательностей состояли из нескольких комбинаций шести вариабельных нуклеотидов, присутствующих в каждой повторяющейся единице. Наиболее распространенная повторяющаяся единица составляет 28,6% от общего количества повторяющихся единиц. На следующие два приходилось 17,2% и 13,6%, а остальные менее 10% каждый (E). Любые другие повторяющиеся последовательности составляли только 0.3% или менее прочтений и также преимущественно состояли из различных комбинаций шести вариабельных нуклеотидов. Распределение каждой повторяющейся единицы было заметно сходным между субъектами, затронутыми sALS, субъектами, затронутыми sPD, и субъектами контроля (F).

Выравнивание повторяющихся аллелей

WDR7 выявляет примечательный и воспроизводимый паттерн

Чтобы визуализировать и выровнять повторяющиеся единицы у разных людей, мы сначала кодировали цветом каждую последовательность повторяющихся единиц (назначенные цвета показаны на E).Нанесение каждого полного повторяющегося аллеля для 144 образцов, секвенированных SMRT, в виде стопки цветов, а затем их выравнивание с помощью ClustalW выявило заметное смещение выравнивания к 3′-концу повтора (A). Это расхождение находится в противоположном направлении транскрипции. Напротив, мы не наблюдали такого же паттерна или структуры, когда образцы ранжировались по длине и принудительно выравнивались по 5′-концу (рис. S4). Нанесение данных с такой цветовой кодировкой также выявило несколько широких семейств повторяющихся паттернов, обозначенных «кластеризацией» похожих паттернов, что позволяет предположить, что некоторые вариации возникли независимо (A).

Выравнивание повторяющихся единиц у разных особей является кластеризованным и воспроизводимым

(A) Повторяющиеся единицы были закодированы цветом (цвета обозначены буквой E; черный цвет указывает на редкую повторяющуюся единицу без назначенного цвета), а затем аллели каждой особи были нанесены на график в виде серии цветов, от конца 5′ до конца 3′ (сверху вниз) VNTR. », а аллель, обнаруживаемый только в образцах лиц ханьского происхождения, обозначается знаком «#».

Учитывая новизну выявленного нами паттерна, мы затем определили, будет ли вторая когорта индивидуумов, включая лиц неевропейского происхождения, демонстрировать аналогичный паттерн кластеризации. В дополнение к 64 образцам от людей с БА и 32 соответствующим контрольным субъектам мы секвенировали 28 образцов из проекта «1000 геномов» и 22 образца афроамериканцев из Института Кориелла. Для этого раунда секвенирования мы не выбирали размер. Несмотря на это, мы наблюдали ту же поразительную картину кластеризации (B).Мы отметили некоторые области, специфичные для суперпопуляции, такие как расширение выборок от лиц ханьского китайского происхождения, которое началось примерно на полпути к повтору, общему с другими выборками населения, и последовательности повторяющихся единиц, уникальные для выборок от лиц африканского происхождения.

Расширение повторов происходит в одном направлении и кратно двум

Механизм расширения тандемных повторов является предметом горячих дискуссий, а место расширения трудно определить в STR, поскольку каждая повторяющаяся единица идентична (например,г. , ЦАГ). Мы использовали гетерогенность наблюдаемых повторяющихся единиц, чтобы понять, как расширяется повтор WDR7 . Сначала мы обнаружили несколько экземпляров блоков повторяющихся единиц, которые были продублированы в пределах одного и того же аллеля повтора (и А), что могло представлять события гомологичной рекомбинации. Дублирование, по-видимому, является относительно редким событием; однако, когда они происходят, они становятся новой базовой длиной, после которой добавляются дополнительные повторы. Интересно, что дупликации состояли из полных повторяющихся единиц без промежуточных вставок или делеций.

WDR7 Гетерогенность повторяющихся единиц VNTR выявляет модели расширения

(A) Репрезентативные примеры наблюдаемых моделей последовательностей повторов. Вверху: пример того, как мы рассчитали расстояние между первым экземпляром повторяющейся единицы и следующим для каждой повторяющейся единицы в каждом аллеле. Посередине: пример, показывающий, что если редкая повторяющаяся единица (черная) была продублирована, соседняя повторяющаяся единица (желтая) также была продублирована. Внизу: пример более крупных повторяющихся дубликатов.

(B) Суммарное расстояние между каждой повторяющейся единицей и самой собой.Повторяющиеся единицы в основном встречаются с периодичностью в две единицы (объединенные результаты для всех секвенированных индивидуумов из A).

(C) Разделение WDR7 VNTR в родословной семьи с БАС. Последовательности, показанные в скобках, являются предполагаемыми. Знак вопроса означает, что аллель не амплифицируется успешно.

Удивительно, но было несколько случаев, когда одни и те же повторяющиеся единицы располагались непосредственно рядом друг с другом. Вместо этого одни и те же повторяющиеся единицы чаще появляются через каждые две повторяющиеся единицы.Во многих случаях комбинации одних и тех же двух повторяющихся единиц появлялись последовательно на протяжении длительного времени, примером чего является сочетание темно-красного и пурпурного в середине графика (1). Чтобы количественно оценить это наблюдение, мы рассчитали расстояние между первым экземпляром повторяющейся единицы и следующим для каждой повторяющейся единицы в каждом аллеле (A и 4B). Когда эти вычисления были суммированы, мы обнаружили замечательную периодичность распределения повторяющихся единиц, так что они появляются почти исключительно в количестве, кратном двум.Этот паттерн был настолько фиксированным, что мы с большей вероятностью наблюдали повторяющуюся единицу на расстоянии 20 повторов от себя (1,4 т.п.н.), чем непосредственно примыкающую или на расстоянии трех повторяющихся единиц от себя (B).

Кроме того, повторяющиеся единицы, которые появлялись нечасто, были смещены к 5′-концу повтора. Если редкая повторяющаяся единица дублировалась, соседняя повторяющаяся единица также дублировалась ( и A). Это наблюдение согласуется с нашим первоначальным выводом о том, что аллели выровнены по 3′-концу повтора, но не по 5′-концу.Взятые вместе, эти данные указывают на то, что вариабельность — и, таким образом, «передний край» — экспансии проявляется на 5′-конце повтора и что экспансия происходит в комбинациях двух повторяющихся единиц.

Повтор

WDR7 не демонстрирует межпоколенческой нестабильности в семье с БАС

Среди образцов, которые мы секвенировали с помощью SMRT, было 43 больных и здоровых члена семьи с БАС. В трех секвенированных поколениях мы не наблюдали признаков изменения длины или последовательности повторов.Состав последовательности от каждого родителя к ребенку показал полную сегрегацию, включая повтор из 33 копий, который сегрегировался с болезненным состоянием БАС (C). Поэтому мы пришли к выводу, что расширение этого повтора происходит в более длительном временном масштабе, чем изменение от поколения к поколению.

Повтор

WDR7 расширяется в древних геномах

Понимание того, как расширяются специфические для человека повторы, может дать представление о моделях миграции людей. Мы сделали вывод о длине повтора WDR7 в наборах данных секвенирования всего генома с коротким чтением, подсчитав количество прочтений, которые совпадают с повтором по отношению к соседним сегментам ДНК.Мы также смогли количественно определить количество уникальных повторяющихся единиц, которые присутствовали у секвенированного человека, когда полная повторяющаяся единица была захвачена в ходе чтения последовательности (которая часто составляла 100 п. н.).

Сначала мы оценили длину и внутренний состав повтора в двух предковых геномах: неандертальца и денисовца. Геном денисовца показал нагромождение прочтений, предполагая, что длина повтора больше, чем в эталонном геноме человека, в то время как в геноме неандертальца этого не произошло (А). При ближайшем рассмотрении оказалось, что в геноме неандертальца было четыре повтора, что позволяет предположить наличие либо одной и трех, либо двух и двух повторяющихся копий на каждом аллеле (В).Между тем, геном денисовца имел примерно 50 повторов в двух аллелях (C). Основываясь на составе повторяющихся единиц, мы смогли сопоставить денисовские повторы с некоторыми современными аллелями, которые мы получили в результате секвенирования с длительным считыванием (C). В совокупности эти результаты показывают, что распространение повторов WDR7 произошло до появления современных людей.

WDR7 Оценка длины повтора и последовательности в древних геномах

(A) Выравнивание результатов секвенирования всего генома для геномов алтайских неандертальцев и денисовцев. Распределение прочтений в области WDR7 VNTR указывает на накопление прочтений в геноме денисовца и нехватку прочтений в геноме неандертальца.

(B) Индивидуальные повторяющиеся единицы, идентифицированные в геноме неандертальца. Единицы были идентифицированы в чтениях с полной повторяющейся последовательностью 69 п.н., присутствующей в чтении последовательности примерно 100 п.н. (средняя длина чтения).

(C) Отдельные повторяющиеся единицы, идентифицированные в денисовском геноме, относительная распространенность каждой единицы и корреляция современных человеческих повторяющихся аллелей, которые соответствуют этой распространенности.

Географические закономерности

WDR7 Длина и состав повторов

Затем мы изучили распределение 18 лучших повторяющихся единиц в популяциях проекта 1000 геномов и наблюдали в основном одинаковую численность и диапазон (A). При поиске новых повторяющихся единиц в этих образцах мы наблюдали соответствие между средней длиной повтора, полученной путем расчета относительной плотности коротких чтений в повторе, и фактической длиной двух аллелей, выявленных с помощью длительного секвенирования (рис.  5; R ² ). = 0.61). Более того, состав повторяющихся единиц, извлеченных из секвенирования с коротким считыванием, соответствовал составу, присутствующему в секвенировании с длинным считыванием. Некоторые новые повторяющиеся единицы были идентифицированы в африканских суперпопуляциях, которые имели переход C>T в паре оснований 56 повторяющейся единицы, всегда в сочетании с более частой делецией 1 п.н. в положении 61 и другими вариабельными нуклеотидами в других пяти общих переменных положения нуклеотидов. Чтобы дополнительно изучить структуру популяции повторяющихся единиц, мы определили кумулятивную численность каждой повторяющейся единицы (B).Этот анализ показал, что, хотя основные повторяющиеся единицы были одинаковыми среди популяций, некоторые менее частые повторяющиеся единицы были обогащены или обеднены в определенных суперпопуляциях (B и 6C).

WDR7 Длина повтора и последовательность в популяциях проекта 1000 геномов

(A) Распределение длины WDR7 VNTR в выборках проекта 1000 геномов, сгруппированных по суперпопуляции.

(B) Распределение 18 наиболее часто повторяющихся единиц в каждой популяции.В легенде числа ранжируют общую частоту последовательности вместе с нуклеотидами, присутствующими в каждом из шести вариабельных положений в повторе. Подчеркивание означает удаление.

(C) Модели обогащения или истощения конкретных повторяющихся единиц уникальны для определенных суперпопуляций.

(D) Расположение самых редких повторяющихся единиц на полном аллеле, нормализованное до 100% для каждой повторяющейся единицы. Все 18 повторяющихся единиц показаны на рисунке S6.

Когда мы оценили расположение этих редких вариантов в расширении полного повтора, полученном с помощью SMRT-секвенирования, мы обнаружили сильное смещение к 5′-концу, что согласуется с нашим предыдущим наблюдением, что расширение повтора было направленным.Редкие варианты начинают появляться только на расстоянии 14 единиц от 3′-конца повтора, а повторяющиеся единицы, обогащенные суперпопуляциями, появляются ближе к этому 5′-переднему краю (D и S6). Таким образом, глядя только на состав повторов, мы можем приблизиться к популяционному происхождению образца ДНК. Верно и обратное: глядя на окружающую генетическую структуру с использованием поэтапных данных SNP, мы можем оценить, как будет выглядеть повтор, используя филогенетический анализ (рис. S7).

Повтор

WDR7 может продуцировать микроРНК In Vitro

Каждая повторяющаяся единица имеет до 21 нуклеотида самокомплементарной последовательности, которая, согласно программному обеспечению для предсказания РНК-фолда, вероятно, складывается в структуру «стебель-петля», напоминающую микроРНК предшественник (С).Поэтому мы предположили, что эта экспансия повторов может образовывать микроРНК. Чтобы проверить эту гипотезу, мы клонировали несколько экспансий от людей с sALS и контрольных субъектов, трансфицировали клетки эмбриональной почки человека (HEK293) и выполнили секвенирование малых РНК. Мы наблюдали сильную корреляцию (R ² = 0,977) между числом выраженных копий повтора и обилием микроРНК, образующихся из структуры повтора, что указывает на то, что повтор действительно может образовывать микроРНК (А). Мы подтвердили эти результаты во второй независимой реакции трансфекции и секвенирования (рис. S8, R ² = 0.918). Возможные мишени наиболее часто обнаруживаемой микроРНК, предсказанные TargetScan, представлены в таблице S2. Хотя мы не идентифицировали последовательность в наборах нейронных данных, предполагая, что микроРНК может не накапливаться до заметных уровней in vivo , возможно, что в определенных областях, связанных с заболеванием, эти виды микроРНК могут экспрессироваться и влиять на среду транскрипции.

Функциональные последствия повторов WDR7

(A) Длина WDR7 VNTR, экспрессированного в клетках HEK293, нанесена на график относительно нормализованных микроРНК, полученных из шпильки WDR7 , как определено с помощью секвенирования малых РНК.Линейная регрессия дает R ² = 0,977. RPM — число чтений на миллион.

(B) Зонды РНК FISH, нацеленные на повтор WDR7 в клетках MEF или клетках HEK293, трансфицированных конструкциями, содержащими 0 (нетрансфицированные), 1 или 36 копий повтора. Масштабная линейка составляет 10 мкм. Количественная оценка спеклов на ячейку приведена справа. Значения p определяли с помощью теста Крускала-Уоллиса (который дал p <0,0001 для клеток MEF и p = 0,0009 для клеток HEK293) с последующим множественным сравнением Данна. ^∗∗ p < 0,01, ^∗∗∗ p < 0,001, ^∗∗∗∗ p < 0,0001.

Повтор

WDR7 образует агрегаты РНК

Чтобы выяснить, был ли повтор транскрибирован и экспортирован из ядра, мы провели РНК-FISH с использованием зондов против повтора WDR7 . Сначала мы подтвердили специфичность зондов, протестировав их на эмбриональных фибробластах мыши (MEF), которые не содержат повтор. Эти клетки показали отсутствие неспецифического связывания зонда (В).Затем MEF трансфицировали одной или 36 копиями повтора. Эти клетки демонстрировали четкую «пятнистую» картину, указывающую на агрегаты РНК в цитоплазме клеток, при этом значительно больше агрегатов в клетках, трансфицированных 36 копиями повтора, по сравнению с нетрансфицированными клетками (p < 0,0001; критерий Крускала-Уоллиса). с последующими множественными сравнениями Данна) и трансфицированными одной копией повтора (p = 0,0052). Мы повторили тот же эксперимент с клетками HEK293 и наблюдали аналогичную картину со значительно большим количеством агрегатов в клетках, трансфицированных 36 копиями повтора, по сравнению с нетрансфицированными клетками (p = 0.0007; Б).

Повтор

WDR7 подлежит редактированию РНК , который был предложен для людей с экспансией повторов C9orf72 . ⁴⁵ Мы также не отметили случаев альтернативного сплайсинга или задержания интрона ⁴⁶ в анализе qPCR и РНК-seq лимфобластов от людей с БАС (данные не показаны).Этот вывод особенно актуален, учитывая, что WDR7 не переносит варианты с потерей функции в соответствии с базой данных агрегации генома (gnomAD; pLI = 1). ⁴⁷

Однако участки с широкой комплементарностью часто являются субстратами для редактирования аденозиндеаминазами, действующими на ферменты РНК. ⁴⁸ Наше профилирование повтора в тысячах образцов ДНК позволило нам идентифицировать нуклеотидные изменения, характерные для транскриптов РНК, что указывает на события редактирования РНК. Чтобы оценить возможность редактирования повтора, мы воспользовались большим набором данных секвенирования РНК из AMP-AD. ³⁸ Это секвенирование использует истощение рибосомной РНК, а не очистку поли-А в качестве стратегии клонирования РНК, что увеличивает уровни интронных прочтений. Компиляция прочтений более чем 900 секвенированных индивидуумов выявила те же последовательности родительских повторов, которые мы наблюдали ранее; однако мы также выявили четыре позиции с несоответствием A-G, которые являются следствием редактирования A-to-I (рис. S10).

Обсуждение

Геном человека содержит не менее 21 442 полиморфных STR и VNTR, из которых 1 584 недавно были классифицированы как экспансии тандемных повторов, специфичных для человека. ³⁹ До сих пор более 40 STR были связаны с нейродегенеративными заболеваниями, ^{1 , 2} , а недавнее появление технологии секвенирования с длинным считыванием уже выявило более крупные VNTR, которые также связаны с заболеванием. Например, повтор длиной 30 п.н. в CACNA1C предрасполагает людей к биполярному расстройству и шизофрении, ⁵ , в то время как VNTR из 25 п.н. в интроне ABCA7 был идентифицирован как фактор риска для людей с атопическим дерматитом. ⁴ Хотя большее количество копий повтора в WDR7 связано с БАС, несколько дополнительных факторов отличают этот повтор от других, описанных до сих пор.

Этот VNTR состоит из большой повторяющейся единицы из 69 п.н. и отличается замечательной изменчивостью как по длине, так и по внутренней последовательности (A и ). Каждая повторяющаяся единица комплементарна и, по прогнозам, образует стабильную шпильку (C и C), а внутренняя вариация последовательности для каждой единицы строго структурирована, что позволяет проводить специфичный для ориентации опрос состава и длины прочтений (C-2E).Повторение распространяется конкретно в человеческой линии, а не только в Homo sapiens . Более того, это один из очень редкого набора 90 281 ab initio 90 282 повторов, которые не осаждаются повторяющимся элементом. ³⁹ Тем не менее, как только повтор увеличился с одной копии у приматов до двух или более у людей, произошло широкое распространение (C). Два других больших VNTR, характеризующихся до сих пор длительным секвенированием, кажутся менее предвзятыми по ориентации, чем WDR7 VNTR. Повтор CACNA1C имеет изменчивость в основном в двух областях в середине повтора. ⁵ Повтор ABCA7 динамически расширяется у нечеловеческих приматов и имеет гораздо большую внутреннюю изменчивость. ⁴

Даже у индивидуумов с одинаковой длиной повтора внутреннее расположение повторяющихся единиц часто сильно различается ( и С). Следовательно, генотипирование одного только этого повтора теоретически может позволить идентифицировать индивидуальное родство, тем более, что оно не показывает доказательств нестабильности от поколения к поколению в большой семье с БАС (С).Обогащение и истощение определенных повторяющихся единиц в различных суперпопуляциях также может позволить приблизиться к популяционному происхождению образца ДНК, просто наблюдая за этим одним VNTR. В самом деле, кластеризация схожих паттернов повторов напоминает гаплогруппы митохондрий или Y-хромосомы (то есть группы, имеющие общего предка). Более широкий охват последовательностей более разнообразных человеческих популяций может дополнительно сообщить нам о повторяющихся единицах, специфичных для отдельных популяций.

Строгий паттерн нуклеотидной вариации в повторе WDR7 — изменяются только шесть местоположений из 69 в >99% повторяющихся единиц — предполагает, что последовательность консервативна как следствие функции, или механизма экспансии, или того и другого. . Одним из соображений является то, что повтор находится проксимальнее сайта гиперчувствительности к ДНКазе (B), что может оказывать некоторое селективное давление для сохранения специфичности последовательности. Мы также были удивлены, обнаружив так много различных повторяющихся единиц, присутствующих в геноме денисовца, которые по составу последовательности перекрываются с аллелями современного человека. Наши находки как у неандертальцев, так и у денисовцев предполагают, что истоки экспансии появились раньше, чем у современных людей. Древнее происхождение повтора согласуется со стабильностью от поколения к поколению, наблюдаемой в родословной ALS3 . Изменчивость длины повторов является общей чертой STR, особенно повторов CAG при болезни Гентингтона; однако здесь мы наблюдаем фиксированную длину повтора в нескольких поколениях в родословной, предполагая, что экспансии в более крупных VNTR являются редкими, ступенчатыми событиями (C).

Во время репликации ДНК могут возникать ошибки нескольких типов. Один из возможных типов ошибок, который мог бы объяснить закономерность расширения, которую мы наблюдаем для WDR7 , — это переключение шаблона. Переключение матрицы происходит, когда зарождающаяся ведущая нить переключается со своей матрицы на зарождающуюся отстающую нить, потому что 3′-конец зарождающейся ведущей нити комплементарен последовательностям зарождающейся отстающей нити. Этот тип ошибки репликации встречается редко, но было высказано предположение, что он способствует расширению тандемных повторов. ^{49 , 50} Это происходит в основном, когда повторяющийся тракт достаточно длинный, особенно длиннее одного фрагмента Оказаки, и приводит к расширению примерно на размер одного фрагмента Оказаки: ~140 п.н. у приматов. ² Переключение шаблона, таким образом, согласуется с нашим наблюдением, что повтор расширяется в направлении от 3′ к 5′ и в единицах по два, что вместе составляет 138 п.н. Шпилька, которую мы наблюдаем для РНК, также, по прогнозам, встречается в одноцепочечной ДНК, что может помочь объяснить, почему повтор амплифицируется.

WD-повторяющиеся домены обнаружены более чем в 250 белках с разнообразными функциями, но которые обычно облегчают сборку мультимерных белковых комплексов. WDR7 также известен как rabconnectin-3β и связан с факторами обмена гуанина и белком, активирующим GTPase, для облегчения RAB3-опосредованного рекрутирования и высвобождения синаптических пузырьков. ²² RAB3 участвует в экзоцитозе и рециркуляции синаптических пузырьков, что способствует строго регулируемому процессу высвобождения кальция и нейромедиаторов. ²³ Это повторное расширение может нарушать роль, которую WDR7 играет в синаптической функции, что указывает на его связь с нейродегенеративным заболеванием.

Существенная роль WDR7 в синаптическом здоровье отражается в том факте, что он не переносит варианты с потерей функции (pLI = 1). Действительно, у человека с большой делецией 18q, которая включала часть WDR7 , наблюдалась значительная задержка развития и дисморфические черты. ⁴¹ Кроме того, имеется человеческий ускоренный участок в 20 ^ом интроне WDR7 (этот повтор находится в 27 ^ом ), а также рядом в межгенном участке перед WDR7 . ⁵¹ Аналогичным образом, WDR7 проявляет специфичную для человека подавляющую регуляцию в головном мозге в качестве мишени миР-941. ⁵² МикроРНК, которая продуцируется из повтора WDR7 , происходящего в результате специфичной для человека экспансии, также может иметь мишени, специфичные для человека, хотя этот факт исключает возможность использования консервативности в качестве параметра для идентификации возможных мишеней микроРНК. , таким образом создавая большой набор данных прогнозируемых целей (таблица S2).

Расширение повторов WDR7 может модифицировать заболевание при БАС аналогично ATXN2 , где количество промежуточных повторов расширения CAG составляет от 27 до 33 (но не >34, что вызывает SCA2) ^{12 , 13} обогащены у людей с БАС.Это открытие подтверждает идею о том, что тандемные повторы могут объяснить некоторую недостающую наследуемость при болезни. ²⁰ Каждый повтор WDR7 имеет предполагаемые сайты связывания связанных с БАС РНК-связывающих белков TDP-43 (UGUG) и гетерогенного ядерного рибонуклеопротеина A1 (HNRNPA1 [MIM: 164017]) ⁵³ (UAGGGA). ^{34 , 54} Недавние сообщения также показывают, что связанный с БАС РНК-связывающий белок FUS предпочтительно связывается с открытыми петлями шпильки РНК «стебель-петля». ^{55 , 56} Открытая петля, присутствующая в тандемном повторе WDR7 , может действовать как сайт связывания для нескольких молекул FUS и, следовательно, как разновидность РНК, которая способствует внутриклеточной агрегации FUS. Кроме того, данные перекрестного связывания и иммунопреципитации (CLIP) также предполагают, что TDP-43 взаимодействует с сайтом связывания, соседним с нервно-специфическим экзоном 17 WDR7 , ⁵⁷ , который находится примерно в 250 т.п.н. от места экспансии повтора. в интроне 27.Возможно, что дальнодействующие хроматиновые взаимодействия могут иметь место между повтором и альтернативным экзоном 17. Кроме того, события редактирования РНК могут усиливать определенные взаимодействия. Например, одно из наблюдаемых событий редактирования A-to-G изменяет последовательность с UAUGUG на UGUGUG, что является еще более сильным интерактором TDP-43. Наконец, TDP-43, FUS и HNRNPA1 вообще участвуют в обработке Микрорны, ^{58 , 59} , ⁶⁰ , , ^{60 , 61} , которые могут влиять на MicRornas, полученные из WDR7 .

VNTR являются одними из наиболее полиморфных и мутабельных частей генома. Описанный здесь VNTR особенно велик среди VNTR и заметно различается как по размеру, так и по внутренней последовательности. Кроме того, он является специфичным для человека и входит в избранную группу VNTR, которые возникли ab initio в человеческой линии. Его комплементарная последовательность образует стабильную шпильку, которая, в свою очередь, может образовывать микроРНК, и, хотя она интронна, по-видимому, экспортируется в цитоплазму, где она агрегирует.Вероятно, он расширяется за счет комбинации событий переключения шаблонов и дублирования, которые впервые произошли в геномах древних людей. Более высокое число повторяющихся копий в значительной степени связано со случаями БАС, что позволяет предположить, что оно способствует восприимчивости к БАС. Вместе наш подробный опрос этого VNTR демонстрирует ценность глубокого, долго читаемого секвенирования специфичных для человека повторяющихся областей, которые расширяются в геноме.

Доступность данных и кода

Данные для геномов неандертальца и денисовца можно получить из архивов ENA ERP002097 и ERP001519 соответственно.Считывания последовательности РНК для расчета редактирования РНК доступны на сайте synapse.org под регистрационным номером syn7416949. Данные о приматах, отличных от человека, доступны от Zenodo под регистрационным номером 10.5281/zenodo.3401477. Остальные данные не являются общедоступными из-за институциональных этических ограничений.

Благодарности

Эта работа поддержана премией Роберта Ф. Шоени за исследования от Анн-Арбора «Активность против БАС» (до PNV), Национального института общих медицинских наук (5T32GM007454-38 до М.MC), докторской стипендии Фредерика Бантинга и Чарльза Беста (FRN 159279 для JPR), Национального института здравоохранения США (NIH) R01DK078424 (для MAK) и NIH HG010169 (для EEE). Э.Э.Э. является исследователем Медицинского института Говарда Хьюза. Мы признательны за поддержку Ассоциации БАС, Канадского общества БАС, Brain Canada и Канадских институтов исследований в области здравоохранения. Эта публикация была частично подтверждена данными, предоставленными консорциумом Answer ALS, находящимся в ведении Центра Роберта Паккарда по БАС в Университете Джона Хопкинса.Кроме того, данные для этого исследования были подготовлены, заархивированы и распространены Национальным институтом старения, сайтом хранения данных о болезни Альцгеймера (NIAGADS) Пенсильванского университета (U24-AG041689), финансируемым Национальным институтом старения. Мы хотели бы поблагодарить доктора Джейсона Андервуда за его ценное понимание стратегий секвенирования SMRT, а также всех людей, которые пожертвовали биообразцы, за их готовность внести свой вклад в научные исследования.

Декларация об интересах

А.Д.Г. работал консультантом в компаниях Aquinnah Pharmaceuticals, Prevail Therapeutics и Third Rock Ventures, а также является научным основателем Maze Therapeutics. Э.Э.Э. входит в научный консультативный совет DNAnexus. Все остальные авторы заявляют об отсутствии конкурирующих интересов.

Примечания

Опубликовано: 3 августа 2020 г.

Веб-ресурсы

• Проект «1000 геномов», https://www.internationalgenome.org/

• AMP-.synapse.org/

• Answer ALS, https://www.answerals.org/

• Cell Profiler, https://cellprofiler.org/

• European Nucleotide Archive, http://www. ebi.ac.uk/ena

• FastTree, http://www.microbesonline.org/fasttree/

• gnomAD, https://gnomad.broadinstitute.org/

• NIAGADS, https:/ /www.niagads.org/

• OMIM, https://omim.org/

• RNAfold, http://rna.tbi.univie.ac.at/cgi-bin/RNAWebSuite/RNAfold.cgi

• Synapse, https://www.synapse.org/

• TargetScan, http://www.targetscan.org/

• VCFtoTree, https://github. com/duoduoo/VCFtoTree_3.0.0

• Web Logo, https://weblogo.berkeley.edu/

• Zenodo, https://zenodo.org/

Дополнительные данные

Документ S1. Рисунки S1–S10: Таблица S1. Список специфичных для человека интронных Ab Initio Переменное количество тандемных повторов: Таблица S2.Список предполагаемых мишеней для наиболее распространенных микроРНК, полученных из повтора WDR7: , документ S2. Статья плюс дополнительная информация:

Ссылки

1. Hannan A.J. Тандемные повторы опосредуют генетическую пластичность в норме и болезни. Нац. Преподобный Жене. 2018;19:286–298. [PubMed] [Google Scholar]2. Пирсон К.Э., Николь Эдамура К., Клири Дж.Д. Нестабильность повторов: механизмы динамических мутаций. Нац. Преподобный Жене. 2005; 6: 729–742. [PubMed] [Google Scholar]4. Де Рок А., Дюшато Л., Van Dongen J., Cacace R., Bjerke M., Van den Bossche T., Cras P. , Vandenberghe R., De Deyn PP, Engelborghs S., BELNEU Consortium Интронный VNTR влияет на сплайсинг ABCA7 и увеличивает риск болезни Альцгеймера. болезнь. Акта Нейропатол. 2018; 135:827–837. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]5. Сонг Дж.Х.Т., Лоу С.Б., Кингсли Д.М. Характеристика специфического для человека тандемного повтора, связанного с биполярным расстройством и шизофренией. Являюсь. Дж. Хам. Жене. 2018;103:421–430. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]6.Оксенберг Н., Стевисон Л., Уолл Дж. Д., Ахитув Н. Функция и регуляция AUTS2, гена, связанного с аутизмом и эволюцией человека. Генетика PLoS. 2013;9:e1003221. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]7. Сринивасан С., Беттелла Ф., Фрей О., Хилл В.Д., Ван Ю., Витоелар А., Шорк А.Дж., Томпсон В.К., Дэвис Г., Десикан Р.С. Обогащение генетических маркеров недавней эволюции человека в образовательных и когнитивных чертах. науч. Отчет 2018; 8:12585. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]8. Шринивасан С. , Беттелла Ф., Маттингсдал М., Ван Ю., Витоэлар А., Шорк А.Дж., Томпсон В.К., Зубер В., Винсволд Б.С., Зварт Дж.А., Рабочая группа по шизофрении Консорциума психиатрической геномики, Международный консорциум генетики головной боли Генетические маркеры Эволюция человека обогащена шизофренией. биол. Психиатрия. 2016; 80: 284–292. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]9. Нитианантараджа Дж., Ханнан А.Дж. Динамические мутации как цифровые генетические модуляторы развития, функционирования и дисфункции мозга.Биоэссе. 2007; 29: 525–535. [PubMed] [Google Scholar] 10. Де Хесус-Эрнандес М., Маккензи И. Р., Боев Б. Ф., Боксер А. Л., Бейкер М., Резерфорд Н. Дж., Николсон А. М., Финч Н. А., Флинн Х., Адамсон Дж. Расширенный гексануклеотидный повтор GGGGCC в некодирующей области C9ORF72 вызывает хромосомную 9p-сцепленную FTD и БАС. Нейрон. 2011;72:245–256. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]11. Рентон А.Э., Маджуни Э., Уэйт А., Симон-Санчес Дж., Роллинсон С., Гиббс Дж.Р., Шимик Дж. С., Лааксовирта Х., ван Свитен Дж.C., Myllykangas L., ITALSGEN Consortium Экспансия гексануклеотидных повторов в C9ORF72 является причиной ALS-FTD, сцепленного с хромосомой 9p21. Нейрон. 2011; 72: 257–268. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]12. Пулст С.М., Нечипорук А., Нечипорук Т., Гисперт С., Чен С.Н., Лопес-Сендес И., Перлман С., Старкман С., Ороско-Диаз Г., Лункес А. Умеренное расширение обычно двуаллельного тринуклеотидного повтора в спиноцеребеллярная атаксия 2 типа. Нац. Жене. 1996; 14: 269–276. [PubMed] [Google Scholar] 13. Элден А.К., Ким Х.Дж., Харт М.П., ​​Чен-Плоткин А.С., Джонсон Б.С., Фанг Х., Армакола М., Гесер Ф., Грин Р., Лу М.М. Экспансия полиглутамина промежуточной длины атаксина-2 связана с повышенным риском развития БАС. Природа. 2010; 466:1069–1075. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]14. Розен Д.Р., Сиддик Т., Паттерсон Д., Фиглевич Д.А., Сапп П., Хентати А., Дональдсон Д., Гото Дж., О’Реган Дж.П., Дэн Х.Х. Мутации в гене супероксиддисмутазы Cu/Zn связаны с семейным боковым амиотрофическим склерозом. Природа. 1993; 362: 59–62. [PubMed] [Google Scholar] 15. Кабаши Э., Вальдманис П.Н., Дион П., Шпигельман Д., МакКонки Б.Дж., Ванде Вельде К., Бушар Дж.П., Лакомблез Л., Почигаева К., Салачас Ф. Мутации TARDBP у лиц со спорадическим и семейным боковым амиотрофическим склерозом. Нац. Жене. 2008; 40: 572–574. [PubMed] [Google Scholar] 16. Sreedharan J., Blair I.P., Tripathi V.B., Hu X., Vance C., Rogelj B., Ackerley S., Durnall JC, Williams K.L., Buratti E. Мутации TDP-43 при семейном и спорадическом боковом амиотрофическом склерозе.Наука. 2008; 319:1668–1672. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]17. Квятковски Т.Дж., младший, Боско Д.А., Леклерк А.Л., Тамразян Э., Вандербург К.Р., Расс К., Дэвис А., Гилкрист Дж., Касарскис Э.Дж., Мунсат Т. Мутации в гене FUS/TLS на хромосоме 16 вызывают семейные амиотрофические боковой склероз. Наука. 2009; 323:1205–1208. [PubMed] [Google Scholar] 18. Вэнс С., Рогель Б., Хортобаги Т., Де Вос К.Дж., Нишимура А.Л., Сридхаран Дж., Ху Х., Смит Б., Радди Д. , Райт П. Мутации в FUS, белке процессинга РНК, вызывают семейные амиотрофические боковой склероз 6 типа.Наука. 2009; 323:1208–1211. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]19. Чиа Р., Чио А., Трейнор Б. Дж. Новые гены, связанные с боковым амиотрофическим склерозом: диагностические и клинические последствия. Ланцет Нейрол. 2018;17:94–102. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]20. Ханнан А.Дж. Полиморфизмы тандемных повторов: модуляторы восприимчивости к болезням и кандидаты на «отсутствие наследуемости» Trends Genet. 2010;26:59–65. [PubMed] [Google Scholar] 21. Кенна К.П., Маклафлин Р.Л., Бирн С., Эламин М., Хеверин М., Кенни Э.М., Кормикан П., Моррис Д.В., Донахи К.Г., Брэдли Д.Г., Хардиман О. Определение генетической гетерогенности БАС с использованием целевого высокопроизводительного секвенирования. Дж. Мед. Жене. 2013;50:776–783. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]22. Кавабе Х., Сакисака Т., Ясуми М., Шингай Т., Идзуми Г., Нагано Ф., Дегучи-Таварада М. , Такеучи М., Наканиши Х., Такай Ю. Новый рабконнектин-3-связывающий белок, непосредственно связывает белок обмена GDP/GTP с малым G-белком Rab3A, участвующим в Ca(2+)-зависимом экзоцитозе нейротрансмиттера.Клетки генов. 2003; 8: 537–546. [PubMed] [Google Scholar] 23. Шлютер О.М., Шмитц Ф., Ян Р., Розенмунд К., Зюдхоф Т.К. Полный генетический анализ функции нейронов Rab3. Дж. Нейроски. 2004; 24:6629–6637. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]24. Хэнд К.К., Хорис Дж., Салачас Ф., Гро-Луи Ф., Лопес А.А., Майе-Портас В., Брюэр К.Г., Браун Р.Х., мл., Майнингер В., Камю В., Руло Г.А. Новый локус семейного бокового амиотрофического склероза на хромосоме 18q. Являюсь. Дж. Хам. Жене. 2002; 70: 251–256.[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]26. Прюфер К., Расимо Ф., Паттерсон Н., Джей Ф., Санкарараман С., Сойер С., Хайнце А., Рено Г., Судмант П.Х., де Филиппо С. Полная последовательность генома неандертальца из Горного Алтая . Природа. 2014; 505:43–49. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]27. Мейер М., Кирхер М., Гансауг М.Т., Ли Х., Расимо Ф., Маллик С., Шрайбер Дж. Г., Джей Ф., Прюфер К., де Филиппо К. Последовательность генома с высоким охватом архаичного денисовца. Наука.2012; 338: 222–226. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]28. Аутон А., Брукс Л.Д., Дурбин Р.М., Гаррисон Э.П., Канг Х.М., Корбел Дж.О., Марчини Дж.Л., Маккарти С., Маквин Г.А., Абекасис Г.Р., Консорциум проекта 1000 геномов Глобальный справочник по генетической изменчивости человека. Природа. 2015; 526: 68–74. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]29. Маккуин К., Гудман А., Чернышев В., Каменский Л., Чимини Б.А., Кархохс К.В., Доан М., Дин Л., Рафельски С.М., Терструп Д. CellProfiler 3.0: обработка изображений нового поколения для биологии.PLoS биол. 2018;16:e2005970. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]30. Вальдманис П.Н., Ким Х.К., Чу К., Чжан Ф., Сюй Дж., Мундин Э.М., Шен Дж., Кей М.А. Удаление миР-122 в печени активирует импринтированные микроРНК и обеспечивает более эффективную репрессию генов, опосредованную микроРНК. Нац. коммун. 2018;9:5321. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]31. Курс М.М., Гудснюк К., Валдманис П.Н. Полный конвейер для выделения и секвенирования микроРНК и их анализа с использованием инструментов с открытым исходным кодом. Дж.Вис. Эксп. 2019;(150) [бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]32. Льюис Б.П., Бердж С.Б., Бартель Д.П. Консервативное спаривание семян, часто окруженное аденозинами, указывает на то, что тысячи генов человека являются мишенями для микроРНК. Клетка. 2005; 120:15–20. [PubMed] [Google Scholar] 33. Лэнгмид Б., Трапнелл К., Поп М., Зальцберг С.Л. Сверхбыстрое и эффективное с точки зрения памяти выравнивание коротких последовательностей ДНК с геномом человека. Геном биол. 2009;10:R25. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]35. Лоренц Р., Бернхарт С.H., Höner Zu Siederdissen C., Tafer H., Flamm C., Stadler P.F., Hofacker I.L. Пакет ViennaRNA 2.0. Алгоритмы Мол. биол. 2011;6:26. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]36. Сюй Д. , Джабер Ю., Павлидис П., Гоккумен О. VCFtoTree: удобный инструмент для построения локус-специфических выравниваний и филогений из тысяч антропологически релевантных последовательностей генома. Биоинформатика BMC. 2017;18:426. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]37. Прайс М.Н., Дехал П.С., Аркин А.П. FastTree 2 — приблизительно деревья максимального правдоподобия для больших выравниваний.ПЛОС ОДИН. 2010;5:e9490. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]38. Ван М., Бекманн Н.Д., Руссос П., Ван Э., Чжоу С., Ван К., Мин С., Нефф Р., Ма В., Фуллард Дж. Ф. Группа крупномасштабных геномных, транскриптомных и протеомных исследований на горе Синай данные при болезни Альцгеймера. науч. Данные. 2018;5:180185. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]39. Суловари А., Ли Р., Аудано П.А., Порубский Д., Фоллгер М.Р., Логсдон Г.А., Уоррен В.К., Поллен А.А., Чейссон М.Дж.П., Эйхлер Э.Е., Консорциум структурных вариаций генома человека Экспансия тандемных повторов, специфичная для человека, и дифференциальная экспрессия генов у приматов эволюция. проц. Натл. акад. науч. США. 2019;116:23243–23253. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]40. Нагано Ф., Кавабе Х., Наканиши Х., Шинохара М., Дегучи-Таварада М., Такеучи М., Сасаки Т., Такаи Ю. Рабконнектин-3, новый белок, который связывает белок обмена GDP/GTP и ГТФазу -активирующий белок для семейства малых G-белков Rab3. Дж. Биол. хим. 2002; 277:9629–9632. [PubMed] [Google Scholar]41. Спровьеро В., Шатунов А., Шталь Д., Шоаи М., ван Ринен В., Джонс А.Р., Аль-Саррадж С., Андерсен П.М., Бонини Н.М., Конфорти Ф.Л. Длина тринуклеотидного повтора ATXN2 коррелирует с риском развития БАС. Нейробиол. Старение. 2017;51:178.e1–178.e9. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]42. Schüle B., McFarland K.N., Lee K., Tsai YC, Nguyen K.D., Sun C., Liu M., Byrne C., Gopi R., Huang N. Болезнь Паркинсона, связанная с чистой экспансией повторов ATXN10 . NPJ Parkinsons Dis. 2017;3:27. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]43. Кортезе А., Симона Р., Салливан Р., Вандровцова Дж. , Тарик Х., Yau W.Y., Humphrey J., Jaunmuktane Z., Sivakumar P., Polke J. Биаллельное расширение интронного повтора в RFC1 является частой причиной поздней атаксии. Нац. Жене. 2019; 51: 649–658. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]44. Исиура Х., Дои К., Мицуи Дж., Йошимура Дж., Мацукава М.К., Фудзияма А., Тойошима Ю., Какита А., Такахаши Х., Судзуки Ю. Экспансия интронных повторов TTTCA и TTTTA при доброкачественной семейной миоклонии у взрослых эпилепсия. Нац. Жене. 2018;50:581–590. [PubMed] [Google Scholar]45.Зу Т., Лю Ю., Баньес-Коронель М., Рейд Т., Плетникова О., Льюис Дж., Миллер Т.М., Хармс М.Б., Фалчук ​​А.Е., Субрамони С.Х. Белки RAN и фокусы РНК из антисмысловых транскриптов при БАС C9ORF72 и лобно-височной деменции. проц. Натл. акад. науч. США. 2013; 110:E4968–E4977. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]46. Буц П.Л., Бхуткар А., Шарп П.А. Задержанные интроны представляют собой новый, широко распространенный класс посттранскрипционно сплайсированных интронов. Гены Дев. 2015;29:63–80. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]47.Лек М., Карчевски К.Дж., Миникель Э.В., Самоча К.Е., Бэнкс Э., Феннелл Т., О’Доннелл-Лурия А.Х., Уэр Дж.С., Хилл А.Дж., Каммингс Б.Б., Консорциум агрегации экзома Анализ кодирующих белок генетических вариаций у 60 706 человек . Природа. 2016; 536: 285–291. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]48. Тан М.Х., Ли К., Шанмугам Р., Пискол Р., Колер Дж., Янг А.Н., Лю К.И., Чжан Р., Рамасвами Г., Ариёси К., Консорциум GTEx. Лаборатория, Центр анализа данных и координации (LDACC) — Рабочая группа по анализу.Группы статистических методов — рабочая группа по анализу. Расширение групп GTEx (eGTEx). Общий фонд НИЗ. НИЗ/NCI. НИЗ/НГРИ. НИЗ/НИМГ. НИЗ/НИДА. Исходный сайт коллекции биообразцов — NDRI. Исходный сайт коллекции биообразцов — RPCI. Основной ресурс биообразца — VARI. Репозиторий Brain Bank — Банк Brain Endowment Bank Университета Майами. Leidos Biomedical — Управление проектами. ЭЛСИ Исследование. Интеграция и визуализация данных браузера генома — EBI. Интеграция и визуализация данных браузера генома — Институт геномики UCSC, Калифорнийский университет в Санта-Круз. Динамический ландшафт и регулирование редактирования РНК у млекопитающих.Природа. 2017; 550: 249–254. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]49. Чернг Н., Шишкин А.А., Шлагер Л.И., Так Р.Х., Слоан Л., Матера Р., Саркар П.С., Ашизава Т., Фройденрайх Ч.Х., Миркин С.М. Расширения, сокращения и ломкость пентануклеотидного повтора спиноцеребеллярной атаксии 10 типа у дрожжей. проц. Натл. акад. науч. США. 2011;108:2843–2848. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]50. Шишкин А.А., Войнеагу И., Матера Р., Чернг Н., Чернет Б.Т., Красильникова М.М., Нараянан В., Лобачев К.С., Миркин С.М. Крупномасштабные экспансии атаксии Фридрейха GAA повторяются у дрожжей. Мол. Клетка. 2009; 35:82–92. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]51. Доан Р.Н., Бае Б.И., Кубелос Б., Чанг С., Хоссейн А.А., Аль-Саад С., Мукаддес Н.М., Онер О., Аль-Саффар М., Балхи С., Консорциум картирования гомозиготности для мутаций аутизма в областях с ускорением развития человека Нарушение познания и социального поведения. Клетка. 2016;167:341–354.e12. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]52. Ху Х.Ю., Хе Л., Фоминых К., Ян З., Го С., Чжан С., Тейлор М.С., Тан Л., Ли Дж., Лю Дж. Эволюция специфичной для человека микроРНК миР-941. Нац. коммун. 2012;3:1145. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]53. Kim HJ, Kim NC, Wang YD, Scarborough EA, Moore J., Diaz Z., MacLea KS, Freibaum B., Li S., Molliex A. Мутации в прионоподобных доменах в hnRNPA2B1 и hnRNPA1 вызывают мультисистемную протеинопатию и БАС. Природа. 2013; 495:467–473. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]54. Рэй Д., Казан Х., Чан Э.Т., Пенья Кастильо Л., Чаудхри С., Талукдер С., Бленкоу Б.Дж., Моррис К., Хьюз Т.Р. Быстрый и систематический анализ особенностей распознавания РНК РНК-связывающими белками. Нац. Биотехнолог. 2009; 27: 667–670. [PubMed] [Google Scholar]55. Тан Л., Ю Дж. Т., Тан Л. Причины и последствия дисрегуляции микроРНК при нейродегенеративных заболеваниях. Мол. Нейробиол. 2015;51:1249–1262. [PubMed] [Google Scholar]56. Лафлин Ф.Э., Лукавский П.Дж., Казеева Т., Ребер С., Хок Э.М., Коломбо М., Фон Шреттер К., Паули П., Клери А., Мюлеманн О. Структура раствора FUS, связанного с РНК, выявляет двусторонний способ распознавания РНК со специфичностью как к последовательности, так и к форме. Мол. Клетка. 2019;73:490–504. [PubMed] [Google Scholar]57. Рогель Б., Истон Л.Э., Богу Г.К., Стэнтон Л.В., Рот Г., Курк Т., Зупан Б., Сугимото Ю., Модик М., Хаберман Н. Широко распространенное связывание FUS вдоль зарождающейся РНК регулирует альтернативный сплайсинг в головном мозге. науч. Отчет 2012; 2: 603. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]58. Морландо М., Dini Modigliani S., Torrelli G., Rosa A., Di Carlo V., Caffarelli E., Bozzoni I. FUS стимулирует биогенез микроРНК, облегчая ко-транскрипционное рекрутирование Drosha. EMBO J. 2012; 31: 4502–4510. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]59. Грегори Р.И., Ян К.П., Амутан Г., Чендримада Т., Доратотадж Б., Куч Н., Шихаттар Р. Микропроцессорный комплекс опосредует генезис микроРНК. Природа. 2004; 432: 235–240. [PubMed] [Google Scholar] 60. Guil S., Cáceres JF. Многофункциональный РНК-связывающий белок hnRNP A1 необходим для процессинга miR-18a.Нац. Структура Мол. биол. 2007; 14: 591–596. [PubMed] [Google Scholar]61. Михлевски Г., Касерес Дж. Ф. Антагонистическая роль hnRNP A1 и KSRP в регуляции биогенеза let-7a. Нац. Структура Мол. биол. 2010;17:1011–1018. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

В чем разница между Паралимпийскими играми и Специальной Олимпиадой? : NPR

Фейерверк над Олимпийским стадионом 24 августа 2021 года в Токио, Япония, во время церемонии открытия Паралимпийских игр 2020 года в Токио. Карл Корт / Getty Images скрыть заголовок

переключить заголовок Карл Корт / Getty Images

Фейерверк над Олимпийским стадионом 24 августа 2021 года в Токио, Япония, во время церемонии открытия Паралимпийских игр 2020 года в Токио.

Карл Корт / Getty Images

Что общего между Паралимпийскими играми и Олимпийскими играми? И какое отношение любой из них имеет к Специальной Олимпиаде?

Паралимпийская пловчиха Анастасия Пагонис знает ответы. У 17-летней уроженки Лонг-Айленда колоссальные 2 миллиона подписчиков на TikTok, и она использует свою платформу, чтобы рассказывать другим о нарушениях зрения и паралимпийском спорте.

Здесь она рассказывает о некоторых ключевых различиях между Паралимпийскими играми и Специальной Олимпиадой:

Олимпийские и Паралимпийские игры существуют бок о бок

Олимпийские и Паралимпийские игры имеют разные руководящие органы, но на протяжении десятилетий проводятся в тандеме — в одном и том же городе-организаторе в один и тот же год.

Это действительно параллельные события: Слово «Паралимпийский» включает греческий предлог «пара», означающий «рядом».

В паралимпийских видах спорта спортсменов объединяют в группы по «степени ограничения активности» в результате их поражения: вот подробнее об этом от Международного паралимпийского комитета.

Паралимпийские игры и Спешиал Олимпикс отличаются по трем основным признакам

Между тем, Спешиал Олимпикс отличаются от Паралимпийцев тремя основными областями: структурой их организаций, категориями инвалидности спортсменов, а также критериями и философией их участия.

Специальная Олимпиада проводит тренировки и соревнования круглый год, а Всемирные игры проводятся каждые два года (чередуя летние и зимние соревнования). Последние Всемирные игры Специальной Олимпиады прошли в Абу-Даби в 2019 году, а следующие запланированы на 2022 год в Казани, Россия.

Специальная Олимпиада приветствует всех спортсменов с ограниченными интеллектуальными возможностями, всех уровней способностей, в возрасте от 8 лет и старше. Паралимпийские спортсмены должны соответствовать определенным критериям и квалификационным стандартам, чтобы иметь право на участие.

Эта статья впервые появилась в живом блоге Morning Edition.

Рядом супермаркет

Universal: Внимание!

• Universal Supermarket, 2101 Federal St, Camden, NJ 08105, USA
• Universal Supermarket — Rahway, NJ
• Food Universe Marketplace Open in Bensonhurst
• Xfinity Store by Comcast 300 Universal Drive North North Haven, CT
• Wawa Store Locator : найдите Wawa, найдите цены на топливо и многое другое
• 8 ближайших продуктовых магазинов рядом с Диснейуорлдом, чтобы ваша мини-кухня всегда была готовой!
• А вот где инструкция по использованию масок для тематических парков, магазинов Центральной Флориды
• Строительный гипермаркет ОБИ: товары для дачи, сада, дома и ремонта: каталог ОБИ
• Садовый измельчитель травы и веток
• История ГУМа — РИА Новости , 01. 03.2020

Universal Supermarket, 2101 Federal St, Camden, NJ 08105, USA

Универсальный супермаркет | Универсальный супермаркет

Универсал Супермаркет .Мы являемся владельцем магазина во втором поколении, первым das для универсального супермаркета управлял г-н Роке, основатель бизнеса, как традиционный латинский супермаркет, в течение последних 7 лет новое поколение Roque берет добычу на машине через новый способ…

http://universalsupermarket.net/

+1

856-361-7489

Супермаркет Universal Supermarket в Камдене, Нью-Джерси Сейчас закрыт. Контакты. 2101 Federal Street, Camden, NJ 08105 Получите указания.+1 856-361-7489 .

http://camden-nj.market2buy.com/universal-supermarket/

Универсальный супермаркет – Главная | Фейсбук

Универсал Супермаркет . Магазин этнических продуктов в Камдене, Нью-Джерси. +1 856-361-7489 . Свяжитесь с Universal Supermarket в Messenger.

https://www.facebook.com/pages/category/Ethnic-Grocery-Store/Universal-Supermarket-1684

1723193/

Универсальный Супермаркет – Ана Сайфа | Фейсбук

Супермаркет Universal , Камден, Нью-Джерси.37 бегеме. Universal Supermarkets — это кооперативная сеть супермаркетов розничных торговцев на северо-востоке… +1 856-361-7489 . Свяжитесь с Universal Supermarket в Messenger.

https://tr-tr.facebook.com/Universal-Supermarket-1684

1723193/

Universal Supermarket — Камден, Нью-Джерси (Нью-Джерси) — (856) 361-7489 …

Супермаркет Universal по адресу: 2101 Federal St, Камден, Нью-Джерси.Читайте о, связаться, получить направления и найти другие продукты. Универсальный супермаркет . (856) 361-7489 .

https://411.info/business/Universal-Supermarket-Camden-NJ-26643454

Universal Supermarket 2101 Federal St Camden, NJ… – MapQuest

Получите указания, отзывы и информацию о Universal Supermarket в Камдене, штат Нью-Джерси. Отзывы. (856) 361-7489 Веб-сайт.

https://www.mapquest.com/us/new-jersey/universal-supermarket-364026191

Супермаркет «

Универсал Супермаркет », отзывы и фото, 2101. ..

Универсал Супермаркет . Информация Фотографии Комментарии. Супермаркет. Адрес: 2101 Federal St, Camden, NJ 08105, США. Телефон: +1 856-361-7489 . Рейтинг

http://stores-goods.com/New_Jersey/Camden/Universal_Supermarket

30 лучших продуктовых магазинов в Камдене, штат Нью-Джерси, с отзывами – YP.ком

6. Камден Шелл Фуд Март. 1033 Kaighn AveCamden, NJ 08103. (856) 342-9836. Продуктовые магазины Круглосуточные магазины. 23. Супермаркет Универсал .

https://www.yellowpages.com/camden-nj/grocery-stores

Реже

Universal Supermarket в Соединенных Штатах Америки:…

Вы выбрали в справочнике карт и объектов MAPS.ME: супермаркет Reje Universal Supermarket по адресу: США. Вы можете скачать MAPS.ME для вашего мобильного устройства Android или iOS и проложить маршрут до супермаркета Reje Universal Supermarket или…

https://maps.me/catalog/shops/shop-supermarket/reje-universal-supermarket-4611686021521474581/

Супермаркет Universal – Продуктовый магазин – 2118 Bath Ave, Bath Beach. .. – Визг

1 отзыв о Универсальный супермаркет «это место отстой владелец и его сын и двоюродные братья, которые здесь работают, а также хозяин мошенники.у них есть продукты с истекшим сроком годности, и однажды я покупал молоко, а у них было просроченное молоко, и я такой, что за хрень. универсальный супермаркет . 2118 Bath Ave, Brooklyn, NY 11214.

https://www.yelp.com/biz/universal-supermarket-brooklyn

Универсальный супермаркет – Рэуэй, Нью-Джерси

Настоящий этнический склад-магазин

Универсальный супермаркет – Рэуэй, Нью-Джерси

Когда крупные сети американских супермаркетов «идею международного выбора продуктов поддерживают как Ортега, так и Старый Эль-Пасо», это настоящий шок — войти в универсальный мясной супермаркет («мясо», похоже, является пережитком его прошлой жизни в качестве Западная говядина). Universal – настоящий этнический магазин. Как бы мне ни нравились магазины CitiGrocer и Supremo, в них как-то нет настоящей аутентичности, и они крайне американизированы. Когда вы входите в этот магазин или в Kam Man Foods, если вы ищете китайские продукты, опыт совсем другой.

Этот магазин открылся как продовольственная ярмарка, которая позже стала Pantry Pride. Позже он стал супермаркетом Rex-Gene, за которым последовал Western Beef. Universal открылся где-то в 2005 году. (Большая часть этой информации взята отсюда.Также нажмите, чтобы увидеть фото при дневном свете.) Компания Universal явно провела минимальные ремонтные работы, если таковые вообще были, после открытия в старом Western Beef. Кажется, что либо R-G, либо WB расширились до соседнего магазина, и я полагаю, что рядом с супермаркетом есть еще одна свободная витрина, ожидающая расширения.

Хватит об этом говорить! Давайте войдем внутрь.

Этот чрезвычайно узкий вход проходит параллельно фасаду магазина. Выход слева. Кассы прямо впереди. Когда вы входите в магазин, вы сразу же поворачиваете направо на 180 градусов и направляетесь в продуктовый отдел.Я думаю, что этот этаж остался от продовольственной ярмарки.

После поворота на 180 градусов вы входите в это. Это очень похоже на Food Bazaar в Западном Нью-Йорке, штат Нью-Джерси. Справа от вас находится так называемая «стена ценностей». Дверь прямо впереди — это место, где начинается расширение, где находятся продукты, гастрономы и горячие блюда.

Во многих магазинах есть эти «стены ценностей», изначально предназначенные для сохранения ценного пространства в подсобных помещениях, но витрины стали формой искусства, способом для персонала и руководства магазина продемонстрировать свой талант.В этом магазине есть особенно впечатляющая и хорошо выставленная «стена ценностей».

Очень надеюсь, что вам не нужен тот, что сверху. . . или тот что сзади.

В то время как в других магазинах в конце каждого прохода установлены небольшие торцевые заглушки, Universal предпочитает более огромные витрины. Витрины этого магазина были исключительно хорошо сделаны.

Здесь мы смотрим в сторону боковой стены магазина. Стена ценностей как раз закончилась справа от меня, и мы стоим в расширении. Прямо впереди есть странная область с газировкой и какими-то случайными товарами, затем несколько ящиков с выпечкой (в магазине нет пекарни), а затем область открывается в продуктовый отдел.

 На фотографии выше мы смотрим назад, к входу, обратно в магазин из дополнения. Передняя стена слева от меня, а продуктовый отдел справа.

 Я не могу точно определить, откуда берутся эти знаки «разнообразия», «качества» и т. д. Вряд ли они сделаны на заказ для Universal, но и в Western Beef я их не видел.

Вдоль задней стены находится «кафетерий» или прилавок с горячими блюдами. Есть также очень маленький прилавок гастронома, ни один из которых не был открыт, когда я посетил его после ужина однажды вечером.

Вдоль первого прохода продуктового магазина находится большой выбор товаров общего назначения, в основном кухонные принадлежности и посуда — и это несмотря на большую вывеску «ПЕКАРНЯ» вдоль стены. (Опять же, в этом магазине нет ни пекарни, ни даже большого выбора выпечки.)

Заметили что-нибудь интересное в этих письмах? Они, как и вывески «гастроном» и «производство» (полностью закрытые упаковками туалетной бумаги), очень сильно напоминают те, что были в декоре «Арки в шахматном порядке» от Acme.Рассмотрим следующую фотографию города Манаскуан, штат Нью-Джерси, Acme:
 
Изображение из AcmeStyle. ком.

Мне так и хочется сказать, что надпись взята со старой шахматной арки Acme. Давайте разберемся здесь с хронологией: согласно статье, на которую я ссылаюсь выше, в 1998 году магазин Rahway все еще был открыт («Его оставшиеся продовольственные магазины находятся в West Long Branch, Rahway и Sayreville»). Статья в Википедии о корпорации не столь эффектна, в ней просто говорится, что сеть закрылась в «конце 1990-х».Новости супермаркетов позволяют нам лучше взглянуть на временную шкалу, заявив, что 1 июня 1998 г. Western Beef приобрела три магазина Rex-Gene с опционом на покупку четвертого. Скажем, Western Beef закрылась в 2000 году из-за этого аргумента. Таким образом, Universal открывается в том же году, скажем, исходя из общего отсутствия ремонта со стороны WB. Что делает этот вывод еще более заманчивым, так это то, что Acme в соседнем Порт-Рединге закрылся почти в то же время — в сентябре 2000 года, согласно Acme Style.Всегда есть шанс, что в начале 1990-х годов Acme в Порт-Рединге переделал арку в виде шахматной доски, а Universal купила у Acme несколько ключевых вывесок и установила их в своем собственном магазине, учитывая, что магазин в Порт-Рединге больше не является супермаркетом. Это возможность. . .

Нет. Слишком большая растяжка. Вот почему.

• Закрытие WB в 2000 году означает, что они просуществовали чуть больше года. Хотя я слышал о так называемых «аварийных» магазинах, это слишком близко. Скорее всего, ВБ сделал это еще четыре или пять лет.
• Если Universal купила надпись у закрытого Acme, то почему только три знака? Почему нельзя есть замороженные продукты, молочные продукты, мясо или морепродукты? Навес « Western Fish» (скоро появится) предполагает, что он остался от Western Beef, и соответствующий мясной навес был бы из того же периода времени.
• У Юниверсал явно никогда не было пекарни. Так зачем же им покупать вывеску «пекарня», а затем устанавливать ее над тем, что всегда было проходом с обычными товарами?
• Внимательно посмотрите на надпись.В частности, посмотрите на R. Обратите внимание, что нижний правый угол у Universal находится по диагонали, а у Acme полностью горизонтален. Есть некоторые незначительные различия, которые предполагают, что это , а не , бывший знак Acme.
• Обратите также внимание на то, что надпись Universal значительно толще (поскольку она выступает из стены дальше), чем у аналога Acme.

Довольно! Я просто думаю. Это то, о чем я думаю, когда мне, вероятно, следует делать домашнюю работу по математическому анализу.(P.S. Все мои домашние задания по математике на сегодня уже сделаны.)

Вдоль задней стены магазина расположены прилавки с мясом и морепродуктами. В дальнем левом углу магазина находится мясной отдел. Угловой тупик характерен для лабиринтов Western Beef, то есть магазинов.

Обратите внимание, какой неровный и ужасный пол. На мой взгляд, это самый большой недостаток этого магазина — ужасный пол снижает ценность магазина как отличного этнического супермаркета. (Шахматный пол в левом нижнем углу, вероятно, был расположен вдоль заднего прохода Food Fair/Pantry Pride.Он достаточно старый, чтобы я мог поверить, что он остался от них.)

«Западная рыба» (с этим я долго разбирался — это пьеса о «Западной говядине», которая больше не работает) была закрыта на ночь, когда я пришел. Или, может быть, закрылись навсегда, я не уверен.

В задней части, где находится мясной отдел, есть полированный бетонный пол, что наводит меня на мысль, что это было подсобное помещение для Продовольственной Ярмарки/Кладовой Прайда.

Где (возможное) расширение встречается с исходным магазином.

Продуктовый стеллаж по-прежнему является торговой маркой оранжевого склада Western Beef. Здесь все выглядит не так уж и плохо.

За отделами мяса/морепродуктов проходит молочный отдел вдоль задней стены магазина. Обратите внимание на новые настраиваемые маркеры проходов для универсального супермаркета. Обратите также внимание на досадную ошибку в написании «Pop Tarts» как «Pop Tards», что напоминает . . . скажем так . . . другие изображения.

Последний ряд — замороженные продукты. К сожалению, он был слишком переполнен, чтобы сделать хорошую фотографию, но я сообщу, что там был еще один уникальный вид пола.Это перед этим проходом. Обслуживание клиентов здесь справа от меня, а кассы продолжаются слева.

Вы смотрите на стойку обслуживания клиентов и весь отдел HABA. То, что не продается за прилавком, продается на полке справа. Допустим, HABA здесь не в их фокусе. Также обратите внимание на надпись на табличке «Express Check Out». Мало того, что он (правильно) читает 8 пунктов или меньше (не меньше ) — СПАСИБО! — его надпись точно такая же, как надписи «PRODUCE», «BAKERY» и «DELI», о которых я говорил ранее.Если бы меня заставили гадать, я бы сказал, что надписи остались от Rex-Gene, и были перекрашены WB или Universal (раньше надписи были очень явно перекрашены).

Еще несколько фотографий экстерьера, прежде чем мы двинемся дальше. . .

Это вывеска, выходящая на проспект Елизаветы. Она не освещена, но ночью зона горячего питания все равно закрыта. Не спрашивайте меня, почему у кубинского сэндвича свой собственный стиль письма.

Между проспектом Элизабет и магазином есть один ряд парковочных мест, но по обеим сторонам здания больше парковочных мест, так как многие супермаркеты этой эпохи созданы.

За исключением одного уличного фонаря, на который я почему-то фотографировал прямо, здание и парковка были на удивление темными. Многие супермаркеты, особенно в менее безопасных районах, имеют гораздо лучшее освещение. Рэуэй не такой уж плохой район, но я бы предпочел чувствовать себя в большей безопасности рядом с таким крупным магазином, как этот.

Бонусный материал!

Где они сейчас?: Магазины Rex-Gene

Рэуэй, Нью-Джерси

Food Fair > Pantry Pride > Rex-Gene > Western Beef > Universal Meat Supermarket
2325 Elizabeth Ave, Rahway, NJ 07065

Уэст-Лонг-Бранч, Нью-Джерси

Rex-Gene > Kmart
108 Monmouth Rd, West Long Branch, NJ 07764
 Похоже, что Rex-Gene изначально делила пространство с Kmart, но когда RG закрылась в 1998 году, я не думаю, что Western Beef в конечном итоге переехала сюда. и Kmart расширился до старой RG.

Маналапан, Нью-Джерси

Rex-Gene > Western Beef > Elite (?) > Work-Out World
300 Gordons Corner Rd, Manalapan, NJ 07726
Я точно не знаю, где был Rex-Gene, но скорее всего это бывший расположение в Маналпане на Гордонс Корнер. Key Food позже попыталась открыть Fresh & Natural Market в гораздо меньшем месте на другом конце этого торгового центра, но потерпела неудачу, и Uncle Gino’s Marketplace открылся в старом пространстве KF.

Сейревиль, Нью-Джерси

ShopRite > Rex-Gene > Western Beef > Drug Fair/Family Dollar > Walgreens/Family Dollar
426 Raritan St, Sayreville, NJ 08872
ShopRite принадлежал семье Saker и переехал на свое нынешнее место в середине 1980-х.Rex-Gene должен был въехать вскоре после ухода ShopRite. После ухода WB помещение площадью 30 000 квадратных футов было разделено между Drug Fair и Family Dollar.

Универсальный мясной супермаркет

2325 Elizabeth Ave, Rahway, NJ 07065
Открыто ежедневно с 7:00 до 20:00
(732) 382-8200
Мой рейтинг: ★★★☆☆

Открытие торговой площадки Food Universe в Бенсонхерсте

Фасад торговой площадки Food Universe Marketplace. Сальма Элазаб/Бклайнер

Ранее на этой неделе в Бенсонхерсте открылся еще один супермаркет.

Food Universe Marketplace открылся на 86-й улице 1982-84, на углу 86-й и 20-й авеню, прямо у железнодорожной станции 20-й авеню D, 11 января 2021 года.

Food Universe Marketplace рядом с выходом из вокзала. Сальма Элазаб/Бклайнер

Food Universe Marketplace является частью франшизы Key Food Stores, и эта концепция была представлена ​​​​в 2014 году. «Каждая Food Universe сможет удовлетворить потребности своего района — в зависимости от размера и ассортимента продукции», — заявила компания в то время. .

Несколько дней назад мы посетили супермаркет, чтобы посмотреть на себя.

Хотя в этом районе есть несколько продуктовых магазинов, таких как супермаркет Jae’s Supermarket, мы заметили, что не многие из них являются крупными супермаркетами, а местные магазины преимущественно продают азиатские продукты.

Карты Google с продуктовыми магазинами и супермаркетами вокруг Food Universe Marketplace.

Расположенный в том месте, где раньше был PC Richards, магазин поначалу кажется маленьким, но как только вы проходите по проходам, он открывается к задней части, где выставлено свежее мясо.

При входе есть отдел свежих продуктов, как органических, так и неорганических.

Фрукты на витрине Food Universe Marketplace. Сальма Элазаб/Бклайнер

Сбоку находится гастроном, где клиенты могут заказать бутерброды и выбрать салаты, пасту и другие горячие и холодные блюда быстрого приготовления.

Зона деликатесов на торговой площадке Food Universe Marketplace. Сальма Элазаб/Бклайнер

Одна сторона магазина уставлена ​​холодильниками и морозильниками, предлагающими хороший выбор опций.

Сыр на витрине Food Universe Marketplace. Сальма Элазаб/Бклайнер

Это общественный супермаркет, в котором можно купить все необходимое, в том числе корм для домашних животных.

Отдел кормов для домашних животных на торговой площадке Food Universe Marketplace. Сальма Элазаб/Бклайнер

Супермаркет также очень хорошо организован и выглядит стильно, что позволяет быстро и легко найти то, что вам нужно.

Напитки на витрине Food Universe Marketplace. Салама Элазаб/Бклайнер

В день нашего визита, холодный и унылый полдень среды, в магазине было немноголюдно, но много персонала у касс и в проходах.

Супермаркет хвастается, что у него «самые удивительные продажи в этом районе»: авокадо по 0,98 доллара и стейк всего по 4 доллара за фунт. В то время как еженедельные проспекты меняются, у них есть распродажи каждые четыре дня.

Страница из еженедельного проспекта Food Universe Marketplace.

Food Universe Marketplace открыт с понедельника по воскресенье с 7:00 до 23:00 и принимает заказы по телефону 718-975-4647. Заказы доступны для самовывоза и доставки без комиссии за доставку или минимальной покупки.

Магазин Xfinity от Comcast 300 Universal Drive North North Haven, CT

Применяются ограничения. Не во всех областях.

Xfinity Mobile требует resi. постоплата Xfinity Internet. Могут применяться ограничения линии. Оснащение, междунар. и роуминговые сборы, налоги и сборы, включая рег. сборы за восстановление и другие дополнительные сборы, а также subj. изменить. $25/линия/мес. взимается плата, если услуги постоплаты Xfinity TV, Интернета или голосовой связи не поддерживаются. Цены могут быть изменены. Во время перегрузки ваши данные могут быть временно медленнее, чем другой трафик.После ежемесячного использования 20 ГБ данных скорость снижается до 1,5 Мбит/с при загрузке/750 Кбит/с при загрузке. Минимальная плата в размере 15,00 долларов США взимается в месяц за учетную запись для линий By the Gig, независимо от использования данных. Плата взимается за каждый ГБ или часть ГБ общих данных. Нет данных о пролонгации. Сравнение экономии на основе фактического использования данных клиентов Xfinity Mobile применительно к доступным тарифным планам основных операторов связи. Фактическая экономия варьируется и не гарантируется.

Для информации о мобильной широкополосной связи Xfinity посетите: www.xfinity.com/mobile/policies/broadband-disclosures

Скидка 250 долларов США на телефоны с поддержкой 5G: предложение действует до 7 июля 21 года. Требуется покупка новых телефонов с поддержкой 5G, за исключением Motorola one 5G ace, пока есть запасы, 24-месячное соглашение о плане оплаты мобильных устройств Xfinity («Соглашение об устройстве»), активация новой линии Xfinity Mobile и перенос номера телефона от другого оператора в течение 30 дней с момента покупки телефона. Кредиты устройства применяются к вашей учетной записи ежемесячно в течение 24 месяцев, пока действует Соглашение об устройстве.Если линия отменена, добровольно или невольно, или платежи за устройство ускорены, баланс кредитов, связанных с оплатой за устройство, аннулируется. Не допускается в сочетании с другими предложениями. Не действует при предыдущих покупках, возврате или обмене.

Motorola one 5G ace В продаже: предложение действует до 07. 06.21. Требуется покупка нового, отвечающего требованиям Motorola one 5G ace, пока есть запасы, 24-месячное соглашение о плане оплаты мобильных устройств Xfinity («Соглашение об устройстве»), активация новой линии Xfinity Mobile и передача номера телефона от другого оператора в течение 30 дней с момента покупки телефона. Дата.Кредиты устройства применяются к вашей учетной записи ежемесячно в течение 24 месяцев, пока действует Соглашение об устройстве. Если линия отменена, добровольно или невольно, или платежи за устройство ускорены, баланс кредитов, связанных с оплатой за устройство, аннулируется. Не допускается в сочетании с другими предложениями. Не действует при предыдущих покупках, возврате или обмене.

© 2021 Комкаст. © Apple Inc., 2021. © Samsung Electronics America, Inc., 2021. Samsung, Samsung Galaxy являются товарными знаками Samsung Electronics Co., Ltd. MOTOROLA, стилизованный логотип M, MOTO и семейство товарных знаков MOTO являются товарными знаками Motorola Trademark Holdings, LLC. Все права защищены.

Поиск магазинов Wawa: поиск Wawa, поиск цен на топливо и многое другое

Весна открытия 2021	Store #5270 17700 US HWY 441 Mount Dora, FL 32757 Посмотреть карту Посмотреть меню
Весна открытия 2021	Магазин №5366 Boggy Creek Rd.и бульвар Лейк Нона. Орландо, Флорида 32824 Просмотреть карту Просмотреть меню
Открытие летом 2021 г.	Магазин №5332 Nova Rd. & Mason Ave. (NWC) Daytona Beach, FL 32117 Посмотреть карту Посмотреть меню
Открытие летом 2021 г.	Магазин №5382 100 Bartram Market Dr. Сент-Джонс, Флорида 32259 Просмотреть карту Просмотреть меню
Открытие летом 2021 г.	Магазин № 5383 SR 70 & NW 2nd Ave. Okeechobee, FL 34972 Посмотреть карту Посмотреть меню
Открытие летом 2021 г.	Магазин №5307 ЮВ Федеральное шоссе. & Коув Роуд. (NEC) Stuart, FL 34997 Просмотреть карту Просмотреть меню
Открытие летом 2021 г.	Магазин №5302 4950 Okeechobee Blvd. West Palm Beach, FL 33417 Посмотреть карту Посмотреть меню
Открытие летом 2021 г.	Store #5351 1004 Edgewood Ave North Jacksonville, FL 19973 Просмотреть карту Просмотреть меню
Открытие летом 2021 г.	Магазин №5371 611 Dal Hall Blvd. Лейк-Плэсид, Флорида 33852 Посмотреть карту Посмотреть меню
Открытие летом 2021 г.	Магазин №5296 1900 W. International Speedway Blvd. Daytona Beach, FL 32114 Посмотреть карту Посмотреть меню
Открытие летом 2021 г.	Магазин #5370 3838 US Hwy. 27 S Sebring, FL 33870 Посмотреть карту Посмотреть меню
Открытие летом 2021 г.	Магазин №5373 Рт.27 и бульвар Валери. Sebring, FL 33870 Посмотреть карту Посмотреть меню
Открытие Осень 2021	Магазин №5284 17942 NW 27 Ave Miami Gardens, FL 33056 Посмотреть карту Посмотреть меню
Открытие Осень 2021	Магазин #5361 SR 16 & Inman Rd. Сент-Огастин, Флорида 32084 Посмотреть карту Посмотреть меню
Открытие Осень 2021	Магазин №5387 US 1 & Virginia Ave. Fort Pierce, FL 34950 Посмотреть карту Посмотреть меню
Открытие Осень 2021	Магазин №5358 13891 W Okeechobee Road Hialeah Gardens, FL 33018 Просмотреть карту Просмотреть меню
Открытие Зима 2022	Магазин №5292 США 17-92 и Тейлор Роуд. Deland, FL 32720 Посмотреть карту Посмотреть меню

8 ближайших продуктовых магазинов рядом с Миром Диснея, чтобы готовить на вашей мини-кухне!

Сходите за продуктами рядом с Диснейуорлдом!

Лучше всего то, что вы можете выбирать из множества качественных продуктовых магазинов прямо за воротами Disney World, чтобы вы могли запастись продуктами первой необходимости для своего отпуска в Орландо.На самом деле, американцы регулярно посещают супермаркеты с тех пор, как изобретатель и предприниматель Кларенс Сондерс открыл Piggly Wiggly, первый продуктовый магазин самообслуживания в 1916 году в Мемфисе, штат Теннесси. Вот 8 ближайших продуктовых магазинов рядом с Диснейуорлдом, чтобы ваша кухня могла готовить:

5 miles from the massive Disney Springs entertainment, dining and attractions complex – making it the closest grocery store to Walt Disney World Resort. Billed as “Orlando’s Hometown Supermarket,” Gooding’s features an award-winning bakery, fresh sushi and seafood, a well-stocked deli, a variety of quality produce and homecooked meals to go. Hours at the Gooding’s Supermarket are daily from 7 AM to 2 AM. Gooding’s Supermarket used to be part of a chain established in 1964 in Maitland that once featured 18 stores in the Central Florida area, but the Crossroads location is the last surviving grocery store of that name. In addition to Gooding’s, the Crossroads of Lake Buena Vista is home to a variety of immensely popular restaurants, including Red Lobster, Noodles and Company, Johnnie’s Hideaway, Sweet Tomatoes, Perkins Restaurant & Bakery, Buffalo Wild Wings and Uno Pizzeria & Grill, among others.<img src=’/800/600/https/i.insider.com/595299bea3630f62588b5638′ /> By the way, if you plan on visiting Gooding’s, hurry! The entire Crossroads of Lake Buena Vista “property will be taken for the multibillion-dollar rebuild of Interstate 4 sometime around August 2021, according to the Orlando Sentinel. </p> <p><strong>WHERE: </strong>Crossroads of Lake Buena Vista, 12521 FL-535, Lake Buena Vista, FL 32830 <strong>| WHO: </strong>(407) 827-1200</p> <p>VIEW ON GOOGLE MAPS</p> <blockquote data-instgrm-permalink=» https:=»» www.instagram.com=»» p=»» b4gtk-_jgzs=»» data-instgrm-version=»12″/>

2 | Винн-Дикси | Чуть более чем в 3 милях от Дисней-Спрингс, на улице Апопка-Вайнленд-роуд, находится этот многолетний фаворит, который привлекает множество покупателей, посещающих тематический парк Walt Disney World Resort в поисках облегчения своего счета за еду во время отпуска в Орландо.В Winn-Dixie есть гастроном, пекарня и кошерный отдел, а также предлагаются собственные бренды со скидкой, такие как SE Grocers Essentials, SE Grocers, SE Grocers Naturally Better, SE Grocers Prestige, Chek (торговая марка газированных напитков), TopCare (здоровье и красота), Whiskers. & Tails (корм и принадлежности для домашних животных) и Kuddles (детское питание, подгузники и т. д.). Winn-Dixie открыт ежедневно с 7:00 до 21:00. Продуктовые магазины Winn-Dixie, основанные в 1925 году и в настоящее время являющиеся одной из крупнейших сетей супермаркетов на юго-востоке, расположены по всей Флориде, Алабаме, Джорджии, Луизиане и Миссисипи.

ГДЕ: 11957 С. Апопка Вайнленд Роуд, Орландо, Флорида 32836 | ВОЗ: (407) 465-8600

ПОСМОТРЕТЬ НА GOOGLE КАРТАХ

3 | Публикс | Один из 831 супермаркета Publix, расположенных по всей Флориде, торговый центр Public at Regency Village находится всего в 8,5 милях от курорта Walt Disney World Resort через Палм-Паркуэй вдоль Вайнленд-авеню (недалеко от всемирно известной улицы Интернэшнл Драйв с ее многочисленными достопримечательностями, ресторанами и магазинами). ).В нем есть следующие отделы: пекарня, деликатесы, продукты, морепродукты, мясо и сыры и цветочный. Кроме того, покупателям Publix предоставляется возможность самовывоза в магазине, широкий выбор пива и вин, суши, доставка продуктов и самовывоз с тротуара. Основанная в Уинтер-Хейвене Джорджем Дженкинсом в 1930 году, Publix превратилась в крупнейшую в мире компанию, принадлежащую сотрудникам. Магазин Publix в торговом центре Regency Village открыт ежедневно с 7:00 до 20:00.

ГДЕ: Торговый центр Regency Village, 8145 Vineland Avenue, Orlando, FL 32821 | ВОЗ: (407) 238-9924

ПОСМОТРЕТЬ НА GOOGLE КАРТАХ

4 | Суперцентр Уолмарт | Вы можете найти практически все для отдыха на курорте Walt Disney World Resort в огромном супермаркете Walmart, который расположен недалеко от шоссе 192 (также известного как Мемориальное шоссе Ирло Бронсона) в Киссимми и менее чем в 8 милях от Дисней-Спрингс. Этот так называемый «гипермаркет» сочетает в себе преимущества как супермаркета с полным спектром услуг (включая мясо и птицу, деликатесы, выпечку, замороженные продукты, продукты, молочные продукты и свежие морепродукты), так и огромного универмага в одном месте. Помещения также включают центр автосервиса, аптеку и центр зрения. Суперцентр Walmart открыт ежедневно с 6:00 до 23:00.

ГДЕ: 2855 N. Old Lake Wilson Road, Киссимми, Флорида 34747 | ВОЗ: (407) 606-0109

ПОСМОТРЕТЬ НА GOOGLE КАРТАХ

5 | АЛДИ | Часть растущей сети ALDI, которая базируется в Германии и насчитывает более 1.Этот недорогой продуктовый магазин в Киссимми, насчитывающий 900 магазинов в 36 штатах и ​​около 10 000 магазинов в 20 странах мира, находится недалеко от шоссе 192 и менее чем в 11 км от Всемирного центра отдыха Уолта Диснея. Aldi известна собственной линейкой товаров, сверхнизкими ценами, системой аренды тележек с небольшим возвращаемым залогом и декором «без излишеств». Он открыт ежедневно с 9 утра до 9 вечера.

ГДЕ: 5296 Мемориальное шоссе У. Ирло Бронсона, Киссимми, Флорида 34746 | ВОЗ: (855) 955-2534

ПОСМОТРЕТЬ НА GOOGLE КАРТАХ

” This Whole Foods Market location is open daily from 8 AM to 10 PM. Highlights include freshly baked breads, butcher’s cut room, mochi bar, a “world-class” beer and wine selection, squeeze-your-own orange juice machine, custom cakes and floral arrangements, gift baskets, café seating and grocery delivery. Whole Foods Market lies within bustling Phillips Crossing, which is also home to Anthony’s Coal Fired Pizza, Seito Sushi and Golf Galaxy, among others.</p> <p><strong>WHERE:</strong> Phillips Crossing, 8003 Turkey Lake Road, Orlando, FL 32819 <strong>| WHO: </strong>(407) 355-7100</p> <p>VIEW ON GOOGLE MAPS</p> <blockquote data-instgrm-permalink=» https:=»» www.=»» src=»/800/600/https/cdn.vox-cdn.com/uploads/chorus_asset/file/6546123/2016-05-25-365-009.0.jpg»/>

инстаграм.com/p/BFmSV-anoKi/?utm_source=ig_embed&utm_campaign=loading” data-instgrm-version=”12″/>

7 | Супер цель | Как и Walmart Supercenter (№ 4), Super Target представляет собой сочетание продуктового магазина и универмага, расположенное в Киссимми, всего в 7 милях от Диснейуорлда, которое может стать настоящим раем для покупок для семей, которые хотят сэкономить на отдыхе в Диснейленде. уходи. Помещения включают аптеку CVS и Starbucks. Он открыт ежедневно с 8:00 до 23:59.Кстати, первый магазин Target открылся в Розвилле, штат Миннесота, в 1962 году, а сегодня в США насчитывается 1868 магазинов Target.

ГДЕ: 4795 West Irlo Bronson Memorial Highway, Киссимми, Флорида 34746 | ВОЗ: (407) 594-0029

ПОСМОТРЕТЬ НА GOOGLE КАРТАХ

8 | Вава | Открыт круглосуточно. Wawa сочетает в себе заправочную станцию, круглосуточный магазин, продовольственный рынок и кофейню. Отель Wawa идеально расположен всего в 3,2 км от Дисней-Спрингс, недалеко от Апопка-Вайнленд-роуд. Это отличное место, где можно начать утро с чашечки дымящегося горячего чая и закусок на завтрак перед тем, как отправиться в тематические парки Disney World.Wawa также предлагает свежеприготовленные бутерброды и бутерброды, салаты и тарелки, супы и гарниры, мороженое, энергетические напитки, молоко, пиво и многое другое. Первоначальный продовольственный рынок Wawa открылся в Фолсоме, штат Пенсильвания, в 1964 году, и сегодня насчитывается более 750 торговых точек во Флориде, Пенсильвании, Нью-Джерси, Делавэре, Мэриленде, Вирджинии и Вашингтоне, округ Колумбия. происходит от «индейского слова, обозначающего канадского гуся, который был найден в долине Делавэр более 100 лет назад», согласно официальному веб-сайту Wawa.Канадский гусь также появляется на официальном логотипе Wawa.

ГДЕ: 8894 Vinings Way Boulevard, Orlando, FL 32836 | ВОЗ: (407) 613-2539

ПОСМОТРЕТЬ НА GOOGLE КАРТАХ

Используйте нашу удобную карту, чтобы сориентироваться!

Увеличьте свой бюджет на еду в Disney World, не жертвуя отдыхом

Воспользовавшись легко доступными продуктовыми магазинами, которые находятся в нескольких минутах от Walt Disney World Resort, вы сможете приятно провести время с семьей, наслаждаясь едой в комфорте своей просторной виллы. А благодаря невероятной экономии, которую вы получите, если будете меньше есть вне дома, вы сможете проводить больше времени, наслаждаясь ночным развлечениями в Киссимми, лучшими достопримечательностями International Drive Orlando и захватывающим новым фильмом «Звездные войны: Край Галактики» в голливудской студии Диснея. среди других волнующих занятий в отпуске. Не забудьте спланировать заранее и узнать, сколько на самом деле стоит отпуск в Диснейленде, задолго до того, как вы отправитесь в Центральную Флориду. Удачной поездки!

СВЯЗАННАЯ СТАТЬЯ:

В Westgate Resorts , когда вы регистрируетесь, вам предстоит МНОГО всего выписаться! Ваша аренда на отпуск в Киссимми ждет! Исследуйте наши курорты в Орландо сегодня или поговорите со специалистом по планированию отпуска по телефону 888-852-2959 или 407-355-2690.

* Курорты Westgate никоим образом не связаны с достопримечательностями, описанными в этой статье. Перечисленные элементы или места актуальны на дату публикации этой статьи. Пожалуйста, позвоните или посетите соответствующий веб-сайт для получения самых последних предложений и деталей.

Другие интересующие страницы с тегами: отели Орландо возле Диснея, курорты возле универсальных студий Орландо, курорт Лейк-Буэна-Виста, курорты Киссимми, отели Киссимми, отели Орландо, курорты Орландо, курортные отели, места для отдыха

Вот где стоят правила ношения масок для тематических парков и магазинов Центральной Флориды

ОРЛАНДО, Флорида. — В соответствии с обновленным руководством Центров по контролю и профилактике заболеваний для тех, кто полностью вакцинирован, многие места пересмотрели и обновили свои правила использования масок в магазинах или тематических парках здесь, в Центральной Флориде.

Руководство CDC упростило ношение масок на открытом воздухе в толпе и даже в большинстве помещений, хотя рекомендуется продолжать носить маски в людных помещениях.

[СВЯЗАННО: Как найти пункты вакцинации против COVID-19 во Флориде для лиц в возрасте 12 лет и старше ]

Несмотря на новости, возвращающие нормальную жизнь во многих местах, у людей есть вопросы и опасения по поводу обновленного руководства. News 6 передал ваши вопросы медицинским экспертам, которые ответили на них.

Объявление

Вот где стоят правила ношения масок в магазинах и тематических парках:

АЛДИ

Компания заявила, что с 18 мая клиентам не нужно носить маски с 18 мая, это только для полностью вакцинированных клиентов.

С 26 мая сотрудники, прошедшие полную вакцинацию, не должны будут носить покрытие для лица.

Лучшая покупка

Компания заявила, что полностью вакцинированные клиенты и сотрудники не должны носить маски, сообщает WCCO.

Костко

Компания объявила, что членам и гостям, которые полностью вакцинированы, больше не нужно будет носить маски в магазинах.

«Мы не будем требовать доказательства вакцинации, но мы просим участников ответственно и уважительно сотрудничать с этой пересмотренной политикой», — говорится на веб-сайте компании.

Объявление

CVS

По состоянию на 14 мая CVS заявила, что пересматривает свою политику в отношении ношения масок, и до тех пор, пока не будет принято решение, маски будут по-прежнему требоваться в магазинах наряду с социальным дистанцированием.

Мир Диснея

Курорт объявил, что маски для лица будут необязательными в местах общего пользования на открытом воздухе, но гости по-прежнему должны будут носить свои маски при входе и во всех достопримечательностях, во всех театрах, у входа в театр, в транспорте и во всех помещениях.

Фреско и Мас

В пресс-релизе компания объявила, что полностью вакцинированные покупатели и сотрудники больше не будут обязаны носить маску в магазинах. Людям, которые не вакцинированы, все равно придется носить маски в магазинах.

Супермаркет Harveys

Полностью вакцинированные покупатели и сотрудники больше не будут обязаны носить маску в магазинах. Людям, которые не вакцинированы, все равно придется носить маски в магазинах.

Объявление

Публикс

Маски, объявленные цепочкой, будут необязательными для тех, кто полностью вакцинирован. Покупатели, которые не полностью вакцинированы, по-прежнему должны носить маску для лица во время покупок.

Клуб Сэма

Маски больше не потребуются клиентам и сотрудникам, прошедшим полную вакцинацию.Люди, которые не полностью вакцинированы, по-прежнему будут обязаны носить маску в магазинах.

SeaWorld Orlando и Discovery Cove

Полностью вакцинированные люди не должны будут носить маски в SeaWorld Orlando, но парки не будут требовать доказательств наличия вакцины, говорится в сообщении. Discovery Cove также будет находиться под тем же руководством.

Объявление

Старбакс

Компания заявила, что маски не являются обязательными для полностью вакцинированных клиентов.

Цель

Согласно веб-сайту компании, последний раз обновленному 17 мая, магазины Target больше не будут требовать, чтобы полностью вакцинированные гости и члены команды носили маски в магазинах, за исключением случаев, когда это требуется местными постановлениями.

Универсал Орландо

Гостям, посещающим Universal Orlando, больше не нужно будет носить маски на улице, а тем, кто полностью вакцинирован, больше не нужно будет носить маски в помещении. «Хотя мы не будем требовать доказательства вакцинации, мы ожидаем, что наши гости будут соблюдать эту пересмотренную политику и использовать маски для лица, если они не были вакцинированы», — говорится в сообщении курорта.

Объявление

Уолгринз

19 мая компания обновила свою политику, больше не требуя от полностью вакцинированных клиентов носить маски в своих магазинах, если только это не предписано местным законодательством.

Уолмарт

Полностью вакцинированные клиенты или работники Walmart больше не должны будут носить маску, если только законы штата или местные законы не предписывают иное, согласно веб-сайту компании.

Вава

Полностью вакцинированные клиенты не обязаны носить маски в Wawa. В компании заявили, что сотрудники продолжат носить маски.

Винн-Дикси

Компания объявила, что полностью вакцинированные покупатели и сотрудники больше не будут обязаны носить маску в магазинах. Людям, которые не вакцинированы, все равно придется носить маски в магазинах.

Copyright 2021 by WKMG ClickOrlando – Все права защищены.

90 000 Торговые центры и торговые центры г. Казани

Несомненно, среди искушенных и неискушенных туристов есть любители шоппинга, которые относятся к той категории людей, для которых отдых часто ассоциируется с шопингом. Это могут быть и сувениры на «память», и приятные мелочи «себе любимому или близкому человеку», и подарки для любимых и дорогих людей.Особенно приятно купить что-то новое в другой стране или в другом городе. Предлагаем посетить торговые центры Казани как самостоятельно, так и в организованном порядке, с предоставлением трансфера. Приятного Вам шоппинга и море впечатлений!

---

КОЛЬЦО, ТОРГОВО-РАЗВЛЕКАТЕЛЬНЫЙ КОМПЛЕКС

В торгово-развлекательном комплексе «Кольцо» можно приобрести вещи от ведущих мировых производителей – так что каждый сможет найти магазин по душе, удовлетворяющий все его желания. Здесь находится кинотеатр «Каро фильм», который состоит из 6 залов, в каждом из которых посетителю предлагается посмотреть мировые премьеры российского и зарубежного кино.

Для желающих сделать покупки одежды или обуви имеется большое количество магазинов популярных сетей, таких как Zarina, Savage, Oodji и др. Также в центре можно найти парфюмерию и косметику в магазинах «Рив Гош» и «Л’Этуаль». Также стоит обратить внимание на супермаркет Кольцо. Помимо магазинов и бутиков, описанных выше, в здании расположены такие заведения, как студия экспресс-маникюра «Бурлеск», сеть фаст-фуда, химчистка, туристическое агентство, бильярдный клуб и многое другое.Центр имеет 7 входов с разных сторон. Среди них вход с улицы Пушкина и еще два с улицы Петербургской, при входе со стороны КГФЭИ и подземного перехода, а также два входа со стороны выхода со станции метро «Площадь Тукая». Торговый комплекс имеет две прогулочные террасы – на втором и третьем этажах, с которых можно любоваться красотами исторической части Казани. А постоянные акции, конкурсы и скидки добавляют привлекательности посещению для посетителей.

Расположен по адресу:
420107, г. Казань (Вахитовский р-н), Республика Татарстан ул. Санкт-Петербург, 1

Ближайшие станции метро:
Площадь Габдуллы Тукая (44 м.), Кремль (1440 м.), Суконная Слобода (1529 м.)

Часы работы Звонок: ежедневно: 10:00-22:00

---

СУВАР ПЛАЗА / СУВАР ПЛАЗА

Suvar Plaza — крупный торгово-развлекательный центр общей площадью 33 000 кв.М.

Концепция Suvar Plaza призвана совместить шоппинг и отдых, предоставить максимум возможностей для отдыха и развлечений. Suvar Plaza представляет собой четырехэтажный комплекс с оригинальной архитектурой, построенный по принципу «Пассаж» с тремя Атриумами. Имеется интегрированная парковка с выездом на каждый этаж.

ТЦ «Сувар Плаза» объединяет более 70 магазинов, расположенных как внутри здания, так и на прилегающей территории. Партнером центра стал крупный универмаг модной немецкой одежды «Холдинг Центр».Холдинг-центр представляет такие бренды, как: Marc Aurel, s.Oliver, Steilman, Betty Barclay, Luisa Cerano, Bianca, Bugatti, Tom Tailor, QS. Также второй этаж дополняют такие магазины, как: «Торговый дом «Сатурн», где представлено более 39 брендов немецкой одежды, как для женщин, мужчин, так и для детей. А также магазины: Glenfield, ROY Gardeur, Fine Flare, BSB, Пол и Акула. В торговом центре представлены такие известные бренды, как Sephora, Patricia Pepe, Furla, Mariella, Balliza, Societta, Servalli, Joy Park, Glance, Jiordano, Palmetta.

Весь четвертый этаж комплекса «Сувар Плаза» оборудован только для развлечений. Каждый, независимо от возраста, найдет здесь то, что ему наиболее интересно. В комплексе 9 авторских кафе, где вы можете выбрать кухню по душе.

Еще одним преимуществом комплекса является мультиплекс GRAND CINEMA, рассчитанный на 980 мест. Впервые не только в Казани, но и в России в мультиплексе «GRAND CINEMA» один из залов оснащен оборудованием SimEx – Iwerks для показа фильмов в формате 4D!

Расположен по адресу:
420107, г. Казань (Вахитовский р-н), Республика Татарстан ул.Спартаковская, 6 (на пересечении ул. Спартаковская и Х. Такташ)

Ближайшие станции метро:
Суконная слобода (819 м), площадь Габдуллы Тукая (861 м), Кремль (2281 м)

Время работы: ежедневно: 10:00-22:00

---

ГУМ, ТОРГОВЫЙ ЦЕНТР

ТЦ «ГУМ» — главный универмаг города, расположен в самом центре Казани на пересечении пешеходной улицы Баумана и главной транспортной артерии центральной части города, ул.Пушкин.

В шестиэтажном ГУМе, на площади более 13 000 квадратных метров, уютно расположились лучшие бренды одежды, обуви, аксессуаров мировых и европейских брендов, ювелирные и часовые салоны, парфюмерия и косметика.

Рестораны и кафе предлагают широкий выбор блюд европейской, восточной, русской, татарской, мексиканской, китайской, сирийской кухни.

Торговый центр оборудован уютной охраняемой автостоянкой, с удобной навигацией и въездами в торговый центр, рассчитанной на 100 автомобилей. Въезд на стоянку расположен с ул. Профсоюз. Для вашего удобства на парковке есть удобная автомойка, практически единственная в центре города. Вы можете оставить свой автомобиль, насладиться покупками, а высокопрофессиональные специалисты автомойки приведут ваш автомобиль в порядок. Один из лучших фитнес-центров России «АЛЕКС фитнес» расположен на 5-м этаже.

На площади 2000 квадратных метров расположен монобрендовый магазин «lady&gentleman CITY2. Здесь представлены известные мировые бренды одежды: ORSA, LIUJO, Baldesarini, DKNY, PierreCardin.ХУГО БОСС. Betty Barclay, MarinaDetalli, GODE, Snow Queen Lady Charm – одежда для девушек аппетитных размеров Парфюмерия и косметика представлены магазином RIVE Gauche в премиальном формате.

Расположен по адресу:
420111, г. Казань (Вахитовский район), Республика Татарстан
ул. Баумана, 51 (самый центр Казани, на пересечении ул.Баумана и Пушкина)

Ближайшие станции метро:
Площадь Габдуллы Тукая (282 м), Кремль (1201 м), Суконная Слобода (1768 м)

Режим работы ГУМа: ежедневно: 10:00-22:00

---

МЕГА КАЗАНЬ / МЕГА КАЗАНЬ

Семейный торговый центр МЕГА Казань — крупнейший торговый центр Казани. МЕГА предлагает широчайший выбор магазинов под одной крышей и доступные цены, что создает отличные впечатления от покупок. Есть гипермаркеты и магазины, предлагающие казанцам самые разные товары, от детских игрушек до мебели и садового инвентаря. В МЕГА есть ИКЕА, Бахетле, Декатлон, ОБИ, М.Видео, Л’Этуаль, ИЛЬ ДЕ БОТЭ, Снежная королева, МОДИС, United Colors of Benetton, Zara, Берчка, Мекс, Ойшо, Страдивариус, Pull & Bear, Манго и многие другие. другие.MEGA создает максимально комфортную атмосферу для покупок.Всегда найдется уютное местечко, где можно спокойно отдохнуть между покупками. Помимо магазинов на территории комплекса расположены многочисленные кафе и рестораны: итальянский ресторан «Иль Патио», японский ресторан «Планета Суши»; рестораны быстрого питания McDonald’s, Sbarro, Kebab House; кафе «Шоколадница», «Кофейня», «Шиколат». На территории МЕГИ есть каток, а также представления на центральной сцене для детей и взрослых. Для детей есть три площадки.В ИКЕА есть детская комната, где можно оставить детей на время посещения магазина ИКЕА.

Расположен по адресу:
МЕГА Казань / Мега Казань: 420100, г. Казань (Приволжский район), Республика Татарстан ул. проспект Победы, 141

Ближайшие станции метро:
Горки (2665 м.)

МЕГА Казань / Мега Казань режим работы: Пн-Чт: 10:00-22:00, Пт: 10:00-23:00, Сб: 10:00-23:00, Вс: 10:00-22 : 00

---

ИКЕА КАЗАНЬ / ИКЕА КАЗАНЬ

ИКЕА (ИКЕА) Казань — один из розничных магазинов мировой сети, предлагающий большой ассортимент товаров для дома из Швеции по доступным ценам.Икеа Казань работает с сентября 2006 года. За 1 год гипермаркет посетили более 1,3 млн посетителей, то есть теоретически каждый житель города.

Расположен по адресу:
Икеа Казань / Икеа Казань: 420100, г. Казань (Приволжский район), Республика Татарстан ул. Проспект Победы, 141 (магазин находится в ТЦ МЕГА Казань — крупнейшем торговом центре Казани)

Ближайшие станции метро:
Горки (2665 м. )

Икеа Казань режим работы: Пн-Чт: 10:00-23:00, Пт: 9:00-00:00, Сб: 9:00-00:00, Вс: 10:00-23:00 ( Ресторан: вс-чт: 9:00-22:30, пт-сб: 9:00-23:30)

---

ОЛИМП, ТОРГОВО-РАЗВЛЕКАТЕЛЬНЫЙ КОМПЛЕКС

Расположенный в самом центре Приволжского района ТРЦ «Олимп» по праву можно назвать сердцем Приволжского района.

ТЦ Олимп» есть:

Расположен по адресу:
г. Казань, Приволжский район, ул.Рихард Зорге, 66

Ближайшие станции метро:
Проспект Победы (253 м.), Горки (1769 м.)

Время работы:
ежедневно: 10:00-22:00

---

ТАНДЕМ, ТОРГОВО-РАЗВЛЕКАТЕЛЬНЫЙ КОМПЛЕКС

Тандем – один из самых любимых и посещаемых комплексов в городе.

Здесь, наряду с ведущими операторами основных направлений торговли, индустрии отдыха и развлечений, такими как гипермаркет «КАРУСЕЛЬ», магазины «Эльдорадо», «Спортмастер», «Детский мир», а также девятизальный кинотеатр «Киномакс», Развлекательный центр «Аттракцион». «, семейный развлекательный центр «Fun City», более 100 магазинов открывают свои двери для посетителей центра.Такие известные бренды, как «Adidas», «Wild Orchid», «Motivi», «Naf Naf», «Calzedonia», «Intimissimi», «Penny Black», «Colin`s», «BHS (British House, бесплатная парковка для 1300 мест, постоянная охрана комплекса

«Тандем» готов удовлетворить любые желания своих посетителей. Здесь вы найдете как модные вещи, так и милые сувениры, сможете сделать необходимые покупки для дома, вкусно пообедать и отлично провести время в кругу семьи или друзей. А вашим детям не придется скучать на игровой площадке, пока вы ходите по магазинам или отдыхаете.

Расположен по адресу:
420066, г. Казань (Московский район), Республика Татарстан, ул. Ибрагимова, 56

Ближайшие станции метро:
Козья Слобода (517 м.), Яшлек (979 м.), Северный вокзал (2401 м.)

Время работы: ежедневно: 10:00-22:00

---

ЮЖНЫЙ, ТОРГОВО-РАЗВЛЕКАТЕЛЬНЫЙ ЦЕНТР (ТРЦ ЮЖНЫЙ)

Торгово-развлекательный центр «Южный» в Казани — новый, уникальный проект благодаря своей концепции торгового курорта. Комфортный и благоприятный микроклимат, тропические растения и приятное музыкальное сопровождение подчеркивают атмосферу шоппинг-курорта и создают отличное настроение.

ТРЦ Южный это:

• более 100 магазинов известных брендов
• Кинотеатр Киномакс: 7 уютных залов, 3 из которых в формате 3D
• Семейный развлекательный центр FunCity: организованы занятия для детей в возрасте 2-16 лет. Детская площадка расположена на 2 этаже ТРЦ Южный в зоне фуд-корта, предназначена для самых маленьких посетителей
• Детский клуб «Солнышко», в котором несколько раз в неделю проходят организованные занятия английским языком, театрализованные представления, конкурсы и веселые старты.

Торгово-развлекательный центр «Южный» расположен в спальном районе, на одной из основных транспортных магистралей города. Торговый центр отличает удобная планировка, высокие стандарты обслуживания ТРЦ, высокий уровень мер по обеспечению комплексной безопасности, разнообразие дополнительных услуг: бесплатная парковка, комнаты матери и ребенка, стоянка для хранения тележек, бесплатные автобусы. , вызов такси на стойке информации, удобство для посетителей с ограниченными возможностями.возможности: (подъезды, подъемное оборудование (лифты, траволаторы), парковочные места, инвалидная коляска на ресепшн, места в кинотеатре).

Адрес:
420100, г. Казань (Советский район), Республика Татарстан, проспект Победы, 91

Время работы: ежедневно: 10:00-22:00

---

PARK HOUSE, ТОРГОВО-РАЗВЛЕКАТЕЛЬНЫЙ ЦЕНТР

С первых дней работы Park House стал одним из самых популярных мест для отдыха и шоппинга среди жителей и гостей столицы.. ТРЦ Park House был открыт в 2007 году в Ново-Савиновском районе, на одной из самых оживленных магистралей города.

Торгово-развлекательный комплекс «Парк Хаус» площадью 70 000 кв.м. расположен на правом берегу Казанки; в радиусе 10-минутной транспортной доступности проживает более 500 тыс. человек. Близость городского парка Победы повышает привлекательность ТРЦ Park House, в частности, для семейного отдыха в выходные дни.

Расположен по адресу:
420124, г. Казань (Ново-Савиновский р-н), Республика Татарстан ул.пр. Ямашева, 46

Ближайшие станции метро:
Козья Слобода (1860 м.), Яшлек (2241 м.), Северный вокзал (2668 м.)

Часы работы ежедневно: 10:00-22:00

---

ЦУМ, ТОРГОВЫЙ ЦЕНТР

Сегодня ЦУМ — это современный Торговый центр города, который расположен в историческом центре Казани. Торговый центр включает в себя самые современные магазины, супермаркет «Бахетле», кафе и столовую. Только в ЦУМе вы всегда найдете самый большой выбор необычных подарков и сувениров.Удобное расположение, просторная парковка и подъездные пути созданы для удобства посетителей.

Расположен по адресу:
420202, г. Казань (Вахитовский район), Республика Татарстан, ул. Москва, 2

Ближайшие станции метро:
Кремлевская (432 м.), площадь Габдуллы Тукая (1606 м. ), Козья Слобода (2779 м.)

ЦУМ Режим работы: ежедневно: 9:00-21:00

---

ТЦ Гулливер (ТЦ Гулливер)

ТЦ «Гулливер» (ТРЦ «Гулливер», г. Казань) на проспекте Ямашева вместе с ТЦ «Савиново», гипермаркетом «Карусель» и дисконт-центром XL является частью большого комплекса, построенного для обеспечения горожан всем необходимым.

Четыре этажа Gulliver Center заполнены рядами всевозможных товаров: бытовая техника и электроника, одежда и обувь, все для детей, нижнее белье, кожгалантерея и многое другое. Имеется многоуровневый паркинг на 618 машиномест.

Расположен по адресу:
420126, г. Казань (Ново-Савиновский р-н), Республика Татарстан ул. Ямашева, 95

Время работы: ежедневно: 10:00-21:00

---

ТК BAHETLE (ГИПЕРМАРКЕТ ДОМАШНИХ ПРОДУКТОВ)

Сеть «Бахетле» — лидер розничного рынка и одно из крупнейших предприятий Татарстана.Гипермаркет «Бахетле», развлекательный комплекс «Латина», японский ресторан «Канпай», фудкорт-зона четырех операторов, Л’Этуаль, Красный Куб, Adidas.

Расположен по адресу:
420126, г. Казань (Ново-Савиновский р-н), Республика Татарстан ул. Ямашева, 71а

Ближайшие станции метро:
Козья Слобода (2530 м.)

Время работы: ежедневно: 9:00-23:00

---

ТЦ ПРОСПЕКТ (ТОРГОВЫЙ ЦЕНТР ПРОСПЕКТ)

С момента открытия ТЦ «Проспект» зарекомендовал себя как один из самых популярных торговых центров Поволжья.Удобное расположение на одной из самых оживленных магистралей города – на проспекте Победы, непосредственная близость к станции метро «Проспект Победы» и большое количество маршрутов общественного транспорта позволяют легко добраться до торгового центра.

Расположен по адресу:
420138, г. Казань (Приволжский регион), Республика Татарстан ул. проспект Победы, 50а

Ближайшие станции метро:
Проспект Победы (146 м.), Горки (1575 м.)

Время работы: ежедневно: 9:00-22:00

---

XL, ТОРГОВЫЙ ЦЕНТР

XL по праву является не только самым крупным торгово-развлекательным комплексом в республике, но и самым капиталоемким. XL позиционирует себя как крупный дискаунтер-центр. В торговом районе XL расположены десятки магазинов, ресторанов, развлекательный комплекс, кинотеатры и многое другое. Работают дисконтные магазины спортивной одежды и обуви – «Адидас» и «Спортмастер», дисконтные магазины «Золла», «5 КАРМАНОВ», крупнооптовый магазин одежды «СТОК ЦЕНТР» и другие. Товары доступны по сниженным ценам в течение всего года. , а не только во время сезонных распродаж. Также на территории ТЦ расположены магазины бытовой техники, кинотеатр «Волшебное кино» и зона фуд-корта.Рядом с торговым центром есть бесплатная парковка и крытая, платная парковка.

Расположен по адресу:
421001, г. Казань (Ново-Савиновский р-н), Республика Татарстан, ул. пр. Ямашева, 97

XL Время работы: ежедневно: 10:00-22:00

Строительный гипермаркет ОБИ: товары для дачи, сада, дома и ремонта: каталог ОБИ

ОБИ — крупнейшая сеть гипермаркетов «сделай сам» (DIY) и лидер по количеству услуг для покупателей в России. Уже более 15 лет мы стараемся помочь вам изменить свое жилое пространство к лучшему: построить дом, начать ремонт в квартире, проявить себя в дизайне интерьера или обустроить приусадебный участок. Каждая ваша идея может быть реализована с помощью материалов, оборудования, инструментов, мебели и аксессуаров из каталога ОБИ.

На сегодняшний день в интернет-магазине и гипермаркетах ОБИ представлено более 45 000 товаров ведущих мировых брендов, надежные товары российских производителей и собственные торговые марки ОБИ, которые можно приобрести только у нас.В каждом из 28 гипермаркетов есть все для дома, дачи и сада. Мы предлагаем не только качественную продукцию, но и подробные инструкции, советы и рекомендации специалистов, которые помогут реализовать любой ваш проект.

ОБИ сегодня это:

• • 28 гипермаркетов в 14 городах России

Открыты гипермаркеты ОБИ в Москве и Московской области, Санкт-Петербурге, Волгограде, Волжском, Брянске, Екатеринбурге, Казани, Краснодаре, Нижнем Новгороде, Омске, Рязани, Саратове, Сургуте, Туле. Зона доставки охватывает населенные пункты в пределах 50 км от черты города.

• • Все для строительства и ремонта

Каталог ОБИ включает в себя широкий ассортимент товаров для строительства, ремонта и внутренней отделки: строительные материалы, керамическая плитка, напольные покрытия, лакокрасочные материалы, электроинструменты и многое другое. Обратите внимание на собственные бренды, которые эксклюзивно представлены в ОБИ – ОБИ, LUX-TOOLS, CMI.

• • Более 25 услуг

В гипермаркетах ОБИ вы можете заказать распиловку древесины, тонировку, дизайн интерьера и другие услуги.Многие наши услуги не имеют аналогов в других сетях DIY. Узнайте больше об услугах ОБИ.

Вы можете зарезервировать товар на сайте и забрать его в ближайшем строительном гипермаркете ОБИ или оформить заказ с доставкой на дом в удобное для Вас время.

Это строительный гипермаркет в вашем смартфоне. Выбирайте товары для ремонта, дома и дачи, когда вам удобно, узнавайте об акциях и планируйте списки покупок. Установите мобильное приложение ОБИ, чтобы совершать покупки было еще проще.

Придайте креативности дизайну интерьера и декору

В интернет-магазине и гипермаркетах ОБИ вы можете выбрать новые обои, обновить кухонную мебель, душевую или ванную, домашний текстиль или найти аксессуары на свой вкус, которые сделают интерьер более уютным. Шоу-румы в отделах кухонь, декоративной плитки и сантехники помогут найти вдохновение для перемен, покажут, как использовать современные тенденции в дизайне интерьера, познакомят с самыми интересными материалами в нашем ассортименте.

• • Вам не хватает профессионального совета, чтобы воплотить свои мечты в жизнь? В разделе «Мир полезных советов ОБИ» мы собрали множество креативных решений и пошаговых инструкций. Это настоящая энциклопедия ремонта, в которой вы найдете полезные советы и интересные идеи.
• • Зарегистрируйтесь на сайте DIY.obi.ru, общайтесь, обменивайтесь мнениями, делитесь собственным опытом, задавайте вопросы. Полезный функционал на сайте может помочь воплотить ваш проект в жизнь.
• • Приходите на мастер-классы в гипермаркеты ОБИ. Вы научитесь правильно укладывать ламинат и плитку, наносить штукатурку и краску, разводить сухой раствор и клеить обои. В отделе «Садовый рай» сотрудники ОБИ дадут консультацию по выбору растений и семян, рекомендации по уходу за дачным участком

Строительный гипермаркет ОБИ желает Вам приятных покупок! Мы работаем, чтобы сделать вашу жизнь комфортнее. При возникновении вопросов по ассортименту или услугам обращайтесь на горячую линию по телефону: 8 800 500-80-80.

90 000 отзывов, адрес, время работы, расположение на карте, посещаемость. Страница 2

Универмаг Fix Price, 420127, Республика Татарстан, г. Казань, ул. Дементьева, 72:
220 отзывов
пользователей и сотрудников, подробная информация об адресе, режиме работы, местоположении на карте, посещаемости, фото, меню, телефоне и огромное количество другой подробной и полезной информации

Адрес: улица Дементьева, д. 72, г. Казань, Республика Татарстан, 420127

Телефон: 8 (800) 775-35-15

Расположение на карте

Время работы

Понедельник	09:00-21:00
вторник	09:00-21:00
Среда	09:00-21:00
Четверг	09:00-21:00
Пятница	09:00-21:00
Суббота	09:00-21:00
Воскресенье	09:00-21:00

Отзывы

Платон Архипов

Доступные цены

3 месяца назад

Саня Бобров

очень нужный магазин

4 месяца назад

Энн Санна

Вообще я люблю этот магазин.

6 месяцев назад

Наталья Легкова

Ях
э…
Форма

10 месяцев назад

Иван Парников

вежливый персонал

4 месяца назад

Павел Дуууууууудкин

Норма

5 месяцев назад

Алексей Ипполитов

Все по одной цене))

3 месяца назад

Вика Лукьянова

Интересный ассортимент

4 месяца назад

Женя Саницкая

Неправильный график работы!!!!

7 месяцев назад

Анна Матвеева

Товар не о чем!

4 месяца назад

Александр Логунов

Узкие проходы

3 месяца назад

Филипп Ильичев

Сервис для девушек. Отличная работа !!!

3 месяца назад

Катя Белка

неплохо .

4 месяца назад

Оксана Редина

Китай по цене Китая

3 месяца назад

Кристина Колосова

????

7 месяцев назад

Илья Михайлин

Отлично и недорого

3 месяца назад

Владимир Дорохин

Огонь

3 месяца назад

Полина Андреева

пойдет

3 месяца назад

Екатерина Ермоченко

Идеально!!!

10 месяцев назад

Мария Палилова

Всегда есть выбор

2 месяца назад

Олег Михалев

Да ваще норм и парковка и магазины

3 месяца назад

Александр Петрухин

Продукт разбросан

8 месяцев назад

Александр Афанасьев

рупий

1 месяц назад

Василий Семенов

3 месяца назад

Юлия Бикашева

4 месяца назад

Иван Евсиков

2 месяца назад

Татьяна Жигалова

3 месяца назад

Александра Бум

9 месяцев назад

Екатерина Минкина

3 месяца назад

Сергей Машутин

3 месяца назад

Анастасия Митюкова

2 месяца назад

Наталья Кузнецова

8 месяцев назад

Дарья Бандуренко

3 месяца назад

Андрей Ри

3 месяца назад

Валерий Яковлев

2 месяца назад

Андрей Майков

1 месяц назад

Виталий Сергеев

3 месяца назад

Андрей Скабелин

5 месяцев назад

Вэнни колбаса

9 месяцев назад

Светлана Крупницкая

6 месяцев назад

Андрей Кураксин

5 месяцев назад

Дмитрий Архиповский

2 месяца назад

Мириам Чехова

4 месяца назад

Евгения Боровская

6 месяцев назад

Женя Ильин

9 месяцев назад

Александр Кузьминых

4 месяца назад

Оля Королева

9 месяцев назад

Инна Рожкова

4 месяца назад

Мария Стог

2 месяца назад

Илья Салита

1 месяц назад

Популярные места из категории Универмаг

Садовый измельчитель травы и веток

Полезная информация

Измельчитель веток и травы поможет вам легко и быстро избавиться от мусора на дачном участке – измельчает ветки, сучья, сорняки и мелкий сор. В виде опилок отходы легче утилизировать, так как они уменьшаются в объеме. Вы можете использовать их для хозяйственных нужд, например, для удобрения почвы.

Устройство и принцип работы измельчителя веток

Измельчитель садовой травы и веток состоит из корпуса с воронкой, в которой закреплена режущая или измельчающая система. У разных моделей они свои: ножи подходят для мягких веток и травы, модели с турбиной или с ножевым валом – для толстых веток.Мусор загружается в воронку и проталкивается шпателем, чтобы пользователь не поранился. За счет движения режущего оборудования ветки измельчаются – опилки выходят из отверстия, расположенного в нижней части корпуса. Чтобы их не приходилось снимать, на измельчитель мусора можно установить мешок или пластиковый ящик — это предусмотрено конструкцией.

Преимущества использования

• Поддержание сайта в чистоте. Чтобы спиленные ветки не портили ландшафт и чтобы их не сжечь, лучше использовать измельчитель мусора.
• Мобильность оборудования. Практически все измельчители травы имеют колеса для перемещения по участку. Установку легко подкатить туда, где свалены ветки, и приступить к работе.
• Практичная утилизация отходов. Измельченную траву можно добавлять в компост для удобрения почвы. Опилки пригодятся для укрытия растений на зиму и в хозяйстве для содержания животных.

Параметры выбора

Тип источника питания. Для домашнего сада вы можете выбрать электрический измельчитель отходов.Работает от однофазной сети, подключается через удлинитель к розетке в доме. Для лесопарков подойдет бензиновый измельчитель веток, который не зависит от электроснабжения. Его производительность позволяет измельчать крупные ветки диаметром до 70 мм.

Мощность. Влияет на производительность оборудования. Для удобства сравнения бензиновых и электрических моделей она указана в киловаттах. Для частных нужд агрегаты вместимостью до 2 – 2.используется 5 кВт. В сфере коммунального хозяйства и лесопарков требуется мощность 10 – 20 кВт.

Толщина ветвей. У разных моделей максимальный диаметр ответвлений может достигать от 30 до 75 мм. Выбирайте наиболее подходящую машину в зависимости от типа мусора на участке. Есть модели, предназначенные для работы с мягкими кустарниками, листьями и травой — в них нельзя рубить ветки толщиной более 2,5 — 3 мм.

В нашем интернет-магазине вы можете купить садовый измельчитель веток по доступной цене.Мы предлагаем модели ведущих производителей: AL-KO, Bosch, Viking, Gardena и др. Выберите наиболее подходящую вам и оформите заказ на нашем сайте. Вы получите оборудование с доставкой по адресу или в пункт выдачи заказов.

История ГУМа — РИА Новости, 01.03.2020

Вся торговая площадь была поделена между торговцами, но не на магазины, а на салоны с хорошей мебелью, обилием зеркал и богатым убранством. В 322 отделах магазина, расположенных на трех этажах, продавались практически все группы промышленных и продовольственных товаров.В то время это был элитный магазин — шелковые и парчовые ткани братьев Сапожниковых, часы Михаила Калашникова, кондитерская Абрикосовых, парфюмерия Brocard.

Для привлечения большего числа покупателей торговый центр предложил дополнительные услуги. Открыто отделение Международного Московского банка, гравировальная и ювелирная мастерские, парикмахерская, стоматологический кабинет, почта, ресторан.

В мае 1891 года Генрих Брокар, обладатель богатой коллекции картин, редких книг и антиквариата, выставил свою коллекцию в арендованных помещениях Верхних торговых рядов.С 1895 года в строю проводятся музыкальные вечера.

В Верхние торговые ряды приходили не только за покупками, здесь проводили время, отдыхали, развлекались. Покупателям были предоставлены переводчики, носильщики, камера хранения, стойка информации, гардероб. Для посетителей были организованы концерты, на которые были приглашены известные артисты.

В 1917 году, после Октябрьской революции, торговля была закрыта, товары реквизированы, а в здании разместился Наркомат продовольствия.В строю склад для реквизированных продотрядов и столовая для советских служащих.

В 1920-е годы, в эпоху нэпа, Верхние торговые ряды сдавались в аренду. 1 декабря 1921 года Ленин подписал «Положение о Государственном универсальном магазине (ГУМ)», ставшее символом НЭП. ГУМы появились во многих городах страны.

В 1930 году ГУМ снова был закрыт, в здании разместились министерства и ведомства.

Согласно Генеральному плану реконструкции Москвы, принятому в 1935 году, Красная площадь должна была быть расширена за счет сноса ГУМа, но этот проект так и не был реализован.

24 декабря 1953 года ГУМ был реконструирован и открыт для посетителей. Это был крупнейший магазин в СССР. На его открытие выстраивались огромные очереди, которые регулировались специальными нарядами полиции. В универмаге было 11 отделов: текстиль, готовые платья, обувь, трикотаж и белье, хозяйственные товары, мебель и ковры, меха и головные уборы, канцтовары и игрушки, товары культурного назначения.

Общий ассортимент товаров составил более 30 тысяч наименований.

В 1985 году была завершена очередная реконструкция здания, а в 1987 году к нему был пристроен Елисеевский продовольственный магазин.

В декабре 1990 года ГУМ был преобразован в Открытое акционерное общество (ОАО) «Торговый дом ГУМ», с 1996 года – ОАО «Торговый дом ГУМ».

В 2002 году «Перекресток» выкупил 10% акций ГУМа, а в 2003 году увеличил свой пакет до контрольного.

В 2004 году «Альфа-Групп» (в лице Торгового дома «Перекресток») продала контрольный пакет (более 50,2%) Торгового дома ГУМ группе Bosco di Ciliegi, одному из лидеров российского рынка одежды класса люкс.

По договору с Москомнаследием, заключенному в 2004 году, Bosco di Ciliegi арендовала здание ГУМа до 2042 года.В 2011 году Росимущество заключило новый договор аренды с группой Bosco di Ciliegi до 2059 года.

С 2006 года на Красной площади открыт ГУМ-Каток.

С 2007 года в центре ГУМа вновь открыт фонтан, запечатленный как в официальной хронике ХХ века, так и на миллионах частных фотографий. Отреставрирован кинозал, вошедший в историю отечественного кинематографа. На внешнем фасаде реализован уникальный проект подсветки.

Гастроном №1 возрожден с дизайном, одеждой продавца и некоторыми классическими советскими товарами 1950-1960-х годов. Кафе Фестивальное и Столовая №57 выполнены в советском стиле.

В декабре 2011 года полностью отреставрирована дореволюционная комната отдыха (предбанник), отделанная мрамором и гранитом.

Открыт охраняемый девятиэтажный паркинг общей площадью 17 тысяч квадратных метров на семи надземных этажах и двух подземных.

Продолжить чтение

границ | Активация рецепторов P2X7 в перитонеальных и менингеальных тучных клетках, обнаруженная при поглощении органических красителей: возможные пуринергические триггеры нейровоспаления в мозговых оболочках

Введение

Тучные клетки являются хорошо известными участниками аллергических реакций и играют важную роль в воспалении в различных тканях (Galli and Tsai, 2012). При активации тучные клетки выделяют множество веществ, таких как биогенные амины, гистамин и серотонин, ферменты β-гексозаминидаза, химаза и триптаза, а также ряд провоспалительных цитокинов и факторов роста (Wernersson and Pejler, 2014). Конкретный профиль этих секретируемых агентов определяет тип воспалительных реакций в окружающих тканях. Примечательно, что тучные клетки являются тканевыми резидентами, а их морфология и функциональная роль зависят от ткани в зависимости от местного микроокружения и запускающих стимулов (Galli et al., 2011). Следовательно, данные, полученные для одной популяции тучных клеток, нельзя просто экстраполировать на другой тип тучных клеток.

В последнее время большое внимание уделяется роли менингеальных тучных клеток как пускового фактора приступа мигрени. Было высказано предположение, что дегрануляция тучных клеток, расположенных в тканях мозговых оболочек, способствует передаче болевых сигналов при мигрени (Levy, 2009, 2012; Kilinc et al., 2017). Однако основная недостающая часть информации в этой гипотезе касается природы эндогенного триггера дегрануляции тучных клеток в мозговых оболочках in situ .

Пуринергическая гипотеза мигрени, первоначально предложенная Бернстоком (1981), была дополнена более поздней гипотезой, предполагающей роль АТФ-зависимых Р2Х3-рецепторов в возникновении боли при мигрени (Гиниатуллин и др., 2008; Егуткин и др., 2016). ; Захаров и др., 2016). Однако, учитывая наличие нескольких типов АТФ-рецепторов в тканях мозговых оболочек, полный спектр АТФ-зависимых механизмов при мигрени остается неполным. Например, хорошо известно, что внеклеточный АТФ активирует управляемые лигандом рецепторы P2X7, присутствующие в большинстве иммунных клеток, что приводит к высвобождению множества провоспалительных цитокинов и активации инфламмасом (Sperlágh and Illes, 2014; Franceschini et al., 2015; Бернсток, 2016 г.; Кармакар и др., 2016). В соответствии с этим животные с нокаутом рецептора P2X7 имеют притупленный воспалительный ответ и не могут развить определенные типы боли (Chessell et al. , 2005). В отличие от других типов иммунных клеток роль рецепторов P2X7 в тучных клетках мало изучена. Тем не менее, есть доказательства роли АТФ-опосредованного воспаления, зависимого от тучных клеток, через рецепторы P2X7 в кишечнике (Kurashima et al., 2012). Рецепторы P2X7 также охарактеризованы в тучных клетках человека LAD2, полученных от пациента с тучноклеточным лейкозом (Wareham and Seward, 2016).Однако до сих пор недостаточно информации о роли рецепторов P2X7 в активации менингеальных тучных клеток, которые являются потенциальными участниками мигрени.

В этом исследовании мы разработали новую модель культивируемых тучных клеток мозговых оболочек и, используя комбинацию различных методов, включая измерение проточной цитометрии, мы показали, что тучные клетки, полученные из брюшной полости и мозговых оболочек, экспрессируют АТФ-зависимую экспрессию. рецепторы P2X7 и проницаемы для органических молекул. Опосредованная АТФ дегрануляция менингеальных тучных клеток может быть ответственна за активацию волокон тройничного нерва и местное нейровоспаление в тригеминоваскулярной системе, связанное с приступом мигрени.

Материалы и методы

Животные

Эксперименты проводились на мышах-самцах линии C57BL в возрасте 10–12 недель, полученных из виварии Университета Восточной Финляндии (UEF). Процедуры лечения животных были одобрены Комитетом по благополучию лабораторных животных Университета Восточной Финляндии и правительством провинции Куопио. Все эксперименты проводились в соответствии с рекомендациями Совета Европейского сообщества (Директивы 86/609/ЕЕС).Были приложены все усилия, чтобы свести к минимуму количество используемых животных и их страдания.

Выделение и идентификация тучных клеток

Для получения менингеальных тучных клеток мы адаптировали метод выделения иммунных клеток твердой мозговой оболочки, описанный McIlvried et al. (2015). Животных под глубоким авертиновым (трибромэтанол) наркозом перфузировали через восходящую аорту фосфатно-солевым буфером (PBS), pH 7,2. После декапитации голову разрезали по стреловидному шву и осторожно извлекали головной мозг из полушарий, оставляя нетронутыми мозговые оболочки.Для выделения менингеальных тучных клеток получереп осторожно соскабливали пестиком в PBS. Полученную клеточную суспензию переносили в охлажденный льдом PBS с 2% инактивированной нагреванием фетальной телячьей сыворотки (FBS) и центрифугировали при 300 х g в течение 5 мин при 4°С. Осадок ресуспендировали в PBS, фильтровали через фильтры предварительного разделения 70 мкм (Miltenyi Biotec, Германия) и использовали для идентификации тучных клеток.

Перитонеальные тучные клетки выделяли, как описано ранее Jensen et al.(2006) с небольшими изменениями для улучшения жизнеспособности клеток и сведения к минимуму исходной активации тучных клеток: процедуру лаважа проводили с использованием охлажденного льдом PBS с 2% FBS, а все последующие этапы проводили при 4°C. Полученный осадок ресуспендировали в PBS и фильтровали через фильтры 50 мкм (Sysmex CellTrics ^®, Германия).

Для характеристики проточной цитометрии перитонеальные или менингеальные клетки окрашивали антимышиным FcεRI, конъюгированным с Alexa Fluor ^® 647 (клон MAR-1, BioLegend, США), и CD117, конъюгированным с тандемным красителем APC/Cy7 (клон 2B8, Biolegend ) антитела в течение 15 мин при комнатной температуре, промывали PBS с 2% FBS (300 мкг на 5 мин) и ресуспендировали в 300 мкл свежего PBS.Жизнеспособность клеток определяли с использованием красителя SYTO 16 Green Fluorescent Nucleic Acid Stain (Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США).

Данные были получены с использованием сортировщика клеток BD FACSAria™ III (BD Biosciences, Сан-Хосе, Калифорния, США), оснащенного лазерами с длиной волны 488 и 633 нм. SYTO 16 возбуждается лазером с длиной волны 488 нм и обнаруживается через фильтр 530/30. Флуорохромы-маркеры фенотипирования возбуждаются лазером с длиной волны 633 нм и обнаруживаются через фильтры 660/20 и 780/60 для Alexa Fluor ^® 647 и APC/Cy7 соответственно.Компенсацию спилловера флуорохромов в другие каналы осуществляли с помощью одиночных окрашенных клеток.

Культивирование перитонеальных и менингеальных тучных клеток

Нефракционированные перитонеальные клетки или клетки, полученные путем соскоба с полушария черепа, центрифугировали при 300 х g в течение 5 мин при 4°С. Осадок повторно суспендировали в модифицированной Дульбекко среде Игла (DMEM) с добавлением 10% FBS, 1% антибиотиков (пенициллин/стрептомицин), 2 мМ L-глутамина, 50 мкМ B-меркаптоэтанола, 10 нг/мл мышиного рекомбинантного фактора стволовых клеток. (SCF; PeproTech, Нью-Джерси, США) и 10 нг/мл мышиного рекомбинантного интерлейкина (IL)-3 (PeproTech, Нью-Джерси, США).Через 2–3 недели культивирования более 98% клеток были идентифицированы как тучные клетки при окрашивании толуидиновым синим. Клетки сохраняли в культуре до 5 недель.

Окрашивание менингеальных тучных клеток толуидиновым синим

Цельные препараты мозговых оболочек получерепов были предварительно обработаны 1 мМ АТФ или без него в искусственной спинномозговой жидкости (ИЦСЖ), содержащей (в мМ): NaCl 115, KCl 3, CaCl ₂ 2, MgCl ₂ 1, NaH ₂ PO ₄ 1, NaHCO ₃ 25 и глюкоза 11; барботировали 95% O ₂ / 5% CO ₂ ) в течение 10 мин при комнатной температуре.Затем образцы фиксировали 4% параформальдегидом при 4°С в течение ночи. После промывания PBS мозговые оболочки осторожно отделяли от черепа и клали на стекло, покрытое поли-L-лизином (Polysine ^® Thermo-Scientific, США). Окрашивание толуидиновым синим (pH 2,0) проводили в соответствии со стандартным протоколом, который мы описали ранее (Levy et al., 2007; Kilinc et al., 2017). Изображения были получены с использованием микроскопа Olympus AX-TFSM (Olympus, Япония). Количество гранулированных и дегранулированных тучных клеток в каждой мозговой оболочке ( n = 5) подсчитывали в пяти случайных областях, содержащих основные ветви средней менингеальной артерии, наблюдателем, не имеющим представления о группах лечения.Тучные клетки классифицировали как дегранулированные, если они были бледными, плохо окрашивались, имели искаженные границы цитоплазмы и окружали положительно окрашенные гранулы (Шелухина и др., 2017).

Стимуляция перитонеальных и менингеальных тучных клеток с помощью АТФ

Для изучения активации рецептора P2X7 в свежевыделенных тучных клетках брюшины и мозговых оболочек клетки обрабатывали различными концентрациями АТФ и 2′,3′-О-(бензоил-4-бензоил)-АТФ (BzATP; оба от Sigma-Aldrich). , Германия).Примечательно, что BzATP более эффективен, чем АТФ, в качестве агониста рецепторов P2X7, тогда как он в равной или меньшей степени эффективен, чем АТФ, в отношении других рецепторов P2X (North and Surprenant, 2000).

АТФ-индуцированную активацию тучных клеток оценивали с использованием флуоресцентного красителя YO-PRO1 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA), который проникает в клетки через расширенный ионный канал рецептора P2X7 (Michel et al., 1999; Browne and North, 2013; Браун и др., 2013). Добавляли АТФ в конечных концентрациях 100 мкМ, 1 мМ или 5 мМ или BzATP до конечной концентрации 100 мкМ и образцы инкубировали в течение 20 минут в темноте при комнатной температуре с последующим добавлением 1 мкМ YO-PRO1.После инкубации добавляли 200 мкл свежего PBS.

Образца анализировали на клеточном сортере BD FACSAria III (BD Bioscience). YO-PRO1 возбуждается лазером с длиной волны 488 нм и обнаруживается через фильтр 530/30. Данные были представлены в виде процента положительных клеток YO-PRO1 в каждом образце, как сообщалось ранее (Karmakar et al., 2016).

Культивированные тучные клетки перед стимуляцией однократно промывали PBS Дульбекко, затем центрифугировали при 300 g в течение 5 мин при 4°C, осадок ресуспендировали в 1 мл PBS.Суспензию клеток (5×10 ⁵ клеток/мл) высевали на 24-луночные планшеты (по 100 мкл на лунку). Тучные клетки, происходящие из менингеальных клеток (MDMC), стимулировали АТФ в конечной концентрации 1 мМ в течение 5 минут при комнатной температуре. Тучные клетки, полученные из брюшины, стимулировали АТФ (100 мкМ, 1 или 5 мМ) или BzATP (100 мкМ) при комнатной температуре. Для ингибирующих экспериментов тучные клетки, полученные из брюшины, предварительно обрабатывали антагонистом P2X7 A839977 (10 мкМ) в течение 5 минут с последующей стимуляцией 1 мМ АТФ. Применение PBS использовали в качестве контроля.После инкубации тучные клетки переносили на предметные стекла микроскопа, сушили при 37°С и окрашивали толуидиновым синим. Количество интактных и дегранулированных тучных клеток подсчитывали случайным образом и вслепую в пяти полях на каждом предметном стекле. Тучные клетки определяли, как указано выше (Шелухина и др., 2017).

Покадровый анализ флуоресценции DAPI

Недавно было показано, что рецепторы P2X7 также проницаемы для красителя ДНК 4,6-диамидино-2-фенилиндола (DAPI; Bukhari et al., 2016). Мы использовали проточную цитометрию для определения динамики поглощения DAPI (возбуждение/испускание 405/450 нм) тучными клетками. Перитонеальные тучные клетки идентифицировали на основании экспрессии FcεRI и CD117, как описано выше. Образцы анализировали с использованием проточного цитометра Cytoflex, оснащенного лазерами с длиной волны 405, 488 и 638 нм (Beckman Coulter Inc., Калифорния, США). Перистальтический насос в этом устройстве позволял добавлять агонист АТФ во время сбора данных в режиме онлайн. Через 20 с после начала записи добавляли АТФ в конечных концентрациях 100 мкМ или 1 мМ.В течение 120 с было получено до 25 000 тучных клеток брюшины на образец. Все данные проточной цитометрии анализировали с использованием CytExpert Software v 1.3 или Kaluza Software v 1.5 (Beckman Coulter Inc., Калифорния, США). Включение DAPI (1 мкг/мл) измеряли, используя медианную интенсивность флуоресценции (MFI) отдельных клеток после применения АТФ или контроля. Данные независимых экспериментов проверялись на нормальность распределения по критерию Колмогорова-Смирнова ( n > 50) в каждый момент времени.

Статистический анализ

Данные были проанализированы с использованием программного обеспечения Statistica 8 (Quest Software Inc., Алисо Вьехо, Калифорния, США), Origin (Origin labs, MS, США) и GraphPad Prism 4 (GraphPad Software, Ла-Хойя, Калифорния, США). Статистический анализ проводили с использованием непараметрического критерия Манна-Уитни U , критерия Стьюдента t или одностороннего дисперсионного анализа с последующим, при необходимости, критерием множественных сравнений Даннета. Различия с p значениями менее 0,05 считались статистически значимыми. Данные представлены как среднее ± SEM.

Необработанные данные, подтверждающие выводы этой рукописи, будут предоставлены авторами без неоправданных оговорок любому квалифицированному исследователю.

Результаты

Идентификация тучных клеток

Чтобы отличить популяцию тучных клеток мышей от других типов клеток, локализованных в мозговых оболочках или в брюшной полости, определяли экспрессию FcεRI и CD117 на клеточной поверхности. FcεRI представляет собой рецептор мембраны тучных клеток, специфичный для IgE, который является мощным индуктором активации и дегрануляции тучных клеток (Rivera and Gilfillan, 2006), тогда как CD117 (также называемый c-kit) является рецептором SCF, важным для миграции тучных клеток, выживания и пролиферации (Yamazaki et al., 2015). На рисунке 1 показана стратегия стробирования нашего протокола для получения окончательной фракции тучных клеток. Таким образом, существуют точечные диаграммы светорассеяния для изолированных клеток, основанные на прямом рассеянии (FSC-A), связанном с преломлением света и размером клетки, и боковом рассеянии (SSC-A), отражающем гранулярность клеток (рис. 1A). Выбранная область на графике рассеяния света, которая устраняет мусор, была настроена на удаление агрегатов дублетных клеток (рис. 1B, C). Клетки далее разделяли на субпопуляции на основе экспрессии FcεRI и CD117 (рис. 1D, E), чтобы выделить фракцию «тучных клеток».Клетки с двойной положительной экспрессией как FcεRI, так и CD117 были идентифицированы как тучные клетки. Этот подход позволил нам идентифицировать чистую фракцию тучных клеток, которые были дополнительно протестированы с пуринергическими агонистами.

Рисунок 1 . Стратегия проточной цитометрии, используемая для идентификации тучных клеток. (A) Профиль рассеяния света для клеток на основе прямого рассеяния (FSC-A) и бокового рассеяния (SSC-A) (область настроена так, чтобы различать клетки и мусор). (B,C) Синглетная селекция на основе FSC-H по сравнению с FSC-H.FSC-A, а затем SSC-A и SSC-H, соответственно (области установлены для различения дублетов клеток). (D) Клетки были разделены на субпопуляции на основе Alexa Fluor 647-FcεRI и APC-Cy7-CD117 (область установлена ​​для различения клеток с двойной положительной реакцией и всех других субпопуляций клеток). (E) Обратное включение двойных положительных клеток на график светорассеяния FSC-A по сравнению с SSC-A. Это показывает относительный размер и гранулярность тучных клеток по сравнению с таковыми в (A) .Клетки из области «тучных клеток» использовали в дальнейшем для оценки действия АТФ на функциональность тучных клеток.

АТФ-зависимый рецептор P2X7 опосредует перитонеальную дегрануляцию тучных клеток мыши

Во-первых, чтобы оптимизировать наш технический подход, мы оценили способность АТФ активировать АТФ-зависимые рецепторы P2X7 в легкодоступных перитонеальных тучных клетках мыши с помощью YO-PRO1, который способен проникать через клеточную мембрану во время активации рецепторов P2X7 (Browne и др., 2013).Как и ожидалось, нестимулированные тучные клетки не поглощали YO-PRO1, поскольку только 8,2 ± 1,3% ( n = 11) клеток содержали YO-PRO1 (рис. 2А). Применение 1 мМ АТФ в течение 15 мин увеличивало поглощение до 37,9 ± 9,2% ( n = 8, p <0,01; рис. 2В). Специфический антагонист P2X7 A839977 (Honore et al., 2009) предотвращал индуцированное АТФ увеличение сигнала YO-PRO1 (8,7 ± 0,6%, n = 4; рис. 2C), тогда как применение агониста P2X7 BzATP (Bianchi et al., 1999 ) эффективно увеличил загрузку клеток YO-PRO1 на 32.2 ± 10,9% ( n = 5, p <0,05; рис. 2D). Затем мы продемонстрировали дозозависимое действие АТФ на поглощение YO-PRO1 (рис. 2Е). Стимуляция тучных клеток повышением концентрации АТФ приводила к увеличению поглощения YO-PRO1. Предварительная обработка антагонистом P2X7 A839977 (5 мкМ) предотвращала индуцированное АТФ включение YO-PRO1 (рис. 2E).

Рисунок 2 . АТФ индуцирует поглощение YO-PRO1 перитонеальными тучными клетками. (A–D) Репрезентативные гистограммы (интенсивность флуоресценции в зависимости отколичество клеток) включения YO-PRO1 в перитонеальные тучные клетки мышей. (A) Отрицательный контроль необработанных перитонеальных тучных клеток мыши, инкубированных с 1 мкМ YO-PRO1 в течение 15 минут ( n = 11). (B) Тучные клетки, предварительно обработанные 1 мМ АТФ в течение 15 мин и окрашенные 1 мкМ YO-PRO1 ( n = 8, p <0,01). (C) Тучные клетки в присутствии антагониста P2X7 A839977 (5 мкМ), затем стимулировали 1 мМ АТФ в течение 15 мин и окрашивали 1 мкМ YO-PRO1 ( n = 4). (D) Тучные клетки, предварительно обработанные 100 мкМ 2′,3′-O-(бензоил-4-бензоил)-АТФ (BzATP) в течение 15 мин и окрашенные 1 мкМ YO-PRO1 ( n = 5, p < 0,05). (E) Кривая доза-реакция, показывающая процент тучных клеток, которые включили YO-PRO1 после стимуляции возрастающими дозами АТФ и в присутствии антагониста P2X7 A839977 (5 мкМ). Среднее значение ± SEM (однофакторный дисперсионный анализ с последующим тестом множественных сравнений Даннета).

Затем мы реконструировали временной ход АТФ-индуцированных ответов P2X7, что позволило нам охарактеризовать ранние события активации рецепторов P2X7.Применение 100 мкМ АТФ на перитонеальных тучных клетках мышей вызывало небольшое увеличение флуоресценции DAPI к 120 с (рис. 3A, D, E), тогда как в образцах, обработанных 1 мМ АТФ, наблюдалось сильное усиление флуоресценции DAPI в течение 120 с записи. время (рис. 3B,D,E). Специфические антагонисты рецептора P2X7 предотвращали стимулирующий эффект 1 мМ АТФ на флуоресценцию DAPI (рис. 3C-E).

Рисунок 3 . АТФ индуцирует поглощение 4,6-диамидино-2-фенилиндола (DAPI) тучными клетками брюшины. (A–C) Репрезентативные точечные диаграммы [время в зависимости от интенсивности флуоресценции DAPI (1 мкг/мл)], полученные из перитонеальных тучных клеток мышей, стимулированных 100 мкМ и 1 мМ АТФ, 1 мМ АТФ в присутствии 150 нМ P2X7 антагонист A839977 (точечные диаграммы A , B и C соответственно). Ось X представляет время (секунды) с начала сбора образца, АТФ добавляли через 20 с; ось Y представляет относительную флуоресценцию DAPI (логарифмическая шкала). (D) Объединенные данные интенсивности флуоресценции DAPI для перитонеальных тучных клеток мышей ( n = 3), стимулированных 100 мкМ и 1 мМ АТФ и 1 мМ АТФ + 150 нМ антагониста P2X7 A839977 соответственно. (E) Гистограммы, показывающие флуоресценцию DAPI в трех различных моментах времени до и после применения 100 мкМ АТФ (белый), 1 мМ АТФ (черный) отдельно или 1 мМ АТФ в присутствии 150 нМ антагониста P2X7 A839977 (серый). Среднее ± SEM, n = 3, * p = 0,049 (парная выборка Стьюдента t — тест).

В дополнение к методу проточной цитометрии мы подтвердили действие АТФ на культивируемые перитонеальные тучные клетки с помощью морфологического анализа (рис. 4). В контрольных условиях большинство тучных клеток были интактными, имели плотные, компактные, непрерывные цитоплазматические границы и не имели большого количества окружающих гранул (рис. 4А).Применение 1 мМ АТФ (рис. 4B) или 100 мкМ BzATP (рис. 4C) увеличивало количество тучных клеток с размытыми контурами и многочисленными гранулами вокруг клеток, что свидетельствует о дегрануляции. Примечательно, что даже 100 мкМ АТФ значительно усиливали дегрануляцию тучных клеток (на 37,1 ± 1,5%, n = 4, p = 0,0013). Однако гораздо более высокий уровень дегрануляции наблюдался при 1 мМ и 5 мМ АТФ. В соответствии с этим агонист P2X7 BzATP (100 мкМ) эффективно дегранулировал большинство тучных клеток.Предварительная обработка антагонистом P2X7 A839977 (10 мкМ) подавляла АТФ-индуцированную дегрануляцию (рис. 4D). Таким образом, согласно данным проточной цитометрии, два агониста (АТФ и BzАТФ) индуцировали значительную дегрануляцию перитонеальных тучных клеток, опосредованную рецепторами Р2Х7.

Рисунок 4 . Дегрануляция культивируемых тучных клеток брюшины, индуцированная АТФ и BzАТФ. (A–D) Окрашивание культивируемых перитонеальных тучных клеток толуидиновым синим (20×). (A) Контрольные условия, (B) применение 1 мМ АТФ, (C) применение 100 мкМ BzATP, (D) предварительная обработка антагонистом P2X7 A839977 (10 мкМ), а затем 1 мМ Стимуляция АТФ. (E) Гистограммы, показывающие процент дегранулированных тучных клеток в контроле после применения АТФ (100 мкМ, 1 мМ, 5 мМ) и BzATP (100 мкМ), а также после предварительной обработки A839977 (10 мкМ) с последующим применение 1 мМ АТФ. Калибровочный стержень 100 мкм. Среднее ± SEM, n = 4, ** p ≤ 0,005 по сравнению с контролем, *** p < 0,0001 по сравнению с контролем, ^## p < 0,0001 по сравнению с 1 мМ АТФ группа (одна -way ANOVA с последующим тестом множественных сравнений Даннета).

Длительное культивирование обогащенных зрелых менингеальных тучных клеток

Чтобы оценить активацию рецептора P2X7 на более подходящей модели тучных клеток, мы разработали метод культивирования менингеальных тучных клеток мыши. Свежевыделенные менингеальные клетки были идентифицированы на предметных стеклах, окрашенных толуидиновым синим, по их округлой форме и среднему размеру 12 мкм (рис. 5А). Гранулы менингеальных тучных клеток всегда метахроматически окрашивались толуидиновым синим в фиолетовый цвет. Все остальные менингеальные клетки, их ядра и ядра тучных клеток окрашивались ортохроматически в синий цвет (рис. 5А).В течение 1 месяца наблюдений культуры были значительно обогащены тучными клетками (рис. 5А-Г). Через 1 нед культивирования все клетки имели сходные морфологические признаки: округлую форму со средним размером 7,95±1,1 мкм и плохо визуализируемые гранулы в цитоплазме. Цитоплазма окрашивалась в тона от светло-голубого до синего в присутствии толуидинового синего (рис. 5Б). Через 2 недели культивирования культивируемые клетки сохраняли округлую форму и имели средний размер 7,33 ± 0,96 мкм.Через две и три недели в цитоплазме этих клеток были видны гранулы (рис. 5С, красные стрелки). Через 3 недели культивирования клетки приобрели округлую форму, а цитоплазма была заполнена метахроматически (фиолетовыми) окрашенными гранулами (рис. 5D). Зрелые тучные клетки, полученные из культуры, были неоднородны по размерам (средний размер клеток 7,3 ± 0,97 мкм) и плотности метахроматических гранул. MDMC сохраняли такую ​​морфологию до 3 месяцев культивирования.

Рисунок 5 .Культивируемые менингеальные тучные клетки имеют типичную морфологию тучных клеток. (A–D) Окрашивание толуидиновым синим (A) свежевыделенных менингеальных тучных клеток, (B) клетки , выдержанные в культуре в течение 1 недели, (C) 2 недели (красные стрелки показывают присутствие обоих синие и фиолетовые гранулы в цитоплазме тучных клеток) и (Г) 3 недели. (E–H) Культивированные тучные клетки идентифицировали по их поверхностной экспрессии FcεRI и CD117. Процент клеток FcεRI+CD117+ увеличивался со временем в культуре. (E) свежевыделенных клеток, (F) клеток после 1 недели культивирования, (G) клеток после 2 недель культивирования, (H) клеток после 3 недель культивирования.

Тучные клетки мыши были идентифицированы из других типов клеток, локализованных в мозговых оболочках или в брюшной полости, на основании экспрессии FcεRI и CD117 на их клеточной поверхности (рис. 5E-H). На рис. 1 показана стратегия гейтирования для выявления чистой фракции тучных клеток. Менее 1% свежевыделенных клеток из тканей мозговых оболочек были FcεRI+CD117+-положительными.К концу первой недели культивирования процент клеток FcεRI+CD117+ увеличивался до 27%, достигая более 95% ко второй неделе культивирования (рис. 5Д-З). Процент жизнеспособных тучных клеток FcεRI+CD117+ оставался выше 95% вплоть до пятой недели культивирования. Жизнеспособность культуры оставалась от 81% до 100% в течение первых 1-4 недель и снижалась до 62,4% в течение пятой недели культивирования (данные не показаны).

Рецепторы P2X7 экспрессируются в менингеальных тучных клетках мыши

Затем, чтобы исследовать тканеспецифические свойства тучных клеток в твердой мозговой оболочке, где они, вероятно, участвуют в запуске приступа мигрени (Levy, 2009; Kilinc et al., 2017), мы исследовали активацию рецептора P2X7 в менингеальных тучных клетках. Тучные клетки мозговых оболочек мыши идентифицировали на основе мечения CD117 и FcεRI (рис. 6А) и далее отделяли от дебриса на основе их характеристик светорассеяния (FCS-A по сравнению с SSC-A, рис. 6B). Конечная популяция содержала не менее 95% жизнеспособных менингеальных тучных клеток (рис. 6C), которые были протестированы на АТФ-индуцированную активацию P2X7. В контрольных условиях в популяции свежеочищенных клеток, полученных из мозговых оболочек, процент поглощения YO-PRO1 был низким, примерно 14.4 ± 1,9% (рис. 6D). Инкубация с 1 мМ АТФ значительно увеличила поглощение красителя (рис. 6D). Подобно клеткам брюшины, обработка антагонистом P2X7 A839977 (5 мкМ) предотвращала индуцированное АТФ поглощение YO-PRO1 (рис. 6D).

Рисунок 6 . Поглощение YO-PRO1 тучными клетками мозговых оболочек в ответ на АТФ. (A) Стратегия гейтирования методом проточной цитометрии, используемая для идентификации менингеальных тучных клеток мыши, сначала основана на мечении CD117 и FcεRI. (B) Последующее удаление дебриса путем селекции тучных клеток на основе светорассеивающих свойств FSC и SSC. (C) Жизнеспособные менингеальные тучные клетки гейтируются с помощью красителя жизнеспособности SYTO 16 Green Fluorescent Nucleic Acid Stain. (D) Стимуляция АТФ приводила к увеличению YO-PRO1-позитивных клеток ( n = 8), тогда как предварительная обработка антагонистом P2X7 A839977 ингибировала включение YO-PRO1 ( n = 5). Среднее ± SEM, ( n = 10 в контроле), * p = 0,016 (критерий Манна-Уитни U ).

Чтобы выяснить, оказывает ли пуринергическое воздействие функциональное воздействие на высвобождение активных компонентов из гранул, мы проверили дегрануляционную способность 1 мМ АТФ на тучных клетках мозговых оболочек мыши в цельных менингеальных тканях препарата, что было определено с помощью окрашивания толуидиновым синим (Levy et al., 2007; Килинк и др., 2017). В наивных изолированных мозговых оболочках большинство тучных клеток были интактными (рис. 7А), тогда как АТФ запускала дегрануляцию множественных тучных клеток, локализованных вблизи менингеальной артерии (рис. 7В). На фигуре 7C показаны объединенные данные, полученные от пяти мышей, указывающие на способность АТФ вызывать значительную дегрануляцию тучных клеток в твердой мозговой оболочке. Эти результаты были дополнительно подтверждены в культуре менингеальных тучных клеток с помощью морфологического анализа. В контрольных условиях большинство тучных клеток были интактными (рис. 7D), а применение 1 мМ АТФ значительно увеличивало количество дегранулированных тучных клеток (рис. 7E, F).

Рисунок 7 . Дегрануляция нативных и культивируемых менингеальных тучных клеток с помощью АТФ. (A, B) Окрашивание тулуидиновым синим тучных клеток в цельных препаратах мозговых оболочек (20×). Тучные клетки в основном интактны в контрольных условиях (A) . После обработки 1 мМ АТФ количество дегранулированных тучных клеток значительно увеличилось (B) . (C) Гистограммы, показывающие долю дегранулированных клеток в контроле и после применения 1 мМ АТФ.Калибровочная полоса 20 мкм. Среднее ± SEM, n = 5, ** p = 0,008. (D,E) Окрашивание культивируемых тучных клеток толуидиновым синим (40×). (D) Контрольные условия, (E) , применение 1 мМ АТФ. (F) Гистограммы, показывающие процент дегранулированных тучных клеток в контроле и после применения 1 мМ АТФ. Калибровочная полоса 50 мкм. Среднее ± SEM, n = 4, *** p <0,0001 по сравнению с контролем (критерий Манна-Уитни U ).

Обсуждение

Здесь мы впервые показываем, что тучные клетки грызунов, полученные из мозговых оболочек, можно выращивать, созревать и обогащать в долгосрочной культуре.Способность гранул тучных клеток проявлять метахромазию, то есть отображать цвет, отличный от цвета нанесенного красителя, является ключевой особенностью зрелых тучных клеток. В тучных клетках млекопитающих отличительное свойство метахромазии объясняется присутствием гепарина, богатого серой гликозаминогликана, в секреторных гранулах тучных клеток (Härmä and Suomalainen, 1951). На основании этих данных синее (ортохроматическое) окрашивание гранул тучных клеток, которое наблюдалось через 1 неделю культивирования, может свидетельствовать о незрелости.Появление фиолетовых (метахроматических) гранул в цитоплазме клеток через 2 недели культивирования свидетельствует об активном созревании. Наличие метахроматических гранул почти во всех клетках через 3 недели культивирования указывает на функциональную зрелость тучных клеток в этот момент времени.

Высокоаффинный рецептор IgE (FcεRI) и CD117 (c-Kit), которые мы использовали для проточной цитометрии, являются классическими маркерами тучных клеток. И предшественники тучных клеток, и зрелые тучные клетки экспрессируют эти маркеры клеточной поверхности (Dahlin et al., 2015). Этим объясняется высокий процент двойных положительных клеток уже через 2 недели культивирования, когда было идентифицировано лишь несколько клеток, содержащих метахроматически окрашенные гранулы в присутствии толуидинового синего. Сравнивая полученные данные проточной цитометрии с данными окрашивания толуидиновым синим, можно сделать вывод, что MDMC достигли зрелости через 3 недели культивирования. В этот момент времени более 95% живых клеток в культуре экспрессируют FcεRI и CD117 и содержат в цитоплазме метахроматически окрашенные фиолетовым (зрелые) гранулы.На основании этих результатов мы рекомендуем использовать культуру MDMC через 3–5 недель после начала культивирования.

Используя эти и легкодоступные тучные клетки брюшины, мы охарактеризовали роль АТФ-зависимых рецепторов P2X7, связанных с поглощением органических красителей. Способность АТФ дегранулировать менингеальные тучные клетки предполагает, что этот внеклеточный пуринергический мессенджер может действовать как эндогенный триггер нейровоспаления при различных неврологических расстройствах, включая менингит и мигрень.АТФ-зависимые рецепторы P2X7 являются важными триггерами нейровоспаления в различных тканях. Активация рецепторов P2X7 в тучных клетках связана с высвобождением провоспалительных цитокинов, таких как IL-1β, IL-18 (Ferrari et al., 2006) и IL-6 (Shieh et al., 2014), которые вносят существенный вклад нейропатической и воспалительной боли (Chessell et al., 2005; Sperlágh and Illes, 2014). Роль инфламмасомы NLRP3 и высвобождения IL-1β также была показана при пневмококковом менингите (Zwijnenburg et al., 2003), что свидетельствует о вовлечении в эту патологию рецепторов Р2Х7. Однако недавнее тестирование с антагонистами P2X не выявило значительных изменений во времени течения заболевания, что авторы объяснили подавлением экспрессии рецепторов АТФ и снижением концентрации эндогенного АТФ (Zierhut et al., 2017). В отличие от бактериального менингита, при асептической форме этого заболевания, так называемом медикаментозном асептическом менингите, головная боль является ведущим симптомом (Holle, Obermann, 2015), что тесно связывает боль тройничного нерва и менингеальное нейровоспаление.

рецептора P2X7 экспрессируются в большинстве иммунных клеток (Junger, 2011; Burnstock and Boeynaems, 2014). Например, они были обнаружены в макрофагах (Moore, MacKenzie, 2007), моноцитах (Humphreys, Dubyak, 1998; Grahames et al., 1999), нейтрофилах (Chen et al., 2004; Christenson et al., 2008), и различные подтипы Т-клеток (Frascoli et al., 2012; Rissiek et al., 2015). Однако рецепторы P2X7 менее изучены в тучных клетках, которые часто участвуют в аллергических реакциях и нейровоспалении.Тем не менее, в одном исследовании сообщалось, что рецепторы P2X7 в тучных клетках играют роль в воспалении кишечника (Kurashima et al., 2012). Другое недавнее очень подробное исследование с использованием метода визуализации кальция продемонстрировало функциональную экспрессию различных рецепторов P2X, включая подтип P2X7, в тучных клетках LAD2 человека (Wareham and Seward, 2016). Преимущество нашего исследования заключается в том, что мы сосредоточились на методах, которые позволили нам проверить функцию рецепторов P2X7, которая имеет решающее значение для инициации нейровоспаления, и сравнили две разные популяции нативных тучных клеток.

Активация рецепторов P2X7 в различных клетках часто сопровождается поглощением относительно крупных органических молекул, таких как флуоресцентный краситель YO-PRO1, который в норме не проникает через клеточную мембрану (Michel et al., 1999; Jindrichova et al., 2015; Бухари и др., 2016). До сих пор остается предметом споров, проникают ли эти красители через расширенный ионный канал рецептора P2X7 или проникают через другие белки, ассоциированные с рецептором P2X7 (Rassendren et al., 1997; Jiang et al., 2005; Pelegrin and Surprenant, 2006).Недавние исследования, однако, показали, что проницаемость рецептора P2X7 для органических катионов, таких как YO-PRO1, является внутренним свойством самого ионного канала, определяемым длинным СООН-концевым хвостом, недавно описанным Di Virgilio et al. (2018). Таким образом, наши данные по измерению флуоресценции YO-PRO1 и DAPI отражают, собственно, функцию ионного канала рецептора Р2Х7, открытого BzАТФ или АТФ.

В текущем проекте с помощью проточной цитометрии мы обнаружили, что стимуляция тучных клеток АТФ приводила к опосредованному рецептором P2X7 притоку YO-PRO1 в мышиные перитонеальные и менингеальные тучные клетки.Это поглощение ингибировалось антагонистом P2X7 A839977, что предполагает прямое или косвенное участие рецепторов P2X7. Аналогичный эффект наблюдался при использовании агониста P2X7 BzATP и при относительно высоких концентрациях АТФ. В совокупности эти данные указывают на ключевую роль рецептора P2X7 в активации тучных клеток.

Одним из нововведений нашего исследования было использование метода проточной цитометрии для оценки проницаемости мембраны тучных клеток для красителя DAPI в режиме реального времени после стимуляции 1 мМ АТФ.Мы обнаружили, что стимуляция АТФ вызывала приток DAPI в перитонеальные тучные клетки мышей за десятки секунд, и этот эффект полностью предотвращался антагонистом P2X7 A839977. Эти данные указывали на ключевую роль рецепторов Р2Х7 в активации тучных клеток.

Сообщалось, что человеческий рецептор P2X7 имеет по существу более высокое сродство к нескольким агонистам, чем его эквивалент мыши (Chessell et al., 1998). Это говорит о том, что процессы, наблюдаемые нами в клетках мыши, могли быть лучше представлены в тканях человека.Кроме того, у человека существуют различия в свойствах поглощения красителя рецептором Р2Х7 из-за высокого полиморфизма, характерного для этого типа рецепторов. Интересно, что этот однонуклеотидный полиморфизм может быть связан (или, вероятно, даже определяет) с более низкой болевой чувствительностью (Sorge et al., 2012). Последнее наблюдение, важное для персонифицированной медицины боли, подчеркивает необходимость дальнейшего изучения нативных рецепторов P2X7 у отдельных пациентов с целью оценки риска формирования болевого состояния.

Тучные клетки наиболее известны своей способностью высвобождать множество различных активных веществ.Ранняя фаза активации тучных клеток приводит к высвобождению заранее сформированных провоспалительных медиаторов из секреторных гранул с последующим синтезом липидных мессенджеров, цитокинов и хемокинов (Boyce, 2005; Lorentz et al., 2012; Wernersson and Pejler, 2014). . Классические медиаторы, такие как гистамин и серотонин, высвобождаются с помощью различных механизмов, таких как дегрануляция (Dvorak, 1992; Moon et al., 2014) и конститутивный или регулируемый экзоцитоз (Lacy and Stow, 2011; Lorentz et al., 2012; Moon et al. , 2014).Дегрануляция тучных клеток может быть спровоцирована различными стимулами, такими как антигены, мономерный IgE, нейропептиды (субстанция P, CGRP) и вирусы, задействующие различные рецепторы и различные сигнальные механизмы (Moon et al., 2014). Недавно среди ряда стимулов АТФ стал важным триггером активации тучных клеток (Wareham and Seward, 2016). Эти авторы показали опосредованную P2X7 активацию и дегрануляцию тучных клеток в тучных клетках LAD2 путем оценки потоков кальция и высвобождения β-гексозаминидазы (Wareham and Seward, 2016).В нашем исследовании мы продемонстрировали не только то, что АТФ активирует нативные рецепторы Р2Х7 в менингеальных тучных клетках, но также показали, что аппликация АТФ индуцирует высвобождение гранул из этих клеток.

Согласно распространенному мнению, мигренозная боль инициируется сенсибилизированными окончаниями тройничного нерва в мозговых оболочках в составе так называемой тригеминоваскулярной системы (Moskowitz, 1993; Levy, 2012; Zakharov et al., 2015). Мозговые оболочки заполнены множеством тучных клеток, локализованных в «стратегических локусах» вблизи основных сосудов мозговых оболочек и нервных волокон, что свидетельствует о функциональном взаимодействии (Levy, 2009; Kilinc et al., 2017). Хотя у нас нет прямых доказательств того, что дегрануляция тучных клеток вызывает активацию окончаний тройничного нерва, есть данные, свидетельствующие о том, что активация тучных клеток играет пусковую роль в основном процессе сенсибилизации (Levy et al., 2007; Kilinc et al. , 2017). В предыдущем исследовании мы разработали пуринергическую гипотезу мигрени, первоначально предложенную Бернстоком (1981), показав, что внеклеточный АТФ активирует первичные афференты в мозговых оболочках (Егуткин и др., 2016). До сих пор остается открытым вопрос: каков источник внеклеточного АТФ при мигрени? Существует множество потенциальных источников высвобождения АТФ в нервной системе, включая астроциты, нейроны, тромбоциты и эндотелиальные клетки (Pangršič et al., 2007; Burnstock and Ralevic, 2014). В мозговых оболочках основными источниками АТФ могут быть сами сосуды, нервы и тучные клетки. Вызванная АТФ дегрануляция тучных клеток, вероятно, имеет место при мигрени с аурой, поскольку корковая распространяющаяся депрессия сама по себе является индуктором дегрануляции менингеальных тучных клеток и открытия каналов паннексина-1 (Karatas et al., 2013), которые проницаемы для АТФ (Dahl, 2015). Примечательно, что существует петля положительной обратной связи, обеспечивающая АТФ-индуцированное высвобождение АТФ через паннексинов (Dahl, 2015). Эта петля может усиливать первоначальный сигнал, чтобы обеспечить уровень внеклеточной АТФ, достаточно высокий для активации рецепторов P2X7. Недавнее исследование показало, что комплекс рецепторов P2X7 и паннексинов определяет не только нейровоспаление, но и развитие распространяющейся деполяризации коры, что является ключевым процессом, лежащим в основе мигренозной ауры (Chen et al., 2017).

Мы предполагаем, что высвобожденный внеклеточный АТФ действует через пуринергические рецепторы подтипа P2X7, что приводит как к активации, так и к дегрануляции тучных клеток. Основным действующим лицом после дегрануляции менингеальных тучных клеток, по-видимому, является серотонин, сильно возбуждающий нервные окончания через лиганд-зависимые 5-HT3-рецепторы (Kilinc et al., 2017), тогда как АТФ также может действовать непосредственно на нервные окончания через рецепторов P2X3 (). Егуткин и др., 2016; Захаров и др., 2016).В совокупности эти механизмы способствуют как менингеальному нейровоспалению, так и формированию стойкой боли при мигрени.

В заключение мы показываем ведущую роль АТФ-зависимых рецепторов P2X7 в активации и дегрануляции тучных клеток, которые естественным образом находятся в двух разных компартментах тела. Учитывая растущее признание роли тучных клеток в нейровоспалении, настоящие данные могут помочь определить новые терапевтические стратегии для облегчения периферических и центральных неврологических расстройств, включая мигрень.

Вклад авторов

DN, RRG и VG участвовали в сборе данных, анализе, интерпретации и написании рукописи. MS участвовала в сборе и анализе данных. SW участвовал в сборе данных и редактировании рукописи. FT, AR и JK руководили исследованием. IK участвовал в разработке дизайна исследования, сборе данных, анализе, интерпретации и написании рукописи. ТМ и Р. Г. внесли свой вклад в разработку и контроль исследования, написание рукописи и окончательное редактирование.

Финансирование

Этот проект поддержан Финской академией (грант 277442). АР и РГ поддержаны Программой конкурентного роста Казанского федерального университета и субсидией (6.2313.2017/4.6), выделенной Казанскому федеральному университету на выполнение государственного задания в сфере научной деятельности. ТМ поддержана Академией Финляндии (грант 298071). DN и VG поддерживались программой EDUFI.

Заявление о конфликте интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Ссылки

Бьянки, Б.Р., Линч, К.Дж., Тома, Э., Нифоратос, В., Бургард, Э.С., Александр, К.М., и соавт. (1999). Фармакологическая характеристика рекомбинантных подтипов рецепторов P2X человека и крысы. евро. Дж. Фармакол. 376, 127–138. doi: 10.1016/s0014-2999(99)00350-7

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Бойс, Дж. А. (2005). Эйкозаноидные медиаторы тучных клеток: рецепторы, регуляция синтеза и патобиологические последствия. Хим. Иммунол. Аллергия 87, 59–79. дои: 10.1159/000087571

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Браун, Л. Э., Компан, В., Брэгг, Л., и Норт, Р. А. (2013). Каналы рецептора P2X7 обеспечивают прямое проникновение красителей нанометрового размера. J. Neurosci. 33, 14801–14808. doi: 10.1523/JNEUROSCI.2235-12.2013

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Браун, Л.Э., и Норт, Р.А. (2013). Промежуточные состояния активации рецептора P2X изменяют селективность нуклеотидов. J. Neurosci. 33, 14801–14808. doi: 10.1523/JNEUROSCI.2022-13.2013

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Бухари М., Берм Х. и Сэмвейс Д. С. (2016). Опосредованное ионными каналами поглощение катионных жизненно важных красителей живыми клетками: потенциальный источник ошибок при оценке жизнеспособности клеток. Клеточная биология. Токсикол. 32, 363–371. doi: 10.1007/s10565-016-9344-y

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Чен, С.P., Qin, T., Seidel, J.L., Zheng, Y., Eikermann, M., Ferrari, M.D., et al. (2017). Ингибирование комплекса P2X7-PANX1 подавляет распространяющуюся деполяризацию и нейровоспаление. Мозг 140, 1643–1656. doi: 10.1093/мозг/awx085

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Чен Ю., Шукла А., Намики С., Инсел П.А. и Юнгер В.Г. (2004). Предполагаемая осморецепторная система, которая контролирует функцию нейтрофилов посредством высвобождения АТФ, его превращения в аденозин и активации аденозиновых рецепторов А2 и Р2. Дж. Лейкок. биол. 76, 245–253. doi: 10.1189/jlb.0204066

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Chessell, I.P., Hatcher, J.P., Bountra, C., Michel, A.D., Hughes, J.P., Green, P., et al. (2005). Разрушение гена пуринорецептора P2X7 устраняет хроническую воспалительную и невропатическую боль. Боль 114, 386–396. doi: 10.1016/j.pain.2005.01.002

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Чессел, И.П., Саймон Дж., Хибелл А.Д., Мишель А.Д., Барнард Э.А. и Хамфри П.П. (1998). Клонирование и функциональная характеристика рецептора P2X7 мыши. ФЭБС Письмо. 439, 26–30. doi: 10.1016/s0014-5793(98)01332-5

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Кристенсон, К., Бьоркман, Л., Тангемо, К., и Билунд, Дж. (2008). Сывороточный амилоид А ингибирует апоптоз нейтрофилов человека через P2X7-чувствительный путь, независимый от формилпептидного рецептора типа 1. Дж. Лейкок. биол. 83, 139–148. doi: 10.1189/jlb.0507276

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Дворак А.М. (1992). Базофилы и тучные клетки: частичная дегрануляция in situ и ex vivo: возможный механизм индуцированной цитокинами функции при заболевании. Иммунол. сер. 57, 169–271.

Реферат PubMed | Академия Google

Феррари Д., Пиццирани К., Адинольфи Э., Лемоли Р. М., Курти А., Идзко М. и др.(2006). Рецептор P2X7: ключевой игрок в процессинге и высвобождении IL-1. Дж. Иммунол. 176, 3877–3883. doi: 10.4049/jиммунол.176.7.3877

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Franceschini, A., Capece, M., Chiozzi, P., Falzoni, S., Sanz, J.M., Sarti, A.C., et al. (2015). Рецептор P2X7 напрямую взаимодействует с каркасным белком инфламмасомы NLRP3. FASEB J. 29, 2450–2461. doi: 10.1096/fj.14-268714

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Фрасколи, М., Маркандалли Дж., Шенк У. и Грасси Ф. (2012). Пуринергический рецептор P2X7 управляет выбором линии Т-клеток и формирует периферические γδ-клетки. Дж. Иммунол. 189, 174–180. doi: 10.4049/jimmunol.1101582

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Галли, С.Дж., Боррегаард, Н., и Винн, Т.А. (2011). Фенотипическая и функциональная пластичность клеток врожденного иммунитета: макрофагов, тучных клеток и нейтрофилов. Нац. Иммунол. 12, 1035–1044. дои: 10.1038/ни.2109

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Гиниатуллин Р., Нистри А. и Фаббретти Э. (2008). Молекулярные механизмы сенсибилизации болевых рецепторов P2X3 медиаторами мигрени CGRP и NGF. Мол. Нейробиол. 37, 83–90. doi: 10.1007/s12035-008-8020-5

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Grahames, C.B., Michel, A.D., Chessell, I.P., and Humphrey, P.P. (1999). Фармакологическая характеристика АТФ- и ЛПС-индуцированного высвобождения IL-1β в моноцитах человека. Бр. Дж. Фармакол. 127, 1915–1921 гг. doi: 10.1038/sj.bjp.0702732

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Оноре П., Доннелли-Робертс Д., Намович М., Чжун К., Уэйд К., Чандран П. и др. (2009). Антигипералгетическая активность селективного антагониста рецептора P2X7, A-839977, утрачивается у мышей с нокаутом IL-1αβ. Поведение. Мозг Res. 204, 77–81. doi: 10.1016/j.bbr.2009.05.018

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Хамфрис, Б.Д. и Дубяк Г. Р. (1998). Модуляция экспрессии нуклеотидного рецептора P2X7 про- и противовоспалительными стимулами в моноцитах THP-1. Дж. Лейкок. биол. 64, 265–273. doi: 10.1002/jlb.64.2.265

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Дженсен Б., Суиндл Э., Иваки С. и Гилфиллан А. (2006). Генерация, изоляция и поддержание тучных клеток грызунов и линий тучных клеток. Курс. протокол Иммунол. 3:3.23. дои: 10.1002/0471142735.им0323s74

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Цзян Л.Х., Рассендрен Ф., Маккензи А., Чжан Ю.Х., Сурпренант А. и Норт Р.А. (2005). N -метил-D-глюкамин и пропидиевые красители используют разные пути проникновения в крысиные P2X ₇ рецепторы. утра. Дж. Физиол. Клеточная физиол. 289, C1295–C1302. doi: 10.1152/ajpcell.00253.2005

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Йиндричова М., Бхаттачарья А., Руперт М., Скопек П., Обсил Т. и Земкова Х. (2015). Функциональная характеристика мутантов в трансмембранных доменах рецептора P2X7 крысы, которые регулируют поровую проводимость и чувствительность к агонистам. Дж. Нейрохим. 133, 815–827. doi: 10.1111/jnc.13078

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Каратас Х., Эрденер С.Э., Гурсой-Оздемир Ю., Луле С., Эрен-Кочак Э., Сен З.Д. и др. (2013). Распространение депрессии вызывает головную боль за счет активации каналов нейронов Panx1. Наука 339, 1092–1095. doi: 10.1126/science.1231897

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Кармакар М., Кацнельсон М. А., Дубяк Г. Р. и Перлман Э. (2016). Нейтрофильные рецепторы P2X7 опосредуют зависимую от воспаления NLRP3 секрецию IL-1β в ответ на АТФ. Нац. коммун. 7:10555. doi: 10.1038/ncomms10555

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Килинк Э., Герреро-Торо К., Захаров А., Витале, К., Губерт-Олив, М., Королева, К., и соавт. (2017). Серотонинергические механизмы тригеминальной менингеальной ноцицепции: последствия мигренозной боли. Нейрофармакология 166, 160–173. doi: 10.1016/j.neuropharm.2016.12.024

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Курашима Ю., Амия Т., Ночи Т., Фудзисава К., Харагуч Т., Иба Х. и др. (2012). Внеклеточный АТФ опосредует зависимое от тучных клеток воспаление кишечника через пуринорецепторы P2X7. Нац. коммун. 3, 1034–1046. doi: 10.1038/ncomms2023

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Лейси, П., и Стоу, Дж. Л. (2011). Высвобождение цитокинов из клеток врожденного иммунитета: связь с различными путями переноса через мембрану. Кровь 118, 9–18. дои: 10.1182/кровь-2010-08-265892

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Леви, Д. (2012). Эндогенные механизмы, лежащие в основе активации и сенсибилизации менингеальных ноцицепторов: роль иммуноваскулярных взаимодействий и корково-распространяющейся депрессии. Курс. Боль Головная боль Респ. 16, 270–277. doi: 10.1007/s11916-012-0255-1

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Леви Д., Бурштейн Р., Кайнц В., Якубовски М. и Страссман А. М. (2007). Дегрануляция тучных клеток активирует болевой путь, лежащий в основе мигренозной головной боли. Боль 130, 166–176. doi: 10.1016/j.pain.2007.03.012

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Макилврид, Л. А., Боргези, Л.А. и Голд, М.С. (2015). Зависимые от пола, стресса и симпатических постганглионарных нейронов изменения экспрессии про- и противовоспалительных медиаторов в иммунных клетках твердой мозговой оболочки крысы. Головная боль 7, 943–957. doi: 10.1111/head.12596

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Мишель А.Д., Чессел И.П. и Хамфри П.П. (1999). Ионное воздействие на функцию рекомбинантного рецептора P2X7 человека. Наунин Шмидебергс. Арка Фармакол. 359, 102–109.DOI: 10.1007/pl00005328

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Мун, Т.С., Бефус, А.Д., и Кулька, М. (2014). Медиаторы тучных клеток: их дифференциальное высвобождение и задействованные секреторные пути. Перед. Иммунол. 5:569. doi: 10.3389/fimmu.2014.00569

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Московиц, Массачусетс (1993). Нейрогенное воспаление в патофизиологии и лечении мигрени. Неврология 43, S16–S20.

Реферат PubMed | Академия Google

Пангршич Т., Потокар М., Стеновец М., Крефт М., Фаббретти Э., Нистри А. и др. (2007). Экзоцитотическое высвобождение АТФ из культивируемых астроцитов. J. Biol. хим. 282, 28749–28758. дои: 10.1074/jbc.m7002

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Пелегрин П. и Сурпренант А. (2006). Паннексин-1 опосредует образование больших пор и высвобождение интерлейкина-1β с помощью АТФ-зависимого рецептора P2X7. EMBO J. 25, 5071–5082. doi: 10.1038/sj.emboj.7601378

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Рассендрен Ф., Бьюэлл Г. Н., Вирджинио К., Колло Г., Норт Р. А. и Сурпренант А. (1997). Пермеабилизирующий АТФ-рецептор, P2X7. Клонирование и экспрессия кДНК человека. J. Biol. хим. 272, 5482–5486. doi: 10.1074/jbc.272.9.5482

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Рисик Б., Хааг Ф., Бойер О., Кох-Нольте Ф. и Адриуш С. (2015). P2X7 на Т-клетках мыши: один канал, много функций. Перед. Иммунол. 6:204. doi: 10.3389/fimmu.2015.00204

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Шелухина И., Михайлов Н., Абушик П., Нуруллин Л., Никольский Э. Э. и Гиниатуллин Р. (2017). Холинергические ноцицептивные механизмы в мозговых оболочках крыс и ганглиях тройничного нерва: потенциальные последствия мигрени. Перед. Нейрол. 8:163.doi: 10.3389/fneur.2017.00163

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ши, С. Х., Генрих, А., Серхов, Т., ван Калкер, Д., и Бибер, К. (2014). P2X7-зависимое, но дифференциально регулируемое высвобождение IL-6, CCL2 и TNF-α в культивируемой мышиной микроглии. Глия 62, 592–607. doi: 10.1002/glia.22628

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Зорге Р. Э., Транг Т., Дорфман Р., Смит С. Б., Беггс С., Ричи, Дж., и соавт. (2012). Генетически детерминированное образование пор рецептора P2X7 регулирует изменчивость хронической болевой чувствительности. Нац. Мед. 18, 595–599. дои: 10.1038/nm.2710

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ямазаки С., Накано Н., Хондзё А., Хара М., Маэда К., Нишияма С. и др. (2015). Фактор транскрипции Ehf участвует в индуцированном TGF-β подавлении экспрессии FcεRI и c-kit, а также в опосредованной FcεRI активации в тучных клетках. Дж. Иммунол. 195, 3427–3435. doi: 10.4049/jimmunol.1402856

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Егуткин Г.Г., Герреро-Торо К., Килинц Э., Королева К., Ищенко Ю., Абушик П. и соавт. (2016). Нуклеотидный гомеостаз и пуринергическая ноцицептивная передача сигналов в мозговых оболочках крыс в условиях, подобных мигрени. Пуринергический сигнал. 12, 561–574. doi: 10.1007/s11302-016-9521-8

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Захаров А., Королева К. и Гиниатуллин Р. (2016). Кластерный анализ для сортировки индуцированных АТФ ноцицептивных импульсов в мозговых оболочках крыс. BioNanoScience 6, 508–512. doi: 10.1007/s12668-016-0276-z

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

Захаров А., Витале К., Килинц Э., Королева К., Фаюк Д., Шелухина И. и соавт. (2015). Поиск причин боли при мигрени: кластерный анализ спонтанных и индуцированных капсаицином импульсов в менингеальных волокнах тройничного нерва. Перед.Клетка. Неврологи. 9:287. doi: 10.3389/fncel.2015.00287

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Zierhut, M., Dyckhoff, S., Masouris, I., Klein, M., Hammerschmidt, S., Pfister, H.W., et al. (2017). Роль пуринергической сигнализации при экспериментальном пневмококковом менингите. наук. Респ. 7:44625. дои: 10.1038/srep44625

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Звейненбург, П. Дж., ван дер Полл, Т., Флоркин, С., Рурд, Дж. Дж., и Ван Фурт, А. М. (2003). Мыши с дефицитом гена рецептора IL-1 типа 1 демонстрируют ослабленную защиту хозяина от пневмококкового менингита. Дж. Иммунол. 170, 4724–4730. doi: 10.4049/jиммунол.170.9.4724

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

геновdev177428 43..53

%PDF-1.4 % 104 0 объект > эндообъект 101 0 объект >поток Acrobat Distiller 7.0 (Windows)2011-12-28T15:53:41+05:30Arbortext Advanced Print Publisher 9.1.510/W2022-01-28T12:23:19-08:002022-01-28T12:23:19-08:00application/pdf

геныdev177428 43..53

UUID:fc66b139-a4e5-4ba7-ae66-875ad58uuid:7f2bd66d-1dd2-11b2-0a00-38000841dcff конечный поток эндообъект 96 0 объект > эндообъект 98 0 объект > эндообъект 99 0 объект > эндообъект 100 0 объект > эндообъект 66 0 объект >/ExtGState>/Font>/ProcSet[/PDF/Text]>>/Rotate 0/Thumb 95 0 R/Type/Page>> эндообъект 162 0 объект >/ProcSet[/PDF/Text/ImageC]/XObject>>>/Type/Page>> эндообъект 167 0 объект [173 0 R 174 0 R 175 0 R 176 0 R 177 0 R 178 0 R 179 0 R 180 0 R 181 0 R] эндообъект 168 0 объект >поток д 287.5 0 0 75 160,75 681 см /Im0 Делать Вопрос БТ /T1_0 1 тс 10 0 0 10 332,15976 582,99982 Тм ( )Tj 0 0 1 рг -11,12 0 Тд (10.1101/гад.177428.111)Тж 0 г -16,89598 0 тд (Доступ к самой последней версии на doi:)Tj 9,78299 1 тд ( )Tj /T1_1 1 тс -1,44499 0 тд (26:)ТДж /T1_0 1 тс -2,78 0 Тд (2012, )ТДж /T1_2 1 тс -5,558 0 Тд (Генес Дев.\240)Tj /T1_0 1 тс 0 1.00001 ТД (\240 )Tj 0 1 ТД (Вивек Л. Патель, Сомдеб Митра, Ричард Харрис и др.) Tj Т* (\240 )Tj /T1_1 1 тс 15 0 0 15 52 632,99997 Тм (посттранскрипционный контроль)Tj Т* (Пространственное расположение почтового индекса РНК идентифицирует мРНК под)Tj ET 52 571 м 557 571 л 0 0 м С БТ ET БТ /T1_0 1 тс 11 0 0 11 136.942 525,99994 тм (\240 )Tj /T1_1 1 тс -3,50099 1 тд (Материал)Tj -2,77799 1,00001 Тд (Дополнительно) Tj ET БТ /T1_0 1 тс 10 0 0 10 157 538,99997 Тм (\240 )Tj 30.17685 1 тд ( )Tj 0 0 1 рг /T1_1 1 тс -30,17685 0 тд (http://genesdev.cshlp.org/content/suppl/2012/01/03/26.1.43.DC1)Tj ET БТ 0 г /T1_1 1 тс 11 0 0 11 55,66359 507 Тм (Связанное содержание)Tj ET БТ /T1_0 1 тс 10 0 0 10 157 477,99991 Тм (\240 )Tj 17,78798 1 тд ( )Tj 0 0 1 рг -17,78798 0 тд (Генес Дев. Январь, 2012 26: 110-113) Tj 0 г 0 1.00001 ТД (Майкл Дойл и Майкл А.Киблер) Tj /T1_1 1 тс 0 1 ТД (Почтовый индекс разархивирован) Tj ET БТ /T1_0 1 тс 11 0 0 11 136,942 446,99997 Тм (\240 )Tj /T1_1 1 тс -5,11299 1 тд (Ссылки)Tj ET БТ /T1_0 1 тс 10 0 0 10 157 408,99985 Тм (\240 )Tj 29,84084 1 тд ( )Tj 0 0 1 рг /T1_1 1 тс -29,84084 0 тд (http://genesdev.cshlp.org/content/26/1/43.full.html#related-urls)Tj 0 г /T1_0 1 тс 0 1.00001 ТД (Статьи цитируются в:)Tj 0 1 ТД (\240 )Tj 28.33983 1 тд ( )Tj 0 0 1 рг /T1_1 1 тс -28,33983 0 Тд (http://genesdev.cshlp.org/content/26/1/43.full.html#ref-list-1)Tj 0 г /T1_0 1 тс 0 1.00001 ТД (В этой статье цитируется 56 статей, 21 из которых доступны бесплатно по адресу:)Tj ET БТ /T1_0 1 тс 11 0 0 11 136,942 386,99997 Тм (\240 )Tj /T1_1 1 тс -3,44598 1 тд (Лицензия)Tj ET БТ /T1_1 1 тс 11 0 0 11 100,86185 360,99997 Тм (Сервис)Tj -3,16599 1 тд (оповещение по электронной почте)Tj ET БТ /T1_0 1 тс 10 0 0 10 157 352,99994 Тм (\240 )Tj 17,39696 1 тд ( )Tj 0 0 1 рг /T1_1 1 тс -4,892 0 Тд (нажмите здесь.)Tj 0 г /T1_0 1 тс -12,50496 0 тд (правый угол статьи или )Tj Т* (Получайте бесплатные оповещения по электронной почте, когда новые статьи цитируют эту статью — зарегистрируйтесь \ в поле вверху)Tj ET 52 340 м 557 340 л 0 0 м С БТ ET д 468 0 0 60 70.5 108 см -1.00001 TL /Im1 До Вопрос 52 68 м 557 68 л 0 0 м С БТ ET БТ /T1_0 1 тс 10 0 0 10 54 42 Тм (Авторское право \251 2012, издательство Cold Spring Harbour Laboratory Press)Tj ET БТ /T1_0 1 тс 8 0 0 8 504.08771 779 Тм ( )Tj 0 0 1 рг -16,44997 0 тд (Лабораторный пресс Колд-Спринг-Харбор) Tj 0 г -16,28698 0 тд (28 января 2022 г. — Опубликовано )Tj 0 0 1 рг -8,67099 0 тд (genesdev.cshLP.org)Tj 0 г -8,11399 0 Тд (Скачано с )Tj ET конечный поток эндообъект 171 0 объект >/Фильтр/FlateDecode/Высота 300/Длина 73148/Имя/X/Подтип/Изображение/Тип/XObject/Ширина 1150>>поток Hypq, lJjBa 80@бА «pRHB)CSJP(M`*jQC`Ӻ\=}Oaq’ٍ3~?ly|`#

Длинная некодирующая РНК MALAT1 способствует пролиферации и метастазированию агрессивного рака поджелудочной железы посредством стимуляции аутофагии

%PDF-1.5 % 165 0 объект > эндообъект 164 0 объект >поток Acrobat Distiller 8.1.0 (Windows)Arbortext Advanced Print Publisher 9.1.406/W Unicode2022-01-28T12:23:53-08:002016-08-16T11:44:05+05:302022-01-28T12:23:53 -08:00application/pdf

Длинная некодирующая РНК MALAT1 способствует пролиферации и метастазированию агрессивного рака поджелудочной железы посредством стимуляции аутофагии

UUID: 7f5f6e23-1dd2-11b2-0a00-a309275dc400uuid: 7f5f6e28-1dd2-11b2-0a00-810000000000 конечный поток эндообъект 163 0 объект > эндообъект 158 0 объект > эндообъект 43 0 объект > эндообъект 6 0 объект > эндообъект 118 0 объект > эндообъект 117 0 объект >/Шрифт>/ProcSet[/PDF/Текст]>>/Тип/Страница>> эндообъект 125 0 объект >/Шрифт>/ProcSet[/PDF/Текст]>>/Тип/Страница>> эндообъект 167 0 объект >/ProcSet[/PDF/Text/ImageC]/XObject>>>/Type/Page>> эндообъект 176 0 объект [182 0 Р 183 0 Р 184 0 Р 185 0 Р 186 0 Р 187 0 Р] эндообъект 177 0 объект >поток д 538.6593933 0 0 78,7513733 22,6703033 655,2486267 см /Im0 Делать Вопрос БТ /T1_0 1 тс 10 0 0 10 107,23975 538,99982 Тм (Опубликовано в Интернете 1 июля 2016 г.) Tj /T1_1 1 тс -7,72397 0 тд (Мол Рак Ther\240)Tj /T1_0 1 тс 0 1 ТД (\240 )Tj 0 1.00001 ТД (Ле Ли, Хуа Чен, Юэ Гао и др.) Tj /T1_2 1 тс 0 1 ТД (\240 )Tj /T1_3 1 тс 18 0 0 18 30 578,99994 Тм (Стимуляция аутофагии) Tj Т* (Пролиферация и метастазирование рака поджелудочной железы через )Tj Т* (Длинная некодирующая РНК MALAT1 способствует агрессивности) Tj ET 30 451 524 68 рэ 0 0 м С БТ /T1_0 1 тс 11 0 0 11 120.94202 491,99997 Тм (\240 )Tj /T1_3 1 тс -7,55696 1 тд (Обновленная версия)Tj ET БТ /T1_2 1 тс 10 0 0 10 141 483,99994 Тм (\240 )Tj /T1_0 1 тс 16.73095 1 тд ( )Tj 0 0 1 рг -15,11895 0 Тд (10.1158/1535-7163.MCT-16-0008)Тж 0 г -1,612 0 Тд (дои:) ТиДжей 0 1.00001 ТД (Доступ к самой последней версии этой статьи на:)Tj ET БТ /T1_0 1 тс 11 0 0 11 120,94202 450,99994 Тм (\240 )Tj /T1_3 1 тс -3,50099 1 тд (Материал)Tj -3,44499 1,00001 тд (Дополнительное) Tj ET БТ /T1_2 1 тс 10 0 0 10 141 453,99994 Тм (\240 )Tj /T1_0 1 тс 36.85092 1 тд ( )Tj 0 0 1 рг -36,85092 0 тд (http://mct.aacrjournals.org/content/suppl/2021/03/18/1535-7163.MCT-16-00\ 08.DC1)Тж 0 г Т* (Доступ к самым последним дополнительным материалам на:) Tj ET БТ /T1_2 1 тс 10 0 0 10 30 430,99997 Тм (\240 )Tj 0 1 ТД (\240 )Tj ET БТ /T1_2 1 тс 10 0 0 10 30 410,99997 Тм (\240 )Tj Т* (\240 )Tj ET БТ /T1_2 1 тс 10 0 0 10 30 390,99997 Тм (\240 )Tj Т* (\240 )Tj ET 30 266 524 125 рэ 0 0 м С БТ /T1_0 1 тс 11 0 0 11 120,94202 358,99997 Тм (\240 )Tj /T1_3 1 тс -5,66901 1 тд (Уведомления по электронной почте)Tj ET БТ /T1_0 1 тс 10 0 0 10 295.49963 371 тм (относится к этой статье или журналу.)Tj 0 0 1 рг -15,44996 0 тд (Зарегистрируйтесь, чтобы получать бесплатные уведомления по электронной почте)Tj ET БТ 0 г /T1_0 1 тс 11 0 0 11 120,94202 325,99994 Тм (\240 )Tj /T1_3 1 тс -6,38997 1 тд (Подписки)Tj 0,556 1,00001 Тд (Перепечатки и) Tj ET БТ /T1_0 1 тс 10 0 0 10 141 328,99994 Тм (\240 )Tj 13.46496 1 тд (.)Tj 0 0 1 рг -6,85098 0 тд ([email protected]) Tj 0 г -6,61398 0 тд (Отдел в)Tj 0 1.00001 ТД (Чтобы заказать перепечатку этой статьи или подписаться на журнал, свяжитесь с\ t Публикации AACR)Tj ET БТ /T1_0 1 тс 11 0 0 11 120.94202 303,99997 Тм (\240 )Tj /T1_3 1 тс -5,66901 1 тд (Разрешения)Tj ET БТ /T1_0 1 тс 10 0 0 10 141 265,99985 Тм (\240 )Tj 0 1 ТД (сайт с правой ссылкой. )Tj 0 1.00001 ТД (\(ССС\))Tj 0 1 ТД (Нажмите «Запросить разрешения», чтобы перейти к очистке авторских прав\ ранцевый центр)Tj 34.34991 1 тд (.)Tj 0 0 1 рг -34,34991 0 Тд (http://mct.aacrjournals.org/content/early/2016/08/16/1535-7163.MCT-16-00\ 08)Тж 0 г 0 1.00001 ТД (Чтобы запросить разрешение на повторное использование всей или части этой статьи, используйте этот li\ нк)Tj ET БТ /T1_0 1 тс 9 0 0 9 269.24255 1,99997 тм (Исследование.) Tj -2,73252 1 тд (28 января 2022 г. \251 Американская ассоциация рака, 2016 г.)Tj 0 0 1 рг -9,33596 0 тд (mct.aacrjournals.org) Tj 0 г -8,11398 0 Тд (Скачано с )Tj ET БТ /T1_0 1 тс 9 0 0 9 140,68127 769 Тм (Опубликовано в Интернете 1 июля 2016 г.; DOI: 10.1158/1535-7163.MCT-16-0008) Tj ET конечный поток эндообъект 181 0 объект >/Фильтр/FlateDecode/Высота 225/Длина 77819/Имя/X/Подтип/Изображение/Тип/XObject/Ширина 1539>>поток HMW~ 0F0n $&QK4CBܸ4A6Ꞅ%gg7@Mj,Y -$Z2cl ​​

(PDF) Удаление фармацевтических препаратов путем адсорбции с помощью монтмориллонитовой наноглины

Int.Дж. Мол. науч. 2021,22, 9670 14 из 15

12.

Вогна Д.; Маротта, Р.; Андреоцци, Р .; Наполитано, А .; d’Ischia, M. Кинетическая и химическая оценка УФ/Н

2

O

2

лечение

противоэпилептическим препаратом карбамазепином. Хемосфера 2004, 54, 497–505. [CrossRef]

13.

Ривера-Джеймс, Дж. А.; Постиго, К.; Мелгоса-Алеман, Р.М.; Асенья, Дж.; Барсело, Д.; де Альда, М.Л. Исследование фармацевтических препаратов на поверхности

и в сточных водах Куэрнаваки, Морелос, Мексика: оценка возникновения и риска для окружающей среды.науч. Общая окружающая среда.

2018

,613,

1263–1274. [CrossRef] [PubMed]

14.

Heckmann, L.H.; Хелен, AC; Хупер, Л.; Коннон, Р.; Хатчинсон, Т. Х.; Маунд, SJ; Сибли, Р.М. Хроническая токсичность ибупрофена по отношению к

Daphnia magna: влияние на особенности жизненного цикла и динамику популяции. Токсикол. лат. 2007, 172, 137–145. [CrossRef] [PubMed]

15.

Nunes, B.; Антунес, Южная Каролина; Сантос, Дж.; Мартинс, Л.; Кастро, Б. Б. Токсичный потенциал парацетамола для пресноводных организмов: головная боль

для природоохранных органов? Экотоксикол.Окружающая среда. Саф. 2014, 107, 178–185. [CrossRef]

16.

Джелич А.; Грос, М.; Джинебреда, А .; Сеспедес-Санчес, Р.; Вентура, Ф.; Петрович, М .; Барсело, Д. Появление, разделение и удаление

фармацевтических препаратов в сточных водах и осадках при очистке сточных вод. Вода Res. 2011, 45, 1165–1176. [CrossRef]

17.

Carvalho, P.N.; Пирра, А .; Басто, MCP; Алмейда, C.M.R. Эффективность систем активного ила удаления ветеринарных фармацевтических препаратов из сточных вод боен.Окружающая среда. науч. Загрязн. Рез. 2013, 20, 8790–8800. [CrossRef]

18.

Радженович, Дж.; Петрович, М .; Барсело, Д. Судьба и распределение фармацевтических препаратов в сточных водах и осадках сточных вод

при очистке обычным активным илом (CAS) и усовершенствованным мембранным биореактором (MBR). Вода Res.

2009

,43, 831–841.

[CrossRef] [PubMed]

19.

Martinez, F.; Лопес-Муньос, MJ; Агуадо, Дж.; Мелеро, Дж. А.; Арсуага, Дж.; Сотто, А.; Молина, Р.; Сегура, Ю.; Париенте, М.И.; Ревилла, А .;

и др. Объединение процессов мембранного разделения и фотокаталитического окисления для разложения фармацевтических загрязнителей.

Вода Рез. 2013, 47, 5647–5658. [CrossRef] [PubMed]

20.

Нариян Э.; Агабабеи, А .; Силланпаа, М. Удаление фармацевтических препаратов из воды с помощью процесса электрокоагуляции; влияние

различных параметров и исследования изотермы и кинетики. Сентябрь Пуриф. Технол.2017, 188, 266–281. [CrossRef]

21.

Цзян М.; Ян, В .; Чжан, З .; Ян, З .; Ван, Ю. Адсорбция трех фармацевтических препаратов на двух магнитных ионообменных смолах. J.

Окружающая среда. науч. 2015, 31, 226–234. [CrossRef]

22.

Клавариоти М.; Манцавинос, Д.; Кассинос, Д. Удаление остаточных фармацевтических препаратов из водных систем с помощью усовершенствованных процессов окисления

. Окружающая среда. Междунар. 2009, 35, 402–417. [CrossRef]

23.

Ан, Т.; Ян, Х .; Ли, Г .; Песня, В .; Купер, WJ; Nie, X. Кинетика и механизм ускоренных процессов окисления (АОП) в

деградации ципрофлоксацина в воде. заявл. Катал. B-Окружающая среда. 2010, 94, 288–294. [CrossRef]

24.

Андраде, Дж. Р.; Оливейра, М.Ф.; да Силва, MGC; Виейра, М.Г. Адсорбция фармацевтических препаратов из воды и сточных вод с использованием нетрадиционных недорогих материалов

: обзор. Инд.Инж. хим. Рез. 2018, 57, 3103–3127. [Перекрестная ссылка]

25.

Ахтар, Дж.; Амин, НАС; Шахзад, К. Обзор удаления фармацевтических препаратов из воды путем адсорбции. Десалин. Водное лечение.

2016,57, 12842–12860. [CrossRef]

26.

Стышко К.; Носек, К.; Мотак, М .; Бестер, К. Предварительный выбор глинистых минералов для удаления фармацевтических препаратов, бисфенола

А и триклозана в кислых и нейтральных водных растворах. Комптес Рендус Чим. 2015, 18, 1134–1142. [CrossRef]

27.

Сильва, А.Р.; Кавалейро, А.Дж.; Соарес, OSGP; Брага, CSN; Сальвадор, А.Ф.; Перейра, MFR; Алвес, М.М.; Перейра, Л. Детоксикация

ципрофлоксацина в анаэробном биопроцессе с добавлением магнитных углеродных нанотрубок: вклад механизмов адсорбции и

биодеградации. Междунар. Дж. Мол. науч. 2021,22, 2932. [CrossRef] [PubMed]

28.

Львов Ю.; Панчал, А .; Фу, Ю .; Фахруллин Р.; Крючкова, М.; Баташева, С.; Ставицкая, А.; Глотов, А.; Винокуров, В.Самосборка Interfacial

в композитах нанотрубок галлуазита. Ленгмюр 2019, 35, 8646–8657. [CrossRef] [PubMed]

29.

Thiebault, T. Необработанные и модифицированные глины и глинистые минералы для удаления фармацевтических продуктов из водных растворов:

Современное состояние и перспективы на будущее. крит. Преподобный Окружающая среда. науч. Технол. 2020, 50, 1451–1514. [CrossRef]

30.

Тибо, Т.; Буссафир, М.; Фужер, Л.; Дестандау, Э.; Моннин, Л.; Мильбо, С.Глинистые минералы для удаления фармацевтических препаратов:

Первичные исследования их адсорбционных свойств в реальных сточных водах. Окружающая среда. нанотехнологии. Монит. Управление

2019

,12,

100266. [CrossRef]

31.

Чжу, Р.; Чен, В.; Чжоу, В .; Си, Ю .; Чжу, Дж.; Он, Х. Адсорбенты на основе монтмориллонита для очистки воды от загрязнений: обзор

. заявл. Глина наук. 2016, 123, 239–258. [CrossRef]

32.

Массаро, М.; Коллетти, К.Г.; Лаззара, Г.; Риэла, С. Использование некоторых глинистых минералов в качестве природных ресурсов для применения в качестве носителя лекарств.

J. Функц. Биоматер. 2018, 9, 58. [CrossRef]

33.

Aguzzi, C.; Сересо, П.; Визерас, К.; Карамелла, К. Использование глин в качестве систем доставки лекарств: возможности и ограничения. заявл. Глина

Науч. 2007, 36, 22–36. [CrossRef]

34.

Park, J.H.; Шин, HJ; Ким, MH; Ким, Дж. С.; Канг, Н.; Ли, JY; Ким, К.Т.; Ли, Дж.Я.; Ким, Д.Д. Применение монтмориллонита в бентоните

в качестве фармацевтического наполнителя в системах доставки лекарств. Дж. Фарм. расследование 2016, 46, 363–375. [CrossRef] [PubMed]

35.

Pandey, S. Всесторонний обзор последних разработок материалов на основе бентонита, используемых в качестве адсорбентов для очистки сточных вод

. Дж. Мол. жидкость 2017, 241, 1091–1113. [CrossRef]

36.

Ву, В.; Ли, З .; Хонг, Х .; Инь, К .; Tie, L. Адсорбция и интеркаляция ципрофлоксацина на монтмориллоните.заявл. Глина наук.

2010

,50,

204–211. [CrossRef]

37.

Лю Н.; Ван, MX; Лю, М.М.; Лю, Ф .; Венг, Л.; Купал, Л.К.; Тан, В.Ф. Сорбция тетрациклина на органо-монтмориллонитах. J.

Опасность. Матер. 2012, 225–226, 28–35. [CrossRef]

38.

Мартин, Дж.; дель Мар Орта, М.; Медина-Карраско, С.; Сантос, Дж. Л.; Апарисио, И.; Алонсо, Э. Оценка модифицированной слюды и монтмориллонита

для адсорбции ибупрофена из водной среды.

No related posts.